体细胞核移植牛肺脏中印记基因的DNA甲基化状态分析
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 引言 | 第10-21页 |
| ·体细胞核移植与表观重编程 | 第10-11页 |
| ·DNA 甲基化 | 第11-18页 |
| ·DNA 甲基化概述 | 第11-13页 |
| ·DNA 甲基化的功能 | 第13-14页 |
| ·甲基化的研究方法 | 第14-18页 |
| ·体细胞核移植动物中 DNA 甲基化研究 | 第18-19页 |
| ·所研究的印记基因 | 第19-20页 |
| ·H19 | 第19页 |
| ·Xist | 第19页 |
| ·Mash2 | 第19-20页 |
| ·研究内容及意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-31页 |
| ·实验材料 | 第21-23页 |
| ·牛组织材料 | 第21页 |
| ·实验用酶 | 第21页 |
| ·其他药品及试剂 | 第21页 |
| ·培养基的配制 | 第21页 |
| ·其他试剂的配制 | 第21-23页 |
| ·主要仪器和设备 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-31页 |
| ·牛肺脏基因组 DNA 的提取 | 第23-24页 |
| ·基因组 DNA 的琼脂糖检测 | 第24页 |
| ·基因组 DNA 的纯度检测 | 第24页 |
| ·基因组 DNA 的酶切 | 第24-25页 |
| ·亚硫酸氢盐处理 | 第25页 |
| ·CpG 岛预测及 BSP‐PCR 引物设计 | 第25-26页 |
| ·印记基因的半巢式 PCR 扩增 | 第26-27页 |
| ·PCR 产物回收 | 第27-28页 |
| ·PMD18‐T 载体连接反应 | 第28页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第29页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第29页 |
| ·重组质粒提取和测序 | 第29-30页 |
| ·数据分析 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-48页 |
| ·基因组 DNA 的提取和检测结果 | 第31页 |
| ·CPG 岛预测结果及 BSP‐PCR 引物 | 第31-35页 |
| ·H19 基因 CpG 岛预测及引物设计 | 第31-33页 |
| ·Xist 基因 CpG 岛预测及引物设计 | 第33-34页 |
| ·Mash2 基因 CpG 岛预测及引物设计 | 第34-35页 |
| ·BSP‐PCR 扩增结果 | 第35-37页 |
| ·H19 基因 PCR 扩增 | 第35页 |
| ·Xist 基因 PCR 扩增 | 第35-36页 |
| ·Mash2 基因 PCR 扩增 | 第36-37页 |
| ·纯化回收检测 | 第37-38页 |
| ·重组克隆的菌落 PCR 检测 | 第38-39页 |
| ·序列测定 | 第39-43页 |
| ·印记基因的甲基化状态 | 第43-45页 |
| ·H19 基因的甲基化状态 | 第43-44页 |
| ·Xist 基因的甲基化状态 | 第44页 |
| ·Mash2 基因的甲基化状态 | 第44-45页 |
| ·数据分析 | 第45-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| ·H19 基因的甲基化状态分析 | 第50页 |
| ·XIST 基因的甲基化状态分析 | 第50页 |
| ·MASH2 基因的甲基化状态分析 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 附录 | 第56-57页 |
| 在读期间发表论文 | 第57-58页 |
| 作者简介 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
