| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第1章 绪论 | 第14-26页 |
| 1.1 番茄红素简介 | 第14-15页 |
| 1.2 番茄红素的天然提取 | 第15页 |
| 1.3 番茄红素的化学合成 | 第15页 |
| 1.4 番茄红素的生物合成 | 第15-21页 |
| 1.4.1 利用霉菌生产番茄红素 | 第16-17页 |
| 1.4.2 利用酵母生产番茄红素 | 第17-18页 |
| 1.4.3 利用大肠杆菌生产番茄红素 | 第18-21页 |
| 1.5 酶的底物非特异性 | 第21-24页 |
| 1.5.1 对传统酶的认识：特异性催化 | 第21-22页 |
| 1.5.2 酶的底物非特异性：磷酸水解酶和醇脱氢酶 | 第22页 |
| 1.5.3 大肠杆菌中的磷酸水解酶系统 | 第22-24页 |
| 1.6 本课题研究意义及主要内容 | 第24-26页 |
| 1.6.1 课题意义 | 第24页 |
| 1.6.2 主要内容 | 第24-26页 |
| 第2章 磷酸水解酶基因的预测 | 第26-33页 |
| 2.1 引言 | 第26-27页 |
| 2.2 利用系统生物学方法筛选潜在的磷酸水解酶基因 | 第27-29页 |
| 2.3 利用已知文献报道理性预测潜在的磷酸水解酶目标基因 | 第29-30页 |
| 2.3.1 基于疟原虫中已知对于MEP途径具有抑制作用的磷酸水解酶的分析 | 第29页 |
| 2.3.2 基于酵母基因单敲库实验数据的分析方法 | 第29-30页 |
| 2.4 本章总结 | 第30-33页 |
| 第3章 初始菌株的优化及靶向磷酸水解酶基因双sgRNA质粒的构建 | 第33-74页 |
| 3.1 引言 | 第33-34页 |
| 3.2 实验材料 | 第34-61页 |
| 3.2.1 质粒和菌株 | 第34-38页 |
| 3.2.2 引物 | 第38-56页 |
| 3.2.3 培养基和药品 | 第56-57页 |
| 3.2.4 实验仪器 | 第57-58页 |
| 3.2.5 分子生物学实验试剂和试剂盒 | 第58-59页 |
| 3.2.6 本实验中PCR操作 | 第59-61页 |
| 3.3 初始菌株的优化 | 第61-65页 |
| 3.4 实验方法 | 第65-66页 |
| 3.4.1 细胞浓度的测定 | 第65页 |
| 3.4.2 番茄红素的测定 | 第65-66页 |
| 3.5 验证CRISPRi系统有效性 | 第66-69页 |
| 3.6 同时靶向磷酸水解酶基因双sgRNA质粒的构建 | 第69-71页 |
| 3.7 结果与分析 | 第71-72页 |
| 3.7.1 增加crtEIB基因拷贝数对番茄红素产量影响情况 | 第72页 |
| 3.7.2 含有双sgRNA pTargetF质粒的构建 | 第72页 |
| 3.8 本章小结 | 第72-74页 |
| 第四章 含CRISPRi系统菌株的构建及筛选影响番茄红素产量的磷酸水解酶基因 | 第74-92页 |
| 4.1 引言 | 第74页 |
| 4.2 实验材料 | 第74-81页 |
| 4.2.1 菌株与质粒 | 第74-80页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第80-81页 |
| 4.3 实验方法 | 第81-85页 |
| 4.3.1 大肠杆菌lyc011电转感受态的制备 | 第81-82页 |
| 4.3.2 感受态细胞的电转操作 | 第82页 |
| 4.3.3 大肠杆菌lyc011/dCas9电转感受态的制备 | 第82页 |
| 4.3.4 电转PtargetF质粒 | 第82-83页 |
| 4.3.5 验证菌lyc011/dCas9+PtargetF-gene是否构建成功 | 第83-84页 |
| 4.3.6 筛选影响番茄红素产量的磷酸水解酶基因 | 第84-85页 |
| 4.4 结果与分析 | 第85-91页 |
| 4.4.1 验证是否成功构建菌lyc011-rep-gene | 第85-87页 |
| 4.4.2 表征筛选磷酸水解酶基因 | 第87-91页 |
| 4.5 本章总结 | 第91-92页 |
| 第5章 结论与展望 | 第92-95页 |
| 5.1 结论 | 第92-93页 |
| 5.2 展望 | 第93-95页 |
| 参考文献 | 第95-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
