| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-25页 |
| ·雄性不育简介 | 第12-13页 |
| ·雄性不育的现象 | 第12页 |
| ·雄性不育的分类 | 第12-13页 |
| ·雄性不育的意义 | 第13页 |
| ·线粒体的功能 | 第13-23页 |
| ·线粒体嵌合基因与CMS | 第13-16页 |
| ·线粒体中RNA编辑与CMS | 第16-19页 |
| ·线粒体中RNA编辑 | 第16-18页 |
| ·CMS相关基因的RNA编辑 | 第18-19页 |
| ·线粒体育性相关蛋白质 | 第19-21页 |
| ·线粒体反向调节信号与CMS | 第21-23页 |
| ·线粒体反向调控细胞程序化死亡与CMS | 第21-22页 |
| ·线粒体反向调控与花器官的同源转化 | 第22-23页 |
| ·核恢复基因的调控 | 第23-24页 |
| ·研究目的 | 第24-25页 |
| 2 育性相关蛋白的原核表达 | 第25-50页 |
| ·材料与试剂 | 第25页 |
| ·原核表达载体的引物 | 第25-27页 |
| ·原核表达方法 | 第27页 |
| ·外源片段的扩增 | 第27页 |
| ·质粒和PCR产物的酶切、回收 | 第27页 |
| ·外源片段的连接、转化及检测 | 第27-28页 |
| ·菌体诱导曲线、蛋白质检测、菌体荧光的观察 | 第28页 |
| ·结果分析 | 第28-50页 |
| ·原核表达载体基因克隆 | 第28-30页 |
| ·原核表达载体的检测 | 第30-37页 |
| ·pET-28a系列载体的检测 | 第30-32页 |
| ·EGFP C端融合载体的检测 | 第32-34页 |
| ·pET-28a-egfp及egfp N端融合载体的检测 | 第34-35页 |
| ·内含肽C端融合载体的检测 | 第35-37页 |
| ·原核表达载体菌体诱导曲线 | 第37-40页 |
| ·pET-28a载体诱导曲线 | 第37-38页 |
| ·EGFP C端融合载体诱导曲线 | 第38页 |
| ·EGFP N端融合载体诱导曲线 | 第38-39页 |
| ·内含肽C端融合载体诱导曲线 | 第39-40页 |
| ·原核表达SDS-PAGE检测 | 第40-43页 |
| ·pET-28a载体SDS-PAGE检测 | 第40-41页 |
| ·EGFP C端融合载体SDS-PAGE检测 | 第41-42页 |
| ·内含肽C端融合载体SDS-PAGE检测 | 第42-43页 |
| ·菌体荧光图的观察 | 第43-47页 |
| ·对照载体及EGFP C端融合载体菌体荧光图 | 第44-46页 |
| ·egfp N端融合载体菌体荧光图 | 第46-47页 |
| ·EGFP C端融合蛋白质谱 | 第47-50页 |
| 3 育性相关蛋白的洋葱表皮瞬时表达 | 第50-57页 |
| ·材料与方法 | 第50页 |
| ·瞬时表达载体引物 | 第50页 |
| ·瞬时表达载体的构建 | 第50-51页 |
| ·目的基因的扩增 | 第50页 |
| ·质粒pEGAD和PCR片段酶切、回收 | 第50-51页 |
| ·目的基因的连接、转化及检测 | 第51页 |
| ·洋葱表皮瞬时表达 | 第51页 |
| ·结果与分析 | 第51-57页 |
| ·目的基因的克隆及检测 | 第51-54页 |
| ·ORF77、ORF355性质及结构的预测 | 第54-55页 |
| ·激光共聚焦显微观察 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-61页 |
| ·玉米CMS-S相关基因表达 | 第57页 |
| ·原核表达系统 | 第57-59页 |
| ·真核表达系统 | 第59页 |
| ·orf355蛋白质的性质 | 第59-61页 |
| 5 展望 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 附录 | 第76-84页 |
| 附录1 常用培养基和溶液的配制 | 第76-77页 |
| 附录2 提取质粒(小样法) | 第77页 |
| 附录3 电转化感受态的制备 | 第77-78页 |
| 附录4 电转化 | 第78页 |
| 附录5 热激钙转化 | 第78页 |
| 附录6 凝胶回收DNA片段 | 第78-79页 |
| 附录7 大样法抽提高浓度质粒 | 第79页 |
| 附录8 植物总DNA的小量提取(CTAB法) | 第79-80页 |
| 附录9 SDS-PAGE电泳 | 第80-81页 |
| 附录10 基因枪使用方法 | 第81-82页 |
| 附录11 玉米CMS-S育性相关基因 | 第82-83页 |
| 附录12 EGFP序列 | 第83页 |
| 附录13 atp9序列 | 第83页 |
| 附录14 or17、orf60、orf77、atp9、EGFP的PCR扩增程序及扩增条件 | 第83-84页 |
| 附录15 orf355的PCR扩增程序及扩增条件 | 第84页 |
| 附录16 限制性内切酶的酶切体系 | 第84页 |
| 附录17 T4 DNA ligase反应体系 | 第84页 |