| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一部分 ：利用CRISPR/Cas9在小鼠胚胎干细胞中进行miR-22的功能研究 | 第10-36页 |
| 前言 | 第10-11页 |
| 1.实验材料与仪器 | 第11-15页 |
| 1.1 实验材料 | 第11页 |
| 1.2 实验试剂 | 第11-12页 |
| 1.3 常用试剂配制 | 第12-13页 |
| 1.4 实验仪器 | 第13-14页 |
| 1.5 引物序列 | 第14-15页 |
| 2.实验方法及步骤 | 第15-27页 |
| 2.1 G418抗性sgRNA表达载体的构建 | 第15-20页 |
| 2.2 miR-22靶向敲除sgRNA载体的构建 | 第20-22页 |
| 2.3 小鼠胚胎干细胞的培养 | 第22-23页 |
| 2.4 小鼠胚胎干细胞电转技术 | 第23-24页 |
| 2.5 阳性克隆的筛选 | 第24页 |
| 2.6 克隆的挑取 | 第24-25页 |
| 2.7 基因组的提取 | 第25页 |
| 2.8 基因型鉴定 | 第25页 |
| 2.9 RNA提取过程 | 第25-26页 |
| 2.10 RT-qPCR | 第26-27页 |
| 3.实验结果 | 第27-31页 |
| 3.1 pGL3-2sgRNA-neor载体的构建 | 第27-28页 |
| 3.2 miR-22靶向敲除sgRNA载体的构建 | 第28-29页 |
| 3.3 miR-22敲除胚胎干细胞的筛选及鉴定 | 第29-30页 |
| 3.4 miR-22缺失未影响小鼠胚胎干细胞的干性维持 | 第30-31页 |
| 4.结论与讨论 | 第31-32页 |
| 参考文献 | 第32-36页 |
| 第二部分 Wdr82在小鼠胚胎干细胞中功能的研究 | 第36-64页 |
| 前言 | 第36-37页 |
| 1.实验材料与仪器 | 第37-39页 |
| 1.1 实验材料 | 第37-38页 |
| 1.2 实验试剂 | 第38页 |
| 1.3 常用试剂配制 | 第38页 |
| 1.4 实验仪器 | 第38页 |
| 1.5 引物序列 | 第38-39页 |
| 2.实验方法及步骤 | 第39-46页 |
| 2.1 Wdr82条件性敲除载体构建 | 第39-43页 |
| 2.2 Wdr82条件性敲除细胞系构建 | 第43-45页 |
| 2.3 拟胚体分化实验 | 第45-46页 |
| 2.4 Wdr82过表达载体的构建 | 第46页 |
| 2.5 Wdr82过表达细胞系构建 | 第46页 |
| 3.实验结果分析 | 第46-58页 |
| 3.1 Wdr82条件性敲除细胞系的构建 | 第46-49页 |
| 3.2 Wdr82的条件性敲除 | 第49-50页 |
| 3.3 Wdr82缺失不影响小鼠胚胎干细胞的干性维持 | 第50-51页 |
| 3.4 Wdr82对胚胎干细胞分化的影响 | 第51-55页 |
| 3.5 Wdr82过表达细胞系的构建 | 第55-56页 |
| 3.6 Wdr82过表达不影响小鼠胚胎干细胞干性维持 | 第56-57页 |
| 3.7 Wdr82过表达能够挽救Wdr82缺失导致的胚胎干细胞分化紊乱 | 第57-58页 |
| 4.结论与讨论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 综述：胚胎干细胞干性维持及多能性调控机制 | 第64-74页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 硕士研究生期间完成的论文 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
