| 摘要 | 第10-13页 |
| ABSTRACT | 第13-15页 |
| 中英文缩写对照表 | 第16-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-59页 |
| 1 前言 | 第18-19页 |
| 2 脂肪的来源、形成及分类 | 第19-21页 |
| 3 间充质干细胞的多向分化潜能与细胞命运决定 | 第21-28页 |
| 3.1 间充质干细胞的概述 | 第21页 |
| 3.2 转录因子和信号通路对间充质干细胞命运决定的影响 | 第21-24页 |
| 3.3 表观遗传对间充质干细胞的细胞命运决定的影响 | 第24-25页 |
| 3.4 间充质干细胞与脂肪形成 | 第25-28页 |
| 4 miRNA与间充质干细胞 | 第28-42页 |
| 4.1 miRNA的概述 | 第28页 |
| 4.2 miRNA维持间充质干细胞多能性、协助干细胞的定型与分化 | 第28-32页 |
| 4.3 miRNA与脂肪形成 | 第32-42页 |
| 5 锌指蛋白与脂肪形成 | 第42-48页 |
| 5.1 锌指蛋白的分类及功能概述 | 第42-45页 |
| 5.2 锌指蛋白调节脂肪形成 | 第45-48页 |
| 6 锌指蛋白Zfp217的研究进展 | 第48-52页 |
| 6.1 锌指蛋白Zfp217的发现与结构特征 | 第48-50页 |
| 6.2 锌指蛋白Zfp217功能研究进展 | 第50-52页 |
| 7 蛋白质的相互作用 | 第52-57页 |
| 7.1 蛋白质相互作用的概述 | 第52页 |
| 7.2 蛋白质相互作用的研究方法 | 第52-57页 |
| 8 目的与意义 | 第57页 |
| 9 技术路线 | 第57-59页 |
| 第二章 锌指蛋白Zfp217的生物信息学分析 | 第59-82页 |
| 1 前言 | 第59页 |
| 2 试验方法 | 第59-60页 |
| 2.1 Zfp217的一级结构分析 | 第59页 |
| 2.2 Zfp217蛋白质的二级结构和三维结构预测 | 第59-60页 |
| 2.3 Zfp217同源进化树的构建 | 第60页 |
| 2.4 Gene Expression Omnibus(GEO)数据库挖掘 | 第60页 |
| 3 结果与分析 | 第60-76页 |
| 3.1 Zfp217的一级结构 | 第60-68页 |
| 3.1.1 Zfp217的锌指结构相似性 | 第60-62页 |
| 3.1.2 Zfp217蛋白序列的理化性质 | 第62-65页 |
| 3.1.3 Zfp217的信号肽预测及跨膜区分析 | 第65-66页 |
| 3.1.4 Zfp217的转录后修饰 | 第66-68页 |
| 3.2 Zfp217蛋白序列二级结构分析和三级结构同源建模及评估 | 第68-69页 |
| 3.3 Zfp217的进化树构建 | 第69-71页 |
| 3.4 Zfp217 GEO数据库挖掘 | 第71-76页 |
| 4 讨论 | 第76-81页 |
| 5 本章小结 | 第81-82页 |
| 第三章 Zfp217的表达与功能研究 | 第82-112页 |
| 1 前言 | 第82页 |
| 2 试验材料 | 第82-85页 |
| 2.1 试验动物、细胞系、菌株和载体 | 第82页 |
| 2.2 主要试剂和仪器 | 第82-83页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第82-83页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第83页 |
| 2.3 主要试剂的配制 | 第83-85页 |
| 3 试验方法 | 第85-97页 |
| 3.1 高脂日粮(high-fat diet,HFD)诱导的小鼠肥胖模型及正常日粮(normal chow diet,NCD)对照模型的构建 | 第85页 |
| 3.2 组织采样 | 第85页 |
| 3.3 组织总RNA的提取 | 第85-86页 |
| 3.4 细胞总RNA的提取 | 第86-87页 |
| 3.5 细胞的培养及诱导分化 | 第87-88页 |
| 3.5.1 细胞的复苏 | 第87页 |
| 3.5.2 细胞的常规培养 | 第87-88页 |
| 3.5.3 细胞的冻存 | 第88页 |
| 3.5.4 3T3-L1细胞的成脂诱导分化 | 第88页 |
| 3.5.5 C3H10T1/2细胞的诱导分化 | 第88页 |
| 3.6 油红O染色 | 第88-89页 |
| 3.7 甘油三酯含量测定 | 第89页 |
| 3.8 细胞的转染 | 第89页 |
| 3.9 双荧光素酶相对活性的检测 | 第89-90页 |
| 3.9.1 细胞裂解 | 第89-90页 |
| 3.9.2 双荧光素酶活性的检测及计算 | 第90页 |
| 3.10 反转录和QPCR | 第90-92页 |
| 3.10.1 反转录 | 第90-91页 |
| 3.10.2 QPCR | 第91-92页 |
| 3.11 细胞总蛋白抽提及Western blot检测 | 第92-94页 |
| 3.11.1 细胞总蛋白抽提 | 第92页 |
| 3.11.2 蛋白浓度的测定 | 第92-93页 |
| 3.11.3 Western blot检测 | 第93-94页 |
| 3.12 流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡 | 第94-95页 |
| 3.12.1 细胞周期 | 第94页 |
| 3.12.2 细胞凋亡 | 第94-95页 |
| 3.13 EdU染色 | 第95页 |
| 3.14 MTT法测定细胞的增殖 | 第95-96页 |
| 3.15 肝脏组织的HE染色 | 第96页 |
| 3.16 鼠Zfp217基因的分子克隆 | 第96页 |
| 3.17 统计学分析 | 第96-97页 |
| 4 结果与分析 | 第97-108页 |
| 4.1 Zfp217的表达模式 | 第97-101页 |
| 4.1.1 Zfp217在细胞成脂分化过程中的表达模式以及在猪和鼠不同组织的表达模式 | 第97-101页 |
| 4.2 鼠Zfp217CDS的克隆 | 第101-102页 |
| 4.3 Zfp217对C3H10T1/2细胞和3T3-L1细胞成脂分化的作用 | 第102-103页 |
| 4.4 Zfp217对C3H10T1/2细胞和3T3-L1细胞增殖的作用 | 第103-104页 |
| 4.5 Zfp217对C3H10T1/2细胞周期和凋亡的作用 | 第104-105页 |
| 4.6 Zfp217通过影响细胞DNA合成以及与Ezh2互作促进细胞成脂分化 | 第105-108页 |
| 5 讨论 | 第108-111页 |
| 5.1 Zfp217的表达模式 | 第108-110页 |
| 5.2 Zfp217对细胞的成脂、增殖、周期和凋亡的作用及与Ezh2互作促进细胞成脂分化 | 第110-111页 |
| 6 本章小结 | 第111-112页 |
| 第四章 靶向作用Zfp217的miRNA筛选、验证及功能研究 | 第112-147页 |
| 1 前言 | 第112页 |
| 2 试验材料 | 第112-113页 |
| 2.1 试验动物、细胞系、菌株和载体 | 第112页 |
| 2.2 主要试剂和仪器 | 第112-113页 |
| 2.3 主要试剂的配制 | 第113页 |
| 3 试验方法 | 第113-120页 |
| 3.1 miRNA的反转录和QPCR | 第113-114页 |
| 3.2 靶向作用Zfp217的miRNA的预测和验证 | 第114-120页 |
| 3.2.1 靶向作用Zfp217的miRNA的预测和潜在调控网络的构建 | 第114页 |
| 3.2.2 靶基因3'UTR双荧光素酶报告载体(wt/mut)的构建 | 第114-120页 |
| 3.3 统计学分析 | 第120页 |
| 4 结果与分析 | 第120-140页 |
| 4.1 生物信息学预测靶向作用Zfp217的miRNA | 第120-123页 |
| 4.2 候选miRNA靶向调节作用的验证 | 第123-127页 |
| 4.2.1 双荧光素酶系统验证候选miRNA与靶基因的结合 | 第123-127页 |
| 4.2.2 QPCR和Western blot验证候选miRNA与靶基因的结合 | 第127页 |
| 4.3 候选miRNA的表达模式 | 第127-132页 |
| 4.3.1 候选miRNA在C3H10T1/2细胞成脂分化过程中的表达模式 | 第127-128页 |
| 4.3.2 候选miRNA在猪和鼠不同组织的表达模式 | 第128-131页 |
| 4.3.3 候选miRNA在高脂日粮诱导的肥胖小鼠脂肪组织中的表达模式 | 第131-132页 |
| 4.4 候选miRNA对C3H10T1/2细胞和3T3-L1细胞成脂分化的作用 | 第132-134页 |
| 4.5 miR-503和miR-135a对细胞的增殖、周期、凋亡和DNA合成的作用 | 第134-138页 |
| 4.6 miR-503和miR-135a前体序列分析 | 第138-140页 |
| 5 讨论 | 第140-146页 |
| 5.1 靶向作用Zfp217的miRNA的预测及验证 | 第140-142页 |
| 5.2 候选miRNA的表达模式 | 第142-144页 |
| 5.3 miR-503和miR-135a对细胞的成脂分化、增殖、周期、凋亡和DNA合成的作用 | 第144-146页 |
| 6 本章小结 | 第146-147页 |
| 第五章 总结与展望 | 第147-149页 |
| 1 全文总结 | 第147-148页 |
| 2 主要创新点 | 第148页 |
| 3 工作展望 | 第148-149页 |
| 参考文献 | 第149-181页 |
| 附录 | 第181-195页 |
| 在读期间发表论文 | 第195-197页 |
| 致谢 | 第197-198页 |
