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利用转基因策略创造高淀粉、高直链淀粉玉米新种质

中文摘要第1-13页
ABSTRACT第13-21页
符号说明第21-24页
第一章 前言第24-44页
   ·淀粉的基本特性和用途第24-26页
   ·淀粉合成机制第26-33页
     ·淀粉合成相关酶类第26页
     ·腺苷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGP)第26-29页
       ·AGPase的定位及特点第26-27页
       ·AGPase的大小亚基的功能与特点第27-28页
       ·AGPase酶活性的改变及对作物淀粉含量的影响第28-29页
     ·淀粉合成酶(SS)第29-30页
     ·淀粉分支酶(SBE)第30-33页
       ·SBE的分类及特点第30-31页
       ·SBE编码基因的表达及特点第31-32页
       ·SBE基因的功能研究第32-33页
     ·淀粉去分支酶(SDBE)第33页
     ·改良玉米淀粉含量和性质的可行途径第33-41页
     ·利用突变基因改变淀粉含量及理化性质第33-35页
     ·RNAi技术在淀粉改良中的应用第35-41页
       ·RNAi机制的原理第35-36页
       ·RNAi在植物改良中的应用第36-37页
       ·双链RNA结构的合成和RNAi载体的设计原则第37-38页
       ·RNAi表达结构的构建第38-40页
       ·通过抑制SBE活性提高直链淀粉的研究第40-41页
   ·玉米基因工程改良研究的现状第41-42页
   ·本研究的目的与意义第42-44页
第二章 过表达AGPASE提高玉米淀粉含量和籽粒产量第44-68页
   ·材料与方法第44-55页
     ·植物材料和菌种及质粒载体第44页
     ·基因克隆和植物表达载体的构建第44-47页
       ·玉米cNDA的合成第44-45页
       ·AGPase大、小亚基基因的克隆第45-46页
       ·植物表达载体的构建第46-47页
     ·转基因玉米的产生第47-48页
       ·转化受体的获得第47页
       ·农杆菌培养第47-48页
       ·农杆菌介导的玉米芽尖转化第48页
       ·转基因株系的产生第48页
     ·转基因玉米的分子检测第48-53页
       ·PCR检测第48-49页
       ·转基因玉米的Southern杂交检测第49-51页
       ·定量RT-PCR检测第51-53页
     ·转基因玉米的性状分析第53-55页
       ·酶活性检测第53-54页
       ·淀粉含量检测第54-55页
       ·植株产量的测定第55页
   ·结果与分析第55-65页
     ·目的基因的克隆第55-58页
       ·mRNA的分离和cDNA的合成第55-56页
       ·玉米AGPase小亚基基因Bt2的克隆及鉴定第56-57页
       ·玉米AGPase大亚基基因Sh2的克隆及鉴定第57-58页
     ·植物表达载体的构建第58页
     ·转基因植株的获得第58-59页
     ·转基因玉米的分子检测第59-61页
     ·转基因植株的AGPase活性测定第61-62页
     ·籽粒淀粉含量分析第62页
     ·转基因玉米籽粒性状的分析第62-65页
       ·百粒重分析第62-63页
       ·不同转基因株系的籽粒表型的差异第63-64页
       ·田间测产结果第64-65页
   ·讨论第65-68页
第三章 利用RNAI机制创制高直链淀粉玉米新材料第68-86页
   ·材料与方法第68-73页
     ·植物材料和菌种及质粒载体第68页
     ·目的基因的获得第68-69页
       ·玉米cDNA的合成第68页
       ·靶基因片段的克隆第68-69页
       ·PCR产物的回收、克隆及测序第69页
     ·干扰载体的构建第69-70页
     ·转基因玉米的产生第70-71页
     ·转基因玉米的分子检测第71页
     ·转基因植物的生理学测定和性状分析第71-73页
       ·酶活性检测第71-72页
       ·淀粉含量检测第72-73页
       ·株系选择和产量测定第73页
       ·转基因植株农艺性状的大田观察第73页
   ·结果与分析第73-82页
     ·玉米淀粉分支酶基因SBEⅡa、SBEⅡb干扰片段的克隆和序列分析第73-74页
     ·RNAi表达载体的构建和鉴定第74-75页
     ·转基因玉米的分子检测第75-77页
       ·PCR检测第75-76页
       ·Southern检测第76页
       ·靶基因表达强度的分析第76-77页
     ·SBE酶活性检测第77-78页
     ·转基因植株籽粒淀粉含量和直链淀粉含量的影响第78-79页
     ·转SBEⅡ RNAi结构对玉米百粒重及产量的影响第79-82页
   ·讨论第82-86页
第四章 通过转基因植株的杂交培育高淀粉高直链淀粉玉米材料第86-93页
   ·材料与方法第86-87页
     ·材料第86页
     ·方法第86-87页
       ·材料的准备第86页
       ·检测方法第86-87页
       ·果穗性状和产量测定第87页
   ·结果与分析第87-90页
     ·转基因植株的分子生物学鉴定第87页
     ·转基因表达分析第87-88页
     ·AGPase和SBE的酶活性检测第88-89页
     ·转基因聚合植株籽粒淀粉和直链淀粉含量的变化第89-90页
     ·植株性状分析第90页
   ·讨论第90-93页
第五章 总结与展望第93-97页
参考文献第97-107页
致谢第107-108页
攻读学位期间发表的学术论文及专利第108-109页
学位论文评阅及答辩情况表第109页

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