| 中文摘要 | 第1-13页 |
| 英文摘要 | 第13-16页 |
| 1. 前言 | 第16-38页 |
| ·花粉管的结构 | 第17-23页 |
| ·花粉管的生长特点 | 第17-18页 |
| ·花粉管细胞壁的一般结构 | 第18-19页 |
| ·花粉管细胞壁的化学组成 | 第19-22页 |
| ·裸子植物与被子植物花粉管结构及特征上的异同 | 第22-23页 |
| ·微管 | 第23-28页 |
| ·微管的结构 | 第23-24页 |
| ·微管的功能 | 第24-25页 |
| ·花粉管中的微管骨架系统 | 第25-26页 |
| ·微管蛋白基因 | 第26-28页 |
| ·植物微管蛋白的多基因家族 | 第26-27页 |
| ·植物微管蛋白基因的保守性 | 第27页 |
| ·植物微管蛋白基因的特异表达 | 第27-28页 |
| ·转录因子 | 第28-37页 |
| ·植物转录因子的结构 | 第28-29页 |
| ·转录因子活性的调控 | 第29-31页 |
| ·植物转录因子的类型及其与其它真核生物转录因子的比较 | 第31-32页 |
| ·HAP 类转录因子研究进展 | 第32-37页 |
| ·HAP 类转录因子的命名 | 第32-33页 |
| ·CCAAT-box 结构 | 第33页 |
| ·HAP类转录因子的结构特点 | 第33-34页 |
| ·HAP转录因子与DNA的特异性结合 | 第34-35页 |
| ·HAP对转录的调控机制 | 第35-36页 |
| ·植物中的HAP转录因子 | 第36-37页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第37-38页 |
| 2. 材料与方法 | 第38-77页 |
| ·材料 | 第38-40页 |
| ·植物材料 | 第38页 |
| ·植物材料培养与处理 | 第38页 |
| ·载体与菌株 | 第38-39页 |
| ·其它材料 | 第39页 |
| ·实验引物 | 第39-40页 |
| ·实验方法 | 第40-77页 |
| ·RNA 的提取 | 第40-42页 |
| ·利用RNeasy Plant Mini Kit 提取总RNA | 第40页 |
| ·利用TRIZOL 试剂盒提取RNA | 第40-41页 |
| ·CTAB 法提取植物总RNA | 第41-42页 |
| ·RNA 的纯化 | 第42页 |
| ·cDNA 第一条链的合成 | 第42-43页 |
| ·双链cDNA 的合成 | 第43页 |
| ·蛋白酶K 消化dscDNA | 第43-44页 |
| ·SfiI 消化dscDNA | 第44页 |
| ·双链文库DNA的纯化 | 第44-45页 |
| ·cDNA 与λTriplEx2 载体连接、包装及效价测定 | 第45-46页 |
| ·cDNA 与λTriplEx2 载体连接 | 第45页 |
| ·λTriplEx2-cDNA 的包装 | 第45页 |
| ·λTriplEx2-cDNA 原始文库的效价测定 | 第45-46页 |
| ·DNA 片段与克隆载体的连接 | 第46页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态的制备 | 第46-47页 |
| ·大肠杆菌细胞的转化 | 第47页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第47-48页 |
| ·凝胶电泳中DNA片段的回收 | 第48-49页 |
| ·序列测定 | 第49页 |
| ·PwTUA1 cDNA 全长的获得 | 第49-51页 |
| ·PwTUA1 中间片段的获得 | 第49页 |
| ·5’RACE PCR 获得 5’端序列 | 第49-50页 |
| ·3’RACE PCR 获得 3’端序列 | 第50-51页 |
| ·PwTUA1 cDNA 全长的获得 | 第51页 |
| ·半定量RT-PCR | 第51-52页 |
| ·基因枪法瞬时转化青杄花粉 | 第52-54页 |
| ·植物材料 | 第52页 |
| ·转化质粒 | 第52-53页 |
| ·基因枪转化 | 第53-54页 |
| ·花粉萌发率和花粉管生长速度的测定 | 第54页 |
| ·植物表达载体的构建与拟南芥转化 | 第54-57页 |
| ·植物超表达载体的构建 | 第54-55页 |
| ·农杆菌感受态细胞制备及转化 | 第55-56页 |
| ·农杆菌的培养 | 第56页 |
| ·农杆菌介导的拟南芥转化 | 第56页 |
| ·转基因拟南芥的鉴定 | 第56-57页 |
| ·拟南芥花粉体外培养和花粉管长度的测量 | 第57页 |
| ·间接免疫荧光显微镜定位 | 第57-58页 |
| ·透射电镜观察 | 第58-59页 |
| ·酵母双杂交 | 第59-75页 |
| ·双分子荧光互补实验表达载体构建 | 第75页 |
| ·本生烟草叶片瞬时转化 | 第75-77页 |
| 3. 结果与分析 | 第77-107页 |
| ·青杄花粉及花粉管 cDNA 文库的构建 | 第77-80页 |
| ·青杄花粉及花粉管RNA的提取 | 第77-78页 |
| ·文库构建及效价测定 | 第78-79页 |
| ·文库检测 | 第79-80页 |
| ·青杄微管蛋白α亚基基因 PwTUA1 的克隆及相关功能分析 | 第80-94页 |
| ·PwTUA1 基因的克隆 | 第80-81页 |
| ·PwTUA1 中间片段的分离 | 第80页 |
| ·PwTUA1 5’端片段的分离 | 第80页 |
| ·PwTUA1 3’端片段的分离 | 第80页 |
| ·PwTUA1全长cDNA的分离 | 第80-81页 |
| ·PwTUA1 的序列分析 | 第81-85页 |
| ·PwTUA1 的表达分析 | 第85-86页 |
| ·青杄微管蛋白基因PwTUA1 的功能鉴定 | 第86-94页 |
| ·在青杄花粉中瞬时超表达PwTUA1促进花粉萌发以及花粉管的伸长 | 第86-87页 |
| ·在拟南芥中超表达PwTUA1 促进花粉萌发及花粉管的伸长 | 第87-91页 |
| ·超表达PwTUA1 改变拟南芥花粉管中微管蛋白α亚基的亚细胞定位 | 第91页 |
| ·超表达PwTUA1 改变拟南芥花粉管的超微结构 | 第91-94页 |
| ·青杄PwHAP5 基因的克隆与相关功能研究 | 第94-107页 |
| ·PwHAP5 基因的克隆 | 第94-95页 |
| ·PwHAP5 的序列分析 | 第95-98页 |
| ·PwHAP5 的表达分析 | 第98-99页 |
| ·PwHAP5 基因相关功能分析 | 第99-101页 |
| ·在青杄花粉中瞬时超表达PwHAP5改变花粉管的生长方向 | 第99-100页 |
| ·在拟南芥中超表达PwHAP5 影响果荚的分布排列 | 第100-101页 |
| ·与青杄转录因子PwHAP5相互作用蛋白的筛选及鉴定 | 第101-107页 |
| ·诱饵载体的构建 | 第101-102页 |
| ·用PwHAP5 N、C末端及全长分别作诱饵蛋白筛选cDNA文库的结果 | 第102-105页 |
| ·PwHAP5与PwFKBP12相互作用 | 第105-107页 |
| 4. 讨论 | 第107-112页 |
| ·花粉特异的青杄微管蛋白基因参与花粉萌发和花粉管生长过程 | 第107页 |
| ·PwTUA1 可能参与钙离子和硼对花粉萌发和花粉管生长的调控过程 | 第107-108页 |
| ·PwTUA1 通过改变TUA 的分布及花粉管的超微结构来促进花粉管的生长 | 第108-109页 |
| ·PwHAP5 参与调控花粉管的生长 | 第109-110页 |
| ·PwHAP5 通过与其它蛋白相互作用共同调控植物的生长发育 | 第110-112页 |
| 5. 结论 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-130页 |
| 附录 | 第130-132页 |
| 致谢 | 第132-133页 |
| 附:攻读学位期间发表的论文及成果 | 第133页 |
