| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 第1章 绪论 | 第14-39页 |
| 1.1 无脊椎动物的免疫防御机制 | 第14-24页 |
| 1.1.1 物理防御 | 第14-15页 |
| 1.1.2 细胞免疫 | 第15-17页 |
| 1.1.3 体液免疫 | 第17-20页 |
| 1.1.4 模式识别受体 | 第20-24页 |
| 1.2 无脊椎动物的免疫相关信号途径 | 第24-28页 |
| 1.2.1 Toll信号通路 | 第24-26页 |
| 1.2.2 IMD信号通路 | 第26-27页 |
| 1.2.3 JAK/STAT信号通路 | 第27-28页 |
| 1.3 L-型凝集素 | 第28-31页 |
| 1.3.1 凝集素的分类 | 第28-29页 |
| 1.3.2 L-型凝集素的发现 | 第29页 |
| 1.3.3 L-型凝集素的结构特征 | 第29-30页 |
| 1.3.4 L-型凝集素的功能 | 第30-31页 |
| 1.4 钙连蛋白和钙网蛋白 | 第31-34页 |
| 1.4.1 钙连蛋白和钙网蛋白的结构 | 第31-32页 |
| 1.4.2 钙连蛋白和钙网蛋白的功能 | 第32-33页 |
| 1.4.3 钙连蛋白和钙网蛋白的作用机制 | 第33-34页 |
| 1.5 miRNA的研究进展 | 第34-37页 |
| 1.5.1 miRNA的产生及结构特征 | 第35-36页 |
| 1.5.2 miRNA的作用机制 | 第36-37页 |
| 1.5.3 miRNA的功能 | 第37页 |
| 1.6 本论文研究的目的和意义 | 第37-38页 |
| 1.7 实验技术路线 | 第38-39页 |
| 第2章 中华绒螯蟹L-型凝集素的基因克隆和功能鉴定 | 第39-71页 |
| 2.1 前言 | 第39-40页 |
| 2.2 材料和方法 | 第40-57页 |
| 2.2.1 菌株和载体 | 第40页 |
| 2.2.2 主要仪器和设备 | 第40-41页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第41-45页 |
| 2.2.4 引物设计与合成 | 第45-46页 |
| 2.2.5 实验动物及免疫刺激 | 第46页 |
| 2.2.6 总RNA提取和cDNA合成 | 第46-49页 |
| 2.2.7 EsERGIC-53和Es VIP36 cDNA的全长克隆 | 第49-51页 |
| 2.2.8 序列信息分析 | 第51页 |
| 2.2.9 组织分布和表达模式分析 | 第51-52页 |
| 2.2.10 重组蛋白的表达和纯化 | 第52-56页 |
| 2.2.11 细菌凝集实验 | 第56页 |
| 2.2.12 细菌结合实验 | 第56页 |
| 2.2.13 糖直接结合实验 | 第56-57页 |
| 2.2.14 体内清除实验 | 第57页 |
| 2.3 实验结果 | 第57-68页 |
| 2.3.1 EsERGIC-53和EsVIP36的基因克隆及序列分析 | 第57-60页 |
| 2.3.2 EsERGIC-53和EsVIP36的相似性分析 | 第60-62页 |
| 2.3.3 EsERGIC-53和EsVIP36的组织分布 | 第62-63页 |
| 2.3.4 EsERGIC-53和EsVIP36的表达模式分析 | 第63-65页 |
| 2.3.5 EsERGIC-53和EsVIP36结构域的重组表达及纯化 | 第65页 |
| 2.3.6 rEsERGIC-53-LTLD和rEsVIP36-LTLD的细菌凝集活性 | 第65-66页 |
| 2.3.7 rEsERGIC-53-LTLD和rEsVIP36-LTLD的细菌结合活性 | 第66-67页 |
| 2.3.8 rEsERGIC-53-LTLD和rEsVIP36-LTLD的糖结合能力 | 第67-68页 |
| 2.3.9 rEsERGIC-53-LTLD和rEsVIP36-LTLD参与细菌清除作用 | 第68页 |
| 2.4 讨论 | 第68-71页 |
| 第3章 中华绒螯蟹钙连蛋白和钙网蛋白的分子克隆和功能研究 | 第71-92页 |
| 3.1 前言 | 第71-72页 |
| 3.2 材料和方法 | 第72-78页 |
| 3.2.1 菌株、载体、仪器和试剂 | 第72-73页 |
| 3.2.2 引物设计与合成 | 第73页 |
| 3.2.3 实验动物及免疫刺激 | 第73-74页 |
| 3.2.4 总RNA提取和cDNA合成 | 第74页 |
| 3.2.5 EsCnx和EsCrt cDNA的全长克隆 | 第74页 |
| 3.2.6 序列信息分析 | 第74页 |
| 3.2.7 EsCnx和EsCrt在mRNA水平上的组织分布和表达模式分析 | 第74页 |
| 3.2.8 重组蛋白的表达和纯化 | 第74页 |
| 3.2.9 EsCnx和EsCrt在蛋白水平上的组织分布和表达模式分析 | 第74页 |
| 3.2.10 细胞免疫荧光法定位蛋白分布 | 第74-75页 |
| 3.2.11 细菌结合实验 | 第75页 |
| 3.2.12 糖直接结合实验 | 第75页 |
| 3.2.13 体内清除实验 | 第75-78页 |
| 3.3 实验结果 | 第78-90页 |
| 3.3.1 EsCnx和EsCrt的基因克隆 | 第78-81页 |
| 3.3.2 EsCnx和EsCrt的多序列比对及进化树分析 | 第81-84页 |
| 3.3.3 EsCnx和EsCrt的组织分布 | 第84-85页 |
| 3.3.4 EsCnx和EsCrt的表达模式分析 | 第85-87页 |
| 3.3.5 rEsCnx和rEsCrt的细菌结合和糖结合活性 | 第87-89页 |
| 3.3.6 rEsCnx和rEsCrt促进机体对副溶血弧菌的清除速度 | 第89-90页 |
| 3.4 讨论 | 第90-92页 |
| 第4章 中华绒螯蟹Toll信号通路关键因子(Myd88、Pelle)的基因克隆和功能研究 | 第92-116页 |
| 4.1 前言 | 第92-94页 |
| 4.2 材料和方法 | 第94-98页 |
| 4.2.1 菌株、载体、仪器和试剂 | 第94页 |
| 4.2.2 引物设计与合成 | 第94-96页 |
| 4.2.3 实验动物及免疫刺激 | 第96页 |
| 4.2.4 总RNA提取和cDNA合成 | 第96页 |
| 4.2.5 EsMyd88和EsPelle cDNA的全长克隆 | 第96页 |
| 4.2.6 序列信息分析 | 第96页 |
| 4.2.7 EsMyd88和EsPelle的组织分布和表达模式分析 | 第96页 |
| 4.2.8 EsMyd88和EsTube重组蛋白的表达、纯化及Western blot检测 | 第96-97页 |
| 4.2.9 Pull down实验 | 第97页 |
| 4.2.10 昆虫过表达载体构建、S2细胞培养与转染 | 第97-98页 |
| 4.2.11 EsMyd88和EsPelle沉默后对河蟹抗菌肽基因的表达影响 | 第98页 |
| 4.3 实验结果 | 第98-114页 |
| 4.3.1 EsMyd88和EsPelle的基因克隆 | 第98-101页 |
| 4.3.2 EsMyd88和EsPelle的多重序列比对及进化树分析 | 第101-104页 |
| 4.3.3 EsMyd88和EsPelle的组织分布和表达模式分析 | 第104-108页 |
| 4.3.4 EsMyd88和EsTube重组蛋白的表达及纯化 | 第108-109页 |
| 4.3.5 Pull-down分析EsMyd88和EsTube间的相互作用 | 第109-110页 |
| 4.3.6 EsMyd88、EsTube和EsPelle过表达能够激活Drosophila抗菌肽的表达 | 第110-111页 |
| 4.3.7 EsMyd88和EsPelle沉默后能够抑制河蟹抗菌肽的表达 | 第111-114页 |
| 4.4 讨论 | 第114-116页 |
| 第5章 中华绒螯蟹miR-7调控Myd88在WSSV感染中的分子机制 | 第116-134页 |
| 5.1 前言 | 第116-117页 |
| 5.2 材料和方法 | 第117-123页 |
| 5.2.1 菌株、载体、仪器和试剂 | 第117页 |
| 5.2.2 实验动物及免疫刺激 | 第117-118页 |
| 5.2.3 小RNA提取和cDNA合成 | 第118-119页 |
| 5.2.4 qRT-PCR检测miRNA的组织分布及WSSV刺激后的表达模式 | 第119页 |
| 5.2.5 miRNA的过表达与沉默 | 第119-120页 |
| 5.2.6 WSSV拷贝数的检测 | 第120页 |
| 5.2.7 miRNA靶基因的预测 | 第120-121页 |
| 5.2.8 miRNA靶基因的验证 | 第121-122页 |
| 5.2.9 体内分析 | 第122页 |
| 5.2.10 qRT-PCR分析基因表达模式和WSSV拷贝数变化 | 第122-123页 |
| 5.3 实验结果 | 第123-131页 |
| 5.3.1 miR-7在WSSV感染中的作用 | 第123-124页 |
| 5.3.2 miR-7靶基因的预测与验证 | 第124-126页 |
| 5.3.3 Myd88在病毒感染中的作用 | 第126页 |
| 5.3.4 Toll信号通路下游免疫效应基因(ILF2和IL-16L)的验证 | 第126-128页 |
| 5.3.5 ILF2可调控IL-16L的表达 | 第128-129页 |
| 5.3.6 miR-7可抑制ILF2和IL-16L的表达 | 第129-130页 |
| 5.3.7 ILF2和IL-16L在病毒感染中的作用 | 第130-131页 |
| 5.4 讨论 | 第131-134页 |
| 第6章 结论 | 第134-137页 |
| 6.1 中华绒螯蟹L-型凝集素的基因克隆和功能鉴定 | 第134页 |
| 6.2 中华绒螫蟹钙连蛋白和钙网蛋白的分子克隆和功能研究 | 第134-135页 |
| 6.3 中华绒螯蟹Toll信号通路关键因子的基因克隆和功能研究 | 第135页 |
| 6.4 中华绒螯蟹miR-7调控Myd88在WSSV感染中的分子机制 | 第135-136页 |
| 6.5 创新点总结 | 第136页 |
| 6.6 展望 | 第136-137页 |
| 参考文献 | 第137-158页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第158-160页 |
| 致谢 | 第160页 |
