抑制肠道致病菌抗菌蛋白生产菌株的构建及发酵条件初步探索
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第1章 绪论 | 第9-17页 |
| 1.1 枯草芽孢杆菌及其应用 | 第9-13页 |
| 1.1.1 枯草芽孢杆菌的特性 | 第9页 |
| 1.1.2 枯草芽孢杆菌的作用机制 | 第9-10页 |
| 1.1.3 枯草芽孢杆菌微生态制剂的应用 | 第10-13页 |
| 1.2 枯草芽孢杆菌发酵工艺的影响因素 | 第13-15页 |
| 1.2.1 培养基组分对发酵的影响 | 第13-14页 |
| 1.2.2 发酵条件的影响 | 第14-15页 |
| 1.3 培养基优化方法 | 第15-16页 |
| 1.3.1 单因素试验法 | 第15页 |
| 1.3.2 正交设计法 | 第15-16页 |
| 1.4 课题背景及主要研究内容 | 第16-17页 |
| 第2章 生产菌株的构建 | 第17-27页 |
| 2.1 引言 | 第17页 |
| 2.2 试验菌种、试剂和仪器 | 第17-18页 |
| 2.2.1 菌种和质粒载体 | 第17页 |
| 2.2.2 试剂 | 第17-18页 |
| 2.2.3 仪器 | 第18页 |
| 2.3 试验方法 | 第18-23页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第18-19页 |
| 2.3.2 菌体活化与质粒提取 | 第19页 |
| 2.3.3 穿梭载体双酶切与去磷酸化 | 第19-20页 |
| 2.3.4 目的基因的扩增 | 第20页 |
| 2.3.5 扩增产物的酶切 | 第20-21页 |
| 2.3.6 目的基因与载体的连接 | 第21页 |
| 2.3.7 转入DH5α并测序 | 第21-22页 |
| 2.3.8 枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备 | 第22页 |
| 2.3.9 质粒转入枯草芽孢杆菌感受态细胞 | 第22-23页 |
| 2.3.10 转入中测序并保存 | 第23页 |
| 2.4 试验结果与分析 | 第23-25页 |
| 2.4.1 质粒提取结果 | 第23-24页 |
| 2.4.2 目的基因的扩增结果 | 第24页 |
| 2.4.3 目的基因与载体的连接结果 | 第24-25页 |
| 2.4.4 测序比对结果 | 第25页 |
| 2.5 本章小结 | 第25-27页 |
| 第3章 抗菌蛋白及益生菌抗菌功能的初步探究 | 第27-39页 |
| 3.1 引言 | 第27页 |
| 3.2 试验试剂和仪器 | 第27-28页 |
| 3.2.1 试验试剂 | 第27-28页 |
| 3.2.2 试验仪器 | 第28页 |
| 3.3 试验方法 | 第28-33页 |
| 3.3.1 试验小鼠的饲养与选取 | 第28-29页 |
| 3.3.2 致病细菌的培养 | 第29页 |
| 3.3.3 抗菌蛋白的表达纯化及益生菌的制备 | 第29-33页 |
| 3.3.4 肠道致病菌K88小鼠攻毒模型的建立 | 第33页 |
| 3.3.5 益生菌及抗菌蛋白对攻毒小鼠的治疗试验 | 第33页 |
| 3.4 试验结果与分析 | 第33-37页 |
| 3.4.1 肠道致病菌K88的培养结果 | 第33-34页 |
| 3.4.2 肠道益生菌及LW1的培养结果 | 第34-35页 |
| 3.4.3 攻毒结果及半致死剂量的确定 | 第35-36页 |
| 3.4.4 益生菌及蛋白免疫效果 | 第36-37页 |
| 3.5 本章小结 | 第37-39页 |
| 第4章 培养基组分的选择和摇瓶发酵条件的优化 | 第39-53页 |
| 4.1 引言 | 第39页 |
| 4.2 菌种、试剂和仪器 | 第39-40页 |
| 4.2.1 菌种 | 第39页 |
| 4.2.2 培养基 | 第39页 |
| 4.2.3 试验试剂 | 第39-40页 |
| 4.2.4 试验仪器 | 第40页 |
| 4.3 试验方法 | 第40-42页 |
| 4.3.1 菌种活化 | 第40页 |
| 4.3.2 种子液的制备 | 第40页 |
| 4.3.3 培养基单因素试验 | 第40-41页 |
| 4.3.4 正交试验设计 | 第41页 |
| 4.3.5 正交优化前后对比 | 第41页 |
| 4.3.6 发酵条件的优化 | 第41-42页 |
| 4.3.7 数据处理 | 第42页 |
| 4.4 试验结果与分析 | 第42-51页 |
| 4.4.1 培养基单因素试验 | 第42-45页 |
| 4.4.2 碳源、氮源、无机盐的正交优化 | 第45-47页 |
| 4.4.3 发酵条件的优化结果 | 第47-51页 |
| 4.5 本章小结 | 第51-53页 |
| 第5章 发酵罐发酵条件的优化 | 第53-61页 |
| 5.1 引言 | 第53页 |
| 5.2 菌种、试剂和仪器 | 第53-54页 |
| 5.2.1 试验菌种 | 第53页 |
| 5.2.2 试验试剂 | 第53页 |
| 5.2.3 试验仪器 | 第53-54页 |
| 5.3 试验方法 | 第54-55页 |
| 5.3.1 工业生产氮源的选择 | 第54页 |
| 5.3.2 发酵培养基及菌种的确定 | 第54页 |
| 5.3.3 发酵罐三项发酵条件的初步选择 | 第54-55页 |
| 5.4 试验结果与分析 | 第55-60页 |
| 5.4.1 氮源选择结果 | 第55-56页 |
| 5.4.2 发酵罐培养基及菌种确定结果 | 第56页 |
| 5.4.3 三种发酵条件初步选择的结果 | 第56-60页 |
| 5.5 本章小结 | 第60-61页 |
| 结论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 攻读硕士学位期间所发表的论文 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69-71页 |
| 个人简历 | 第71页 |
