| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略词表(Abbreviation) | 第14-17页 |
| 第1章 文献综述 | 第17-40页 |
| 1.1 结核病概述 | 第17-24页 |
| 1.1.1 病原学 | 第18-20页 |
| 1.1.2 流行病学 | 第20-21页 |
| 1.1.3 诊断及病原鉴定 | 第21-23页 |
| 1.1.4 预防及治疗 | 第23-24页 |
| 1.2 结核分枝杆菌的感染与免疫 | 第24-33页 |
| 1.2.1 肺生理结构与结核病 | 第25-26页 |
| 1.2.2 结核分枝杆菌的生命周期 | 第26-27页 |
| 1.2.3 免疫调节与炎症反应 | 第27-30页 |
| 1.2.4 散播性卡介苗 | 第30页 |
| 1.2.5 结核分枝杆菌小鼠模型 | 第30-33页 |
| 1.3 TREM1研究进展 | 第33-38页 |
| 1.3.1 TREM1调节炎症反应的机制 | 第34-36页 |
| 1.3.2 sTREM1在传染性急性炎症疾病中的诊断前景 | 第36-37页 |
| 1.3.3 TREM1在非传染性炎症疾病及癌症中的治疗前景 | 第37-38页 |
| 1.4 立题依据 | 第38-40页 |
| 第2章 强弱毒株感染人巨噬细胞差异蛋白质组学分析 | 第40-75页 |
| 2.1 前言 | 第40-42页 |
| 2.2 实验材料 | 第42-47页 |
| 2.2.1 菌株及细胞 | 第42页 |
| 2.2.2 主要试剂及试剂盒 | 第42-43页 |
| 2.2.3 培养基及主要溶液的配制 | 第43-44页 |
| 2.2.4 主要实验器材 | 第44-45页 |
| 2.2.5 引物 | 第45-47页 |
| 2.3 实验方法 | 第47-60页 |
| 2.3.1 菌株的活化及扩大培养 | 第47页 |
| 2.3.2 细胞的复苏、传代及诱导分化 | 第47-48页 |
| 2.3.3 结核分枝杆菌感染细胞 | 第48页 |
| 2.3.4 细胞蛋白样品的制备及定量 | 第48-49页 |
| 2.3.5 蛋白质的消化 | 第49页 |
| 2.3.6 肽段的标记 | 第49-50页 |
| 2.3.7 HPLC(强阳离子交换色谱)分析 | 第50-51页 |
| 2.3.8 肽段的纯化(C18反相色谱除盐) | 第51-52页 |
| 2.3.9 质谱检测 | 第52-53页 |
| 2.3.10 蛋白质定性与定量分析流程 | 第53-54页 |
| 2.3.11 生物信息学分析 | 第54-57页 |
| 2.3.12 细胞总RNA的提取及实时相对定量PCR | 第57-58页 |
| 2.3.13 SDS-PAGE检测 | 第58-59页 |
| 2.3.14 统计学分析 | 第59-60页 |
| 2.4 结果与分析 | 第60-71页 |
| 2.4.1 蛋白基本鉴定信息 | 第60-62页 |
| 2.4.2 差异蛋白的筛选 | 第62-63页 |
| 2.4.3 差异蛋白的GO分类 | 第63-64页 |
| 2.4.4 差异蛋白IPA分析 | 第64-68页 |
| 2.4.5 差异蛋白STRING分析 | 第68-69页 |
| 2.4.6 Real-timePCR检测结果 | 第69-71页 |
| 2.5 讨论 | 第71-74页 |
| 2.5.1 BCG感染THP-1差异蛋白质组对比分析 | 第71页 |
| 2.5.2 强毒株感染细胞样品差异蛋白组对比分析 | 第71-72页 |
| 2.5.3 牛源强毒株M.bovis感染细胞样品特有的差异蛋白质 | 第72-73页 |
| 2.5.4 细胞因子差异分析 | 第73-74页 |
| 2.6 小结与展望 | 第74-75页 |
| 第3章 PMN在宿主应答BCG感染过程中的功能探索 | 第75-121页 |
| 3.1 前言 | 第75-77页 |
| 3.2 实验材料 | 第77-80页 |
| 3.2.1 菌株 | 第77页 |
| 3.2.2 试验小鼠 | 第77页 |
| 3.2.3 主要试剂及试剂盒 | 第77-79页 |
| 3.2.4 主要溶液的配制 | 第79页 |
| 3.2.5 主要实验器材 | 第79-80页 |
| 3.3 实验方法 | 第80-92页 |
| 3.3.1 道德声明 | 第80页 |
| 3.3.2 菌株的活化及扩大培养 | 第80页 |
| 3.3.3 小鼠感染模型 | 第80-82页 |
| 3.3.4 组织细胞的分离 | 第82-85页 |
| 3.3.5 流式细胞分析 | 第85-89页 |
| 3.3.6 小鼠组织切片的检测 | 第89-91页 |
| 3.3.7 统计学分析 | 第91-92页 |
| 3.4 结果与分析 | 第92-116页 |
| 3.4.1 C57BL/6小鼠经呼吸道感染BCG | 第92-103页 |
| 3.4.2 TREM1?/?小鼠经呼吸道感染BCG初步探究 | 第103-105页 |
| 3.4.3 TREM1?/?小鼠经尾静脉注射感染BCG | 第105-109页 |
| 3.4.4 TREM1?/?小鼠经尾静脉注射感染H37Rv初步研究 | 第109-114页 |
| 3.4.5 Ly6g标记的PMN免疫组化结果 | 第114-116页 |
| 3.5 讨论 | 第116-120页 |
| 3.5.1 经呼吸道感染C57BL/6小鼠通过PMN杀伤BCG | 第116-117页 |
| 3.5.2 不同的感染途径TREM1?/?小鼠反应不同 | 第117-118页 |
| 3.5.3 地塞米松处理能够延长TREM1?/?感染小鼠的存活时间 | 第118-120页 |
| 3.6 小结与展望 | 第120-121页 |
| 第4章 H37RvΔphoPΔRv1759cΔLprG基因缺失菌株的构建 | 第121-149页 |
| 4.1 前言 | 第121-123页 |
| 4.2 实验材料 | 第123-126页 |
| 4.2.1 菌株、质粒载体及细胞 | 第123页 |
| 4.2.2 试验小鼠 | 第123页 |
| 4.2.3 主要试剂及试剂盒 | 第123-124页 |
| 4.2.4 主要溶液的配制 | 第124-125页 |
| 4.2.5 主要实验器材 | 第125页 |
| 4.2.6 引物 | 第125-126页 |
| 4.3 实验方法 | 第126-137页 |
| 4.3.1 菌株的活化及扩大培养 | 第126页 |
| 4.3.2 基因组DNA的提取 | 第126-127页 |
| 4.3.3 分枝杆菌基因敲除方法 | 第127-132页 |
| 4.3.4 基因缺失株的鉴定 | 第132-133页 |
| 4.3.5 基因缺失株的sacB-hyg标签消除 | 第133-134页 |
| 4.3.6 细胞的复苏、传代及诱导分化 | 第134-135页 |
| 4.3.7 生长特性的研究 | 第135页 |
| 4.3.8 THP-1细胞入侵实验和胞内存活实验 | 第135页 |
| 4.3.9 小鼠感染试验 | 第135-136页 |
| 4.3.10 统计学分析 | 第136-137页 |
| 4.4 结果与分析 | 第137-146页 |
| 4.4.1 基因缺失菌株的鉴定 | 第137-138页 |
| 4.4.2 基因缺失株的sacB-hyg标签消除 | 第138-139页 |
| 4.4.3 菌落形态的比较 | 第139-141页 |
| 4.4.4 THP-1细胞入侵实验和胞内存活实验 | 第141-142页 |
| 4.4.5 小鼠感染试验 | 第142-146页 |
| 4.5 讨论 | 第146-148页 |
| 4.5.1 结核分枝杆菌基因缺失方法的探讨 | 第146页 |
| 4.5.2 结核分枝杆菌细胞壁与菌落形态 | 第146-147页 |
| 4.5.3 结核分枝杆菌感染与IL-1β | 第147-148页 |
| 4.6 小结与展望 | 第148-149页 |
| 结论 | 第149-150页 |
| 参考文献 | 第150-180页 |
| 附录 | 第180-183页 |
| 个人简历 | 第183-184页 |
| 致谢 | 第184-186页 |
