| 提要 | 第1-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-52页 |
| 第一节 SAM的生物学功能 | 第14-17页 |
| ·转甲基作用 | 第14-15页 |
| ·转硫作用 | 第15-16页 |
| ·转氨丙基作用 | 第16-17页 |
| 第二节 SAM的临床应用及其药理研究 | 第17-21页 |
| ·SAM的临床应用研究 | 第17-19页 |
| ·肝病 | 第17页 |
| ·抑郁症 | 第17-18页 |
| ·关节炎 | 第18页 |
| ·其他 | 第18-19页 |
| ·SAM的药理研究 | 第19-21页 |
| ·肝病 | 第19-20页 |
| ·抑郁症 | 第20-21页 |
| ·关节炎 | 第21页 |
| 第三节 SAM的稳定性研究及其稳定性盐 | 第21-26页 |
| ·SAM的稳定性研究 | 第21-23页 |
| ·稳定性的SAM盐 | 第23-26页 |
| 第四节 SAM的制备方法 | 第26-28页 |
| ·化学合成法 | 第26页 |
| ·微生物发酵法 | 第26-27页 |
| ·酶促转化法 | 第27-28页 |
| 第五节 SAM合成酶 | 第28-34页 |
| ·不同来源SAM合成酶的特点 | 第28-31页 |
| ·大肠杆菌SAM合成酶 | 第28-29页 |
| ·酵母SAM合成酶 | 第29-30页 |
| ·哺乳动物SAM合成酶 | 第30-31页 |
| ·其它来源的SAM合成酶 | 第31页 |
| ·SAM合成酶的结构 | 第31-32页 |
| ·SAM合成酶的催化机理 | 第32-34页 |
| 第六节 甲醇营养型毕赤巴斯德酵母 | 第34-44页 |
| ·毕赤酵母表达系统的优势 | 第37-38页 |
| ·宿主菌株 | 第38-39页 |
| ·表达载体 | 第39-40页 |
| ·筛选标记 | 第40页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中的表达 | 第40-41页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中的分泌表达 | 第41-43页 |
| ·外源蛋白的翻译后修饰 | 第43-44页 |
| 第七节 酶的固定化 | 第44-50页 |
| ·固定化酶的定义及优点 | 第44-45页 |
| ·固定化的载体 | 第45页 |
| ·固定化的方法 | 第45-49页 |
| ·固定化酶的应用 | 第49-50页 |
| 本论文的研究意义及主要内容 | 第50-52页 |
| 第二章 毕赤酵母分泌表达SAM合成酶及SAM制备 | 第52-106页 |
| 第一节 序言 | 第52-53页 |
| 第二节 SAM合成酶在毕赤酵母中的分泌表达及纯化 | 第53-80页 |
| ·实验材料与仪器 | 第53-56页 |
| ·菌种和质粒 | 第53-54页 |
| ·主要试剂 | 第54页 |
| ·主要仪器设备 | 第54-55页 |
| ·培养基和主要溶液的配制 | 第55-56页 |
| ·实验方法 | 第56-70页 |
| ·构建表达质粒 | 第56-62页 |
| ·转化和筛选高拷贝重组菌 | 第62-66页 |
| ·SAM合成酶在毕赤酵母中的表达 | 第66-67页 |
| ·镍离子亲和层析法纯化SAM合成酶 | 第67-68页 |
| ·细胞密度测定 | 第68页 |
| ·SDS-PAGE检测 | 第68页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第68页 |
| ·SAM合成酶活力的测定 | 第68-69页 |
| ·HPLC法定量SAM | 第69-70页 |
| ·实验结果 | 第70-77页 |
| ·构建表达质粒 | 第70页 |
| ·鉴定重组菌株 | 第70-71页 |
| ·可能的糖基化位点分析 | 第71-73页 |
| ·SAM合成酶的分泌表达 | 第73-74页 |
| ·SAM合成酶的纯化 | 第74-75页 |
| ·SAM 合成酶的分泌表达量 | 第75-77页 |
| ·讨论 | 第77-80页 |
| 第三节 SAM合成酶反应条件的优化 | 第80-91页 |
| ·实验材料与仪器 | 第80页 |
| ·实验方法 | 第80-81页 |
| ·酶反应进程 | 第80页 |
| ·最适反应温度 | 第80页 |
| ·最适反应pH值 | 第80页 |
| ·酶反应液中底物浓度的优化 | 第80-81页 |
| ·酶反应液中其它成分浓度的优化 | 第81页 |
| ·以DL-Met取代L-Met | 第81页 |
| ·其它反应条件对酶活力的影响 | 第81页 |
| ·实验结果 | 第81-89页 |
| ·酶反应进程 | 第81-82页 |
| ·最适反应温度 | 第82页 |
| ·最适反应pH值 | 第82-84页 |
| ·酶反应液中底物浓度的优化 | 第84-86页 |
| ·酶反应液中其它成分浓度的优化 | 第86-88页 |
| ·以DL-Met取代L-Met | 第88页 |
| ·其它反应条件对酶活力的影响 | 第88-89页 |
| ·讨论 | 第89-91页 |
| 第四节 SAM合成酶性质的研究 | 第91-101页 |
| ·实验材料与仪器 | 第91页 |
| ·实验方法 | 第91-93页 |
| ·动力学性质 | 第91-92页 |
| ·温度稳定性 | 第92页 |
| ·pH稳定性 | 第92页 |
| ·阳离子、阴离子对酶稳定性的影响 | 第92页 |
| ·防止酶的热失活 | 第92-93页 |
| ·实验结果 | 第93-100页 |
| ·动力学性质 | 第93-95页 |
| ·温度稳定性 | 第95-96页 |
| ·pH 稳定性 | 第96-97页 |
| ·阳离子、阴离子对酶稳定性的影响 | 第97-99页 |
| ·防止酶的热失活 | 第99-100页 |
| ·讨论 | 第100-101页 |
| 第五节 SAM合成酶的固定化研究 | 第101-104页 |
| ·实验材料与仪器 | 第101页 |
| ·实验方法 | 第101-102页 |
| ·SAM合成酶的固定化 | 第101-102页 |
| ·固定化SAM合成酶以DL-Met为底物合成SAM | 第102页 |
| ·实验结果 | 第102-103页 |
| ·讨论 | 第103-104页 |
| 本章总结 | 第104-106页 |
| 第三章 大肠杆菌发酵法制备SAM | 第106-128页 |
| 第一节 序言 | 第106-107页 |
| 第二节 实验材料与仪器 | 第107-108页 |
| ·菌种和质粒 | 第107页 |
| ·主要试剂 | 第107页 |
| ·主要仪器设备 | 第107-108页 |
| 第三节 实验方法 | 第108-112页 |
| ·构建表达质粒 | 第108-111页 |
| ·构建重组菌株 | 第111页 |
| ·培养重组菌株 | 第111-112页 |
| ·细胞密度的测定 | 第112页 |
| ·SDS-PAGE检测 | 第112页 |
| ·HPLC法定量SAM | 第112页 |
| ·培养条件的优化 | 第112页 |
| 第四节 实验结果 | 第112-125页 |
| ·SAM合成酶的诱导表达 | 第112-114页 |
| ·SAM含量的检测 | 第114-117页 |
| ·IPTG浓度对SAM浓度的影响 | 第117-118页 |
| ·开始诱导时菌体密度对SAM浓度的影响 | 第118-119页 |
| ·诱导时间对SAM浓度的影响 | 第119-121页 |
| ·培养基中添加(NH4)2504对SAM浓度的影响 | 第121-122页 |
| ·培养基中添加 Met 对 SAM 浓度的影响 | 第122-124页 |
| ·培养基中添加KCl、MgC12对SAM浓度的影响 | 第124-125页 |
| 第五节 讨论 | 第125-126页 |
| 本章总结 | 第126-128页 |
| 参考文献 | 第128-147页 |
| 作者简历 | 第147页 |
| 博士期间已发表和待发表的文章 | 第147-148页 |
| 中文摘要 | 第148-153页 |
| 英文摘要 | 第153-159页 |
| 致谢 | 第159页 |
