| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-14页 |
| 1.1 糖蛋白 | 第7-8页 |
| 1.1.1 蛋白质的糖基化修饰 | 第7页 |
| 1.1.2 蛋白质糖基化修饰的生理意义 | 第7-8页 |
| 1.1.3 医药糖蛋白的生产方法 | 第8页 |
| 1.2 内切-β-N-乙酰氨基葡糖苷酶(ENGase) | 第8-13页 |
| 1.2.1 ENGase的作用及来源 | 第8-9页 |
| 1.2.2 底物辅助催化机理 | 第9-10页 |
| 1.2.3 突变体的研究 | 第10页 |
| 1.2.4 ENGase的应用 | 第10-13页 |
| 1.3 立题依据及主要研究内容 | 第13-14页 |
| 1.3.1 立题依据 | 第13页 |
| 1.3.2 主要研究内容 | 第13-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第14-19页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第14页 |
| 2.1.2 主要试剂、酶和耗材 | 第14-15页 |
| 2.1.3 培养基 | 第15-16页 |
| 2.1.4 主要溶液的配制 | 第16-18页 |
| 2.1.5 主要仪器与设备 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-27页 |
| 2.2.1 重组质粒的构建 | 第19-21页 |
| 2.2.3 基因定点突变 | 第21-22页 |
| 2.2.4 蛋白质诱导表达 | 第22页 |
| 2.2.5 Western blotting分析蛋白表达 | 第22页 |
| 2.2.6 蛋白粗提液的水解活性检测 | 第22-23页 |
| 2.2.7 重组蛋白的纯化 | 第23页 |
| 2.2.8 蛋白质透析 | 第23页 |
| 2.2.9 纯酶水解活性测定 | 第23页 |
| 2.2.10 高效液相色谱分析 | 第23-24页 |
| 2.2.11 温度和pH的优化 | 第24页 |
| 2.2.12 酶切糖蛋白 | 第24页 |
| 2.2.13 SGP的分离提纯 | 第24-26页 |
| 2.3.14 转糖基活性测定 | 第26-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-38页 |
| 3.1 Endo Tb的基因克隆及表达纯化 | 第27-29页 |
| 3.1.1 Endo Tb氨基酸序列比对 | 第27页 |
| 3.1.2 Nus-Endo Tb融合蛋白的表达和纯化 | 第27-29页 |
| 3.2 Nus-Endo Tb的水解活性检测 | 第29-33页 |
| 3.2.1 对NGA2-Asn-Fmoc的水解活性测定 | 第29-30页 |
| 3.2.2 活性位点的研究 | 第30-31页 |
| 3.2.3 温度和pH的优化 | 第31-32页 |
| 3.2.4 底物特异性分析 | 第32-33页 |
| 3.2.5 对糖蛋白的水解活性测定 | 第33页 |
| 3.3 Nus-Endo Tb-D1转糖基活性的测定 | 第33-38页 |
| 3.3.1 SGP的分离提纯 | 第33-37页 |
| 3.3.2 转糖基活性测定 | 第37-38页 |
| 主要结论与展望 | 第38-39页 |
| 主要结论 | 第38页 |
| 展望 | 第38-39页 |
| 致谢 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-44页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的文章 | 第44页 |
