| 中文摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-20页 |
| 1.1 引言 | 第15页 |
| 1.2 单宁酸与肿瘤 | 第15-16页 |
| 1.3 PKM2在肿瘤进程中的作用 | 第16-17页 |
| 1.4 PKM2在肿瘤细胞中的表达及其相关调控机制 | 第17-19页 |
| 1.5 本研究的内容与意义 | 第19-20页 |
| 第二章 单宁酸靶向PKM2 | 第20-27页 |
| 2.1 引言 | 第20页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第20-22页 |
| 2.2.1 细胞、材料及主要试剂 | 第20页 |
| 2.2.2 主要实验设备与仪器 | 第20-21页 |
| 2.2.3 主要试剂配制 | 第21-22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-23页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第22页 |
| 2.3.2 细胞裂解液的制备 | 第22页 |
| 2.3.3 单宁酸磁性纳米颗粒的制备 | 第22-23页 |
| 2.3.4 单宁酸磁性纳米颗粒结合蛋白的分离和鉴定 | 第23页 |
| 2.4 结果与分析 | 第23-26页 |
| 2.4.1 构建单宁酸磁性纳米颗粒 | 第23-25页 |
| 2.4.2 单宁酸磁性纳米颗粒特异性结合PKM2 | 第25-26页 |
| 2.5 小结 | 第26-27页 |
| 第三章 单宁酸特异抑制PKM2的丙酮酸激酶活性 | 第27-40页 |
| 3.1 引言 | 第27页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第27-28页 |
| 3.2.1 细胞、材料及主要试剂 | 第27页 |
| 3.2.2 主要实验设备与仪器 | 第27页 |
| 3.2.3 主要试剂配制 | 第27-28页 |
| 3.3 实验方法 | 第28-32页 |
| 3.3.1 细胞培养、细胞增殖和克隆实验 | 第28页 |
| 3.3.2 EdU实验 | 第28-29页 |
| 3.3.3 WesternBlot | 第29页 |
| 3.3.4 RNA提取和反转录 | 第29-30页 |
| 3.3.5 Quantitativereal-timePCR | 第30页 |
| 3.3.6 转染 | 第30页 |
| 3.3.7 重组蛋白GST-PKM1、GST-PKM2和His-PKM1、His-PKM2的表达 | 第30-31页 |
| 3.3.8 重组蛋白GST-PKM1、GST-PKM2的纯化 | 第31页 |
| 3.3.9 重组蛋白His-PKM1、His-PKM2的纯化 | 第31-32页 |
| 3.3.10 丙酮酸激酶活性检验 | 第32页 |
| 3.3.11 乳酸脱氢酶活性和乳酸生成量测定 | 第32页 |
| 3.3.12 统计分析 | 第32页 |
| 3.4 结果与分析 | 第32-39页 |
| 3.4.1 单宁酸抑制结肠癌细胞的增殖 | 第32-34页 |
| 3.4.2 单宁酸抑制结肠癌细胞的增殖不依赖于PKM2的蛋白激酶活性 | 第34-36页 |
| 3.4.3 单宁酸通过抑制PKM2的丙酮酸激酶活性来抑制结肠癌细胞增殖 | 第36-37页 |
| 3.4.4单宁酸选择性抑制PKM2 | 第37-39页 |
| 3.5 小结 | 第39-40页 |
| 第四章 单宁酸通过特异结合PKM2的K433位点抑制结肠癌细胞增殖 | 第40-48页 |
| 4.1 引言 | 第40页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第40页 |
| 4.2.1 细胞、材料及主要试剂 | 第40页 |
| 4.2.2 主要实验设备与仪器 | 第40页 |
| 4.3 实验方法 | 第40-41页 |
| 4.3.1 化学交联反应 | 第40页 |
| 4.3.2 Pulldown | 第40-41页 |
| 4.3.3 WesternBlot | 第41页 |
| 4.3.4 丙酮酸激酶活性检验 | 第41页 |
| 4.3.5 细胞培养 | 第41页 |
| 4.3.6 荧光滴定实验 | 第41页 |
| 4.3.7 酶抑制动力学分析 | 第41页 |
| 4.3.8 统计分析 | 第41页 |
| 4.4 结果与分析 | 第41-46页 |
| 4.4.1 单宁酸与PKM2的相互作用 | 第41-43页 |
| 4.4.2 单宁酸能够降低PKM2四聚体含量 | 第43-44页 |
| 4.4.3 单宁酸与PKM2的K433位点结合 | 第44-45页 |
| 4.4.4 单宁酸与K433位点结合抑制结肠癌细胞增殖 | 第45-46页 |
| 4.5 小结 | 第46-48页 |
| 总结与展望 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-56页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 个人简介 | 第58-61页 |
