| 致谢 | 第4-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| 文献综述 | 第12-22页 |
| 1 核糖体蛋白(RP) | 第12页 |
| 2 脂肪积聚相关研究 | 第12-17页 |
| 2.1 肥胖形成的原因及危害 | 第12-13页 |
| 2.2 脂肪生成相关基因 | 第13-17页 |
| 2.2.1 肥胖基因FTO | 第13页 |
| 2.2.2 肥胖基因(ob) | 第13-14页 |
| 2.2.3 脂联素(Adiponectin) | 第14页 |
| 2.2.4 脂肪酸合成酶基因(FASN) | 第14-15页 |
| 2.2.5 脂肪酰胺水解酶(FAAH) | 第15页 |
| 2.2.6 过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs) | 第15-16页 |
| 2.2.7 Lpin1 | 第16-17页 |
| 3 研究方法综述 | 第17-22页 |
| 3.1 基因克隆技术 | 第17页 |
| 3.2 生物信息学综述 | 第17-18页 |
| 3.3 基因差异表达分析方法 | 第18-19页 |
| 3.4 蛋白质的分离鉴定 | 第19-20页 |
| 3.5 原代细胞体外培养技术 | 第20-21页 |
| 3.6 模式生物的选择 | 第21-22页 |
| 引言 | 第22-23页 |
| 试验一 RPL9基因克隆及生物信息学分析 | 第23-38页 |
| 1 材料与方法 | 第23-28页 |
| 1.1 试验材料 | 第23-24页 |
| 1.1.1 试验动物 | 第23页 |
| 1.1.2 试验器材及设备 | 第23页 |
| 1.1.3 试验试剂 | 第23页 |
| 1.1.4 主要试剂的配制 | 第23页 |
| 1.1.5 蛋白质空间结构预测工具 | 第23-24页 |
| 1.2 试验方法 | 第24-28页 |
| 1.2.1 RPL9基因克隆 | 第24-27页 |
| 1.2.1.1 组织RNA提取 | 第24页 |
| 1.2.1.2 基因组DNA的除去反应 | 第24-25页 |
| 1.2.1.3 RNA完整性检测 | 第25页 |
| 1.2.1.4 RNA纯度检测 | 第25页 |
| 1.2.1.5 RNA反转录反应 | 第25页 |
| 1.2.1.6 引物设计 | 第25页 |
| 1.2.1.7 PCR反应 | 第25-26页 |
| 1.2.1.8 PCR产物回收 | 第26页 |
| 1.2.1.9 克隆载体的构建 | 第26页 |
| 1.2.1.10 KM小鼠Top10-pMD18-T-RPL9的转化及筛选 | 第26-27页 |
| 1.2.1.11 菌液PCR检测 | 第27页 |
| 1.2.1.12 基因序列分析 | 第27页 |
| 1.2.2 RPL9基因的生物信息学分析 | 第27-28页 |
| 1.2.2.1 RPL9基因的核酸组分分析 | 第27页 |
| 1.2.2.2 RPL9基因的酶切位点分析 | 第27页 |
| 1.2.2.3 RPL9基因的氨基酸序列 | 第27-28页 |
| 1.2.2.4 RPL9蛋白质氨基酸的理化性质 | 第28页 |
| 1.2.2.5 RPL9氨基酸疏水性分析 | 第28页 |
| 1.2.2.6 RPL9蛋白跨膜区分析 | 第28页 |
| 1.2.2.7 RPL9氨基酸信号肽分析 | 第28页 |
| 1.2.2.8 RPL9蛋白质二级结构预测分析 | 第28页 |
| 1.2.2.9 RPL9蛋白质三级结构预测分析 | 第28页 |
| 2 结果与分析 | 第28-37页 |
| 2.1 RPL9基因克隆结果 | 第28-31页 |
| 2.1.1 RPL9总RNA提取与检测 | 第28-29页 |
| 2.1.2 鼠RPL9基因的PCR扩增 | 第29页 |
| 2.1.3 菌液PCR检测 | 第29-30页 |
| 2.1.4 基因测序结果 | 第30-31页 |
| 2.2 RPL9基因的生物信息学分析结果 | 第31-37页 |
| 2.2.1 RPL9基因的核酸组分分析 | 第31-32页 |
| 2.2.2 RPL9基因限制性酶切位点分析结果 | 第32-33页 |
| 2.2.3 RPL9基因编码氨基酸序列 | 第33页 |
| 2.2.4 RPL9基因氨基酸理化性质的分析结果 | 第33页 |
| 2.2.5 RPL9氨基酸疏水性分析结果 | 第33-34页 |
| 2.2.6 RPL9蛋白跨膜区分析 | 第34页 |
| 2.2.7 RPL9蛋白信号肽预测分析结果 | 第34-35页 |
| 2.2.8 RPL9蛋白二级结构预测分析结果 | 第35-36页 |
| 2.2.9 RPL9蛋白三级结构预测分析结果 | 第36-37页 |
| 3 结论与讨论 | 第37-38页 |
| 3.1 小结 | 第37页 |
| 3.2 讨论 | 第37-38页 |
| 试验二 组织基因及蛋白差异性表达 | 第38-49页 |
| 1 材料与方法 | 第38-42页 |
| 1.1 试验材料 | 第38-39页 |
| 1.1.1 试验动物 | 第38页 |
| 1.1.2 试验器材 | 第38页 |
| 1.1.3 试验试剂 | 第38页 |
| 1.1.4 主要试剂的配制 | 第38-39页 |
| 1.2 试验方法 | 第39-42页 |
| 1.2.1 组织RPL9基因荧光定量PCR | 第39页 |
| 1.2.1.1 RNA提取 | 第39页 |
| 1.2.1.2 荧光定量PCR引物 | 第39页 |
| 1.2.1.3 real-time PCR反应体系 | 第39页 |
| 1.2.1.4 Real-time PCR反应程序 | 第39页 |
| 1.2.1.5 数据分析 | 第39页 |
| 1.2.2 组织RPL9蛋白免疫印迹 | 第39-42页 |
| 1.2.2.1 组织蛋白取样 | 第40页 |
| 1.2.2.2 BCA蛋白定量 | 第40-41页 |
| 1.2.2.4 蛋白凝胶的制备 | 第41页 |
| 1.2.2.5 蛋白转膜 | 第41-42页 |
| 1.2.2.6 一抗孵育 | 第42页 |
| 1.2.2.7 二抗孵育 | 第42页 |
| 1.2.2.8 蛋白显影 | 第42页 |
| 1.2.2.9 图像扫描及分析 | 第42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-47页 |
| 2.1 荧光定量PCR结果与分析 | 第42-43页 |
| 2.2 WesternBlot结果与分析 | 第43-47页 |
| 2.2.1 BCA蛋白定量结果 | 第43-44页 |
| 2.3.2 蛋白图像扫描数据分析 | 第44-45页 |
| 2.2.3 数据分析 | 第45-47页 |
| 3 结论与讨论 | 第47-49页 |
| 3.1 小结 | 第47页 |
| 3.2 讨论 | 第47-49页 |
| 试验三 脂肪细胞体外培养及RPL9基因差异分析 | 第49-57页 |
| 1 材料与方法 | 第49-53页 |
| 1.1 试验材料 | 第49-50页 |
| 1.1.1 试验动物 | 第49页 |
| 1.1.2 试验材料 | 第49页 |
| 1.1.3 试验试剂 | 第49页 |
| 1.1.4 主要试剂的配制 | 第49-50页 |
| 1.2 试验方法 | 第50-53页 |
| 1.2.1 实验用具的消毒灭菌 | 第50页 |
| 1.2.2 小鼠脂肪细胞的体外培养 | 第50-52页 |
| 1.2.2.1 准备工作 | 第50页 |
| 1.2.2.2 KM小鼠原代脂肪细胞的培养 | 第50-51页 |
| 1.2.2.3 小鼠原代脂肪细胞的传代 | 第51-52页 |
| 1.2.2.4 原代脂肪细胞的诱导分化 | 第52页 |
| 1.2.2.5 脂肪细胞的冻存 | 第52页 |
| 1.2.2.6 脂肪细胞的复苏 | 第52页 |
| 1.2.3 脂肪细胞的差异性表达 | 第52-53页 |
| 1.2.3.1 脂肪细胞RNA提取 | 第52-53页 |
| 1.2.3.2 脂肪细胞RNA浓度及纯度测定 | 第53页 |
| 1.2.3.3 反转录 | 第53页 |
| 1.2.3.4 荧光定量PCR | 第53页 |
| 1.2.3.5 数据分析 | 第53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-55页 |
| 2.1 细胞生长结果 | 第53-54页 |
| 2.2 脂肪细胞诱导分化结果 | 第54页 |
| 2.3 脂肪细胞基因差异性表达分析结果 | 第54-55页 |
| 3 小结与讨论 | 第55-57页 |
| 3.1 小结 | 第55-56页 |
| 3.2 讨论 | 第56-57页 |
| 全文讨论与结论 | 第57-60页 |
| 1 讨论 | 第57-58页 |
| 1.1 RPL9基因的选择 | 第57页 |
| 1.2 RPL9基因的克隆与生物信息学分析 | 第57页 |
| 1.3 RPL9基因及蛋白差异表达分析 | 第57-58页 |
| 1.4 脂肪细胞体外培养 | 第58页 |
| 1.5 展望 | 第58页 |
| 2 结论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 英文摘要 | 第66-68页 |
