| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-25页 |
| 1 柑橘衰退病的研究进展 | 第12-20页 |
| ·柑橘衰退病 | 第12页 |
| ·柑橘衰退病病毒 | 第12-14页 |
| ·CTV的株系分化及症状 | 第14页 |
| ·CTV的传播途径 | 第14-15页 |
| ·CTV的检测及株系鉴定 | 第15-17页 |
| ·指示植物检测 | 第15页 |
| ·内含体电镜检测 | 第15页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第15-16页 |
| ·衣壳蛋白的多肽图谱 | 第16页 |
| ·Western blot | 第16页 |
| ·Northern blot | 第16-17页 |
| ·RT-PCR | 第17页 |
| ·CTV的致病性分析及其防治 | 第17-20页 |
| ·加强植物检疫 | 第18页 |
| ·选用耐病砧木 | 第18页 |
| ·脱毒 | 第18页 |
| ·弱毒系交叉保护 | 第18-20页 |
| ·交叉保护作用的研究简史 | 第18页 |
| ·交叉保护在柑橘上的应用 | 第18-19页 |
| ·存在的问题和今后改进的方法 | 第19-20页 |
| 2 RNAi及其研究进展 | 第20-25页 |
| ·RNAi的发现 | 第20页 |
| ·RNAi的反应历程 | 第20-22页 |
| ·植物RNAi的主要特征 | 第22-23页 |
| ·RNAi在植物抗病毒上的应用 | 第23-25页 |
| 第二章 柑橘衰退病弱毒系交叉保护作用的评价 | 第25-35页 |
| 1 材料与方法 | 第25-29页 |
| ·试验材料 | 第25-26页 |
| ·植物材料 | 第25页 |
| ·试剂及仪器 | 第25-26页 |
| ·引物的设计与合成 | 第26页 |
| ·试验方法 | 第26-29页 |
| ·指示植物症状观察 | 第26页 |
| ·柑橘叶片总RNA的微量提取 | 第26-27页 |
| ·反转录聚合酶链式反应 | 第27-28页 |
| ·RT-PCR扩增产物的纯化 | 第28页 |
| ·PCR扩增片段的克隆 | 第28页 |
| ·鉴定携带重组质粒的克隆 | 第28页 |
| ·阳性克隆测序 | 第28-29页 |
| 2 结果与分析 | 第29-33页 |
| ·指示植物症状分析 | 第29-30页 |
| ·分子鉴定分析 | 第30-33页 |
| ·RNA的微量提取 | 第30-31页 |
| ·RT-PCR分析 | 第31-32页 |
| ·CTV弱毒系p23基因序列分析 | 第32-33页 |
| 3 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 抗柑橘衰退病RNAi载体的构建 | 第35-46页 |
| 1 材料与方法 | 第35-40页 |
| ·实验材料 | 第35-36页 |
| ·植物材料 | 第35页 |
| ·试剂及仪器 | 第35-36页 |
| ·实验方法 | 第36-40页 |
| ·质粒的提取 | 第36-37页 |
| ·质粒的双酶切及连接转化 | 第37页 |
| ·载体构建引物的设计 | 第37-38页 |
| ·RNAi载体构建 | 第38-39页 |
| ·载体的检测 | 第39-40页 |
| 2 ·结果与分析 | 第40-43页 |
| ·质粒的提取及酶切检测 | 第40-41页 |
| ·RNAi载体的双酶切检测及测序 | 第41-43页 |
| 3 讨论 | 第43-46页 |
| ·RNAi载体的构建方式 | 第43-44页 |
| ·如何提高载体的构建效率 | 第44-46页 |
| 第四章 RNAi载体pCTV23-rnai的遗传转化 | 第46-53页 |
| 1 材料与方法 | 第46-50页 |
| ·试验材料 | 第46-47页 |
| ·菌液及植物材料 | 第46页 |
| ·试剂及仪器 | 第46-47页 |
| ·主要培养基配方 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-50页 |
| ·农杆菌EHA105感受态的制备 | 第47-48页 |
| ·冻融法转化农杆菌EHA105 | 第48页 |
| ·受体材料的获得 | 第48页 |
| ·外植体转化处理 | 第48页 |
| ·抗性芽的诱导 | 第48页 |
| ·不定芽微芽嫁接成苗 | 第48-49页 |
| ·温室二次嫁接 | 第49页 |
| ·转pCTV23-rnai大红甜橙的PCR鉴定 | 第49-50页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第49-50页 |
| ·转化再生植株的PCR检测 | 第50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-52页 |
| ·转pCTV23-rnai大红甜橙植株的获得 | 第50-51页 |
| ·转基因植株的检测 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-53页 |
| 全文总结 | 第53页 |
| 研究展望 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-63页 |
| 附录 | 第63-67页 |
| 缓冲液、溶液、培养基配方 | 第63-65页 |
| CTV p23核苷酸序列片断 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 个人简历 | 第68页 |