人工合成甘蓝型黄籽油菜No.2127-17粒色基因差异表达研究
| 缩略语表(Abbreviation) | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-16页 |
| ·甘蓝型黄籽油菜研究进展 | 第9-14页 |
| ·甘蓝型黄籽油菜的发现及品种选育 | 第9-10页 |
| ·甘蓝型黄籽油菜籽粒形态学、细胞学观察 | 第10-11页 |
| ·甘蓝型油菜籽粒颜色生理生化分析 | 第11-12页 |
| ·芸薹属植物种皮色泽遗传模式分析 | 第12-14页 |
| ·比较基因组学应用 | 第14-16页 |
| 2 本研究的目的与意义 | 第16-17页 |
| 3 实验材料与方法 | 第17-32页 |
| ·实验材料 | 第17-18页 |
| ·实验方法 | 第18-32页 |
| ·SSH文库的构建 | 第18-27页 |
| ·油菜种子总RNA的提取 | 第18-19页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第19页 |
| ·LD-PCR进行cDNA扩增 | 第19-20页 |
| ·cDNA-PCR产物纯化 | 第20-21页 |
| ·RsaⅠ消化酶切 | 第21页 |
| ·Tester cDNA接头连接 | 第21-22页 |
| ·第一次杂交 | 第22-23页 |
| ·第二次杂交 | 第23页 |
| ·第一次PCR扩增 | 第23-24页 |
| ·第二次PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·差减效率的PCR检测 | 第25页 |
| ·差减片段与载体的连接及转化 | 第25-26页 |
| ·差减文库插入片段的检测 | 第26-27页 |
| ·反向Northern斑点杂交 | 第27-32页 |
| ·插入片段的扩增与点膜 | 第27-28页 |
| ·地高辛标记cDNA探针 | 第28-30页 |
| ·杂交与检测 | 第30-31页 |
| ·差异表达克隆的筛选 | 第31页 |
| ·序列分析 | 第31页 |
| ·Real Time PCR分析 | 第31-32页 |
| 4 结果与分析 | 第32-42页 |
| ·SSH文库的构建 | 第32-36页 |
| ·总RNA的浓度及完整性检测 | 第32页 |
| ·LD-PCR循环数优化 | 第32-33页 |
| ·RsaⅠ酶切效果 | 第33页 |
| ·差减产物两次PCR扩增结果 | 第33-34页 |
| ·差减效率检测结果 | 第34-35页 |
| ·差减文库插入片段大小检测结果 | 第35-36页 |
| ·反向Northern斑点杂交检测结果 | 第36-41页 |
| ·反向Northern斑点杂交筛选结果 | 第36页 |
| ·差异表达克隆测序及同源检索结果 | 第36-41页 |
| ·对已测序列cDNA的表达分析 | 第41-42页 |
| 5 讨论 | 第42-45页 |
| ·种皮色泽与含油量的关系 | 第42-43页 |
| ·种皮色素形成相关克隆分析 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-51页 |
| 附录 | 第51-54页 |
| 附录1 常用培养基和溶液的配制 | 第51页 |
| 附录2 RNA提取试剂及配制 | 第51-52页 |
| 附录3 引物及接头 | 第52-53页 |
| 附录4 DIG标记及检测试剂配制 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
