| 中文摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-20页 |
| 符号说明 | 第20-21页 |
| 第一章 前言 | 第21-47页 |
| ·生物质能源的兴起 | 第21-28页 |
| ·能源危机 | 第21-22页 |
| ·生物乙醇发展概况 | 第22-23页 |
| ·粮食淀粉和糖类作物制取燃料乙醇 | 第23-24页 |
| ·木质纤维素制取燃料乙醇 | 第24-28页 |
| ·木质纤维素 | 第24-27页 |
| ·制约木质纤维素制取燃料乙醇的关键问题 | 第27-28页 |
| ·利用转基因技术促进木质纤维素有效利用 | 第28-41页 |
| ·纤维素降解与纤维素酶生产 | 第29-36页 |
| ·纤维素降解与纤维素酶 | 第29-32页 |
| ·纤维素酶的异源表达 | 第32-36页 |
| ·在细菌中表达纤维素酶 | 第32-33页 |
| ·酵母表达系统 | 第33页 |
| ·丝状真菌中表达纤维素酶 | 第33-34页 |
| ·转基因植物 | 第34-36页 |
| ·木质素生物合成及其遗传改良 | 第36-41页 |
| ·木质素组成与分布 | 第36-38页 |
| ·木质素生物合成途径 | 第38-40页 |
| ·木质素合成的遗传改良 | 第40-41页 |
| ·异源纤维素酶基因表达和木质素含量降低对转基因植物的影响 | 第41-45页 |
| ·异源纤维素酶基因表达对转基因植物的影响 | 第41-43页 |
| ·降低木质素含量对转基因植物的影响 | 第43-45页 |
| ·木质素总量合成的生物调控 | 第43-44页 |
| ·木质素单体特异合成相关酶的合成调控 | 第44-45页 |
| ·本工作的目的和意义 | 第45-47页 |
| 第二章 乙醇诱导启动子的克隆 | 第47-63页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第49页 |
| ·药品及试剂 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-57页 |
| ·构巢曲霉基因组DNA的提取 | 第49-50页 |
| ·alcA启动子的克隆 | 第50-52页 |
| ·引物设计和PCR反应 | 第50-51页 |
| ·PCR产物的回收,克隆和测序 | 第51-52页 |
| ·构巢曲霉总RNA的提取及cDNA合成 | 第52-53页 |
| ·总RNA的提取 | 第52页 |
| ·mRNA的分离 | 第52-53页 |
| ·cDNA合成 | 第53页 |
| ·转录因子alcR的克隆 | 第53-54页 |
| ·含有乙醇诱导启动子的植物表达载体的构建 | 第54-56页 |
| ·质粒DNA的制备和纯化 | 第54页 |
| ·质粒DNA的限制性酶切 | 第54页 |
| ·DNA片段的去磷酸化 | 第54页 |
| ·DNA片段的回收和定量 | 第54页 |
| ·DNA片段的补平加A反应 | 第54-55页 |
| ·目的DNA片段与载体DNA的连接 | 第55页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备和转化 | 第55页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第55页 |
| ·重组质粒转入农杆菌 | 第55-56页 |
| ·报告基因的瞬时表达分析 | 第56-57页 |
| ·实验材料 | 第56页 |
| ·培养基和试剂 | 第56页 |
| ·利用基因枪转化玉米胚芽鞘 | 第56-57页 |
| ·GUS组织化学检测 | 第57页 |
| ·结果与分析 | 第57-61页 |
| ·构巢曲霉DNA的提取和alcA片段的克隆 | 第57-59页 |
| ·构巢曲霉RNA的提取及转录因子alcR的克隆 | 第59页 |
| ·含有乙醇诱导启动子的植物表达载体的构建与鉴定 | 第59-61页 |
| ·基因枪轰击玉米胚芽鞘 | 第61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| 第三章 真菌纤维素酶基因CBHⅠ和EGⅢ在转基因玉米中表达 | 第63-96页 |
| ·材料与方法 | 第64-76页 |
| ·材料 | 第64-65页 |
| ·植物材料 | 第64页 |
| ·菌株和质粒 | 第64-65页 |
| ·药品和试剂 | 第65页 |
| ·方法 | 第65-76页 |
| ·瑞士木霉总RNA的提取及cDNA合成 | 第65-66页 |
| ·Trizol试剂提取瑞士木霉总RNA | 第65-66页 |
| ·反转录 | 第66页 |
| ·纤维素酶基因的克隆 | 第66页 |
| ·PCR去除纤维素酶基因的信号肽 | 第66-67页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第67页 |
| ·农杆菌介导的玉米芽尖的遗传转化 | 第67-68页 |
| ·用于玉米转化的培养基 | 第67页 |
| ·重组质粒转入农杆菌 | 第67页 |
| ·玉米转化受体的准备 | 第67-68页 |
| ·农杆菌培养和玉米无菌苗转化 | 第68页 |
| ·转化植株的筛选与定植 | 第68页 |
| ·转基因玉米植株后代的遗传学分析 | 第68-69页 |
| ·转基因玉米的分子生物学检测 | 第69-73页 |
| ·PCR检测 | 第69-70页 |
| ·Southern杂交检测 | 第70-72页 |
| ·Real-time RT-PCR检测 | 第72-73页 |
| ·酒精诱导条件 | 第73-74页 |
| ·纤维素酶活性测定 | 第74页 |
| ·转基因玉:米植株中纤维素酶酶学特性的分析 | 第74-75页 |
| ·纤维素含量测定 | 第75页 |
| ·纤维素酶解实验 | 第75-76页 |
| ·试验设计与数据处理 | 第76页 |
| ·结果与分析 | 第76-92页 |
| ·纤维素酶基因的克隆 | 第76页 |
| ·植物表达载体的构建与鉴定 | 第76-79页 |
| ·转基因玉米的获得 | 第79-82页 |
| ·转CBHⅠ基因玉米植株乙醇诱导活性的初步鉴定 | 第82-84页 |
| ·不同酒精诱导浓度对alc系统诱导活性的影响 | 第84页 |
| ·不同酒精诱导时间对alc系统诱导活性的影响 | 第84-85页 |
| ·持续酒精诱导的影响 | 第85-86页 |
| ·转CBHⅠ基因玉米不同组织部位的表达情况 | 第86页 |
| ·转EGⅢ基因的玉米植株中基因表达情况检测 | 第86-87页 |
| ·pH值和温度对转基因玉米中酶活性的影响 | 第87-89页 |
| ·不同温度储存对转基因植株叶片酶活性的影响 | 第89页 |
| ·纤维素含量的测定 | 第89-90页 |
| ·纤维素酶解试验 | 第90-91页 |
| ·转基因玉米植株的生长发育 | 第91-92页 |
| ·讨论 | 第92-96页 |
| 第四章 利用RNAi技术抑制玉米木质素合成基因CAD和CCR基因的表达 | 第96-118页 |
| ·材料与方法 | 第96-102页 |
| ·材料 | 第96-97页 |
| ·植物材料 | 第96页 |
| ·菌株和质粒 | 第96页 |
| ·试剂和药品 | 第96-97页 |
| ·实验方法 | 第97-102页 |
| ·玉米总RNA的提取及cDNA的合成 | 第97页 |
| ·玉米肉桂醇脱氢酶基因(CAD)和肉桂酰辅酶A还原酶基因(CCR)的克隆 | 第97页 |
| ·RNAi结构表达载体的构建 | 第97-98页 |
| ·农杆菌介导的玉米芽尖的遗传转化和分子检测 | 第98-100页 |
| ·酶活测定方法 | 第100页 |
| ·木质素含量的测定 | 第100-101页 |
| ·综纤维素含量的测定 | 第101页 |
| ·可溶性总酚含量的测定 | 第101页 |
| ·可溶性总糖测定 | 第101-102页 |
| ·试验设计与数据处理 | 第102页 |
| ·结果与分析 | 第102-114页 |
| ·玉米CAD基因和CCR基因的克隆 | 第102-103页 |
| ·RNAi结构的构建与鉴定 | 第103-104页 |
| ·转RNAi结构玉米的分子检测 | 第104-106页 |
| ·转RNAi结构玉米植株的遗传学分析 | 第106-107页 |
| ·目标基因表达强度的检测 | 第107-108页 |
| ·转RNAi结构玉米植株酶活性测定 | 第108-109页 |
| ·木质素含量测定 | 第109-110页 |
| ·综纤维素含量测定 | 第110页 |
| ·可溶性总酚含量测定 | 第110-111页 |
| ·可溶性糖含量测定 | 第111-112页 |
| ·玉米木质素合成相关基因在转基因玉米中的表达分析 | 第112页 |
| ·转RNAi结构玉米植株的生长发育 | 第112-114页 |
| ·讨论 | 第114-118页 |
| 第五章 总结与展望 | 第118-122页 |
| ·过表达微生物来源纤维素酶基因玉米的利用价值 | 第118-119页 |
| ·利用RNAi技术干扰玉米木质素合成 | 第119-120页 |
| ·本工作的创新点 | 第120-121页 |
| ·展望 | 第121-122页 |
| 参考文献 | 第122-135页 |
| 致谢 | 第135-136页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第136-137页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第137页 |
