| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第1章 绪论 | 第9-43页 |
| ·前言 | 第9页 |
| ·链霉菌分类的研究进展 | 第9-17页 |
| ·数值分类 | 第11页 |
| ·化学分类 | 第11-12页 |
| ·生化检测在链霉菌分类中的应用 | 第12-15页 |
| ·基因型方法确定关联性 | 第15-16页 |
| ·核酸序列比较 | 第16-17页 |
| ·链霉菌次级代谢产物的生物合成 | 第17-27页 |
| ·NRPS | 第19-22页 |
| ·PKS | 第22-27页 |
| ·链霉菌次级代谢调控 | 第27-34页 |
| ·小分子效应物 | 第27-31页 |
| ·双组分信号转导系统 | 第31-33页 |
| ·途径专一性调控基因 | 第33-34页 |
| ·基因工程方法在微生物菌种改良中的应用 | 第34-38页 |
| ·代谢工程 | 第34-35页 |
| ·调控基因 | 第35页 |
| ·DNA shuffing | 第35-36页 |
| ·异源表达 | 第36-37页 |
| ·基因组学对新药开发的影响 | 第37-38页 |
| ·参考文献 | 第38-43页 |
| 第2章 菌株L10的鉴定及系统发育分析 | 第43-67页 |
| ·引言 | 第43-44页 |
| ·材料和方法 | 第44-50页 |
| ·菌株及其培养 | 第44页 |
| ·溶液 | 第44-45页 |
| ·培养基 | 第45-47页 |
| ·仪器和设备 | 第47页 |
| ·链霉菌基因组提取 | 第47-48页 |
| ·PCR扩增 | 第48页 |
| ·PCR产物测序及系统进化树构建 | 第48-49页 |
| ·菌株的培养特征及形态特征 | 第49页 |
| ·菌株的生理生化特性检测 | 第49-50页 |
| ·结果和分析 | 第50-63页 |
| ·形态特征 | 第50-51页 |
| ·培养特征 | 第51-53页 |
| ·生理生化特征 | 第53页 |
| ·16S rRNA基因和rpoB基因的PCR扩增及序列测定 | 第53-56页 |
| ·系统进化树构建 | 第56-60页 |
| ·菌株L10和邻近链霉菌菌株的形态与生理生化特性比较 | 第60-62页 |
| ·菌株L10的定名 | 第62-63页 |
| ·讨论与小结 | 第63-64页 |
| ·参考文献 | 第64-67页 |
| 第3章 恰塔努加链霉菌L10基因组柯斯质粒文库的构建 | 第67-81页 |
| ·引言 | 第67-68页 |
| ·材料与方法 | 第68-73页 |
| ·菌株和质粒 | 第68页 |
| ·培养基 | 第68-69页 |
| ·S.chattanoogensis L10孢子悬液制备 | 第69页 |
| ·S.chattanoogensis L10基因组的大量提取 | 第69-70页 |
| ·部分酶切条件的建立 | 第70页 |
| ·大规模制备部分酶切的基因组 DNA | 第70-71页 |
| ·Cosmid载体的准备 | 第71页 |
| ·文库构建连接体系的建立 | 第71页 |
| ·连接混合物的包装 | 第71页 |
| ·转染感受态细胞制备 | 第71-72页 |
| ·文库转染 | 第72-73页 |
| ·柯斯质粒基因组文库质量检测 | 第73页 |
| ·结果和分析 | 第73-77页 |
| ·高分子量基因组DNA提取及部分酶切条件建立 | 第73-75页 |
| ·Cosmid(pHAQ31)的处理 | 第75-76页 |
| ·连接、包装和转染 | 第76页 |
| ·文库质量检测与保存 | 第76-77页 |
| ·讨论与小结 | 第77-78页 |
| ·参考文献 | 第78-81页 |
| 第4章 应用基因工程方法构建纳他霉素高产菌研究 | 第81-111页 |
| ·引言 | 第81-82页 |
| ·材料和方法 | 第82-89页 |
| ·菌株 | 第82-83页 |
| ·质粒 | 第83页 |
| ·培养基 | 第83-85页 |
| ·抗生素 | 第85页 |
| ·酶和生化试剂 | 第85页 |
| ·大肠杆菌质粒小量提取 | 第85-86页 |
| ·E.coli的Ca2+法感受态细胞的制备及转化 | 第86-87页 |
| ·链霉菌基因组DNA少量抽提 | 第87页 |
| ·大肠杆菌与恰塔努加链霉菌L10的接合转移操作流程 | 第87-88页 |
| ·生产曲线的测量 | 第88页 |
| ·发酵液中Natamycin含量测定 | 第88-89页 |
| ·结果与分析 | 第89-106页 |
| ·恰塔努加链霉菌L10(Streptomyces chattanoogensis L10)中纳他霉素生物合成正调控因子基因的克隆 | 第89-98页 |
| ·通过基因工程提高恰塔努加链霉菌的纳他霉素产量 | 第98-106页 |
| ·讨论与小结 | 第106-108页 |
| ·参考文献 | 第108-111页 |
| 结论与展望 | 第111-113页 |
| 附录 | 第113-119页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第119-121页 |
| 致谢 | 第121页 |
