| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第14-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-28页 |
| 1.1 病原的形态 | 第15页 |
| 1.2 生活史 | 第15-16页 |
| 1.3 流行病学 | 第16页 |
| 1.4 蛋白质相互作用研究 | 第16-18页 |
| 1.4.1 GST-pulldown | 第17页 |
| 1.4.2 免疫共沉淀 | 第17页 |
| 1.4.3 Far-Westernblot | 第17页 |
| 1.4.4 双分子荧光互补实验 | 第17页 |
| 1.4.5 酵母双杂交 | 第17-18页 |
| 1.4.6 蛋白质芯片 | 第18页 |
| 1.4.7 串联亲和纯化 | 第18页 |
| 1.5 环形泰勒虫组学研究 | 第18-19页 |
| 1.6 环形泰勒虫裂殖体阶段蛋白的研究现状 | 第19-24页 |
| 1.6.1 环形泰勒虫表面蛋白(T.annulatasurfaceprotein,TaSP) | 第19-20页 |
| 1.6.2 环形泰勒虫分泌蛋白(T.annulatasecretoryprotein,TaSE) | 第20页 |
| 1.6.3 糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白(GPI-anchoredprotein,gp34) | 第20页 |
| 1.6.4 环形泰勒虫AT-hook结合蛋白(Ta.AT-HooKbindingprotein,TashATfamily) | 第20-21页 |
| 1.6.5 亚端粒编码的可变分泌蛋白(subtelomere-encodedvariablesecretedprotein,SVSPs) | 第21-22页 |
| 1.6.6 环形泰勒虫裂殖体主要表面蛋白P104 | 第22-23页 |
| 1.6.7 热休克蛋白90(Heat-shockprotein90,HSP90) | 第23-24页 |
| 1.6.8 环形泰勒虫肽酰脯氨酰异构酶PIN1(T.annulatapeptidyl-prolylisomerasePIN1,TaPIN1) | 第24页 |
| 1.7 环形泰勒虫参与的信号通路 | 第24-26页 |
| 1.7.1 NF-κB信号通路 | 第24-25页 |
| 1.7.2 JNK信号通路 | 第25页 |
| 1.7.3 PI3-K/AKT信号通路 | 第25页 |
| 1.7.4 Notch信号通路 | 第25-26页 |
| 1.7.5 c-Myc介导的信号通路 | 第26页 |
| 1.8 .研究展望 | 第26-27页 |
| 1.9 研究意义 | 第27-28页 |
| 第二章 环形泰勒虫7种转化相关基因的克隆表达及抗体制备 | 第28-41页 |
| 2.1 材料 | 第28-29页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第28页 |
| 2.1.2 试验试剂 | 第28页 |
| 2.1.3 试验仪器 | 第28-29页 |
| 2.2 方法 | 第29-32页 |
| 2.2.1 TaNM1细胞的培养 | 第29页 |
| 2.2.2 TaNM1细胞TotalRNA的提取 | 第29页 |
| 2.2.3 cDNA第一链的合成 | 第29-30页 |
| 2.2.4 引物设计 | 第30页 |
| 2.2.5 pET30a重组表达载体的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.6 目的蛋白的表达鉴定及纯化 | 第31-32页 |
| 2.2.7 兔源抗体的制备 | 第32页 |
| 2.2.8 兔源抗体的纯化 | 第32页 |
| 2.2.9 亚细胞定位 | 第32页 |
| 2.3 结果 | 第32-39页 |
| 2.3.1 7种转化相关基因的信号肽及跨膜区预测 | 第32-34页 |
| 2.3.2 重组质粒的构建及目的蛋白的表达纯化 | 第34-36页 |
| 2.3.3 兔源抗体的纯化及鉴定 | 第36-37页 |
| 2.3.4 亚细胞定位 | 第37-39页 |
| 2.4 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 牛B淋巴细胞酵母文库构建及诱饵蛋白的自激活性和毒性验证 | 第41-51页 |
| 3.1 材料 | 第41页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第41页 |
| 3.1.2 试验试剂 | 第41页 |
| 3.1.3 试验仪器 | 第41页 |
| 3.2 方法 | 第41-45页 |
| 3.2.1 健康牛PBMCs的分离 | 第41-42页 |
| 3.2.2 B淋巴细胞的分离及鉴定 | 第42-43页 |
| 3.2.2.1 B淋巴细胞的磁性标记 | 第42-43页 |
| 3.2.2.2 B淋巴细胞的磁性分离 | 第43页 |
| 3.2.3 诱饵质粒的构建 | 第43页 |
| 3.2.4 质粒的提取 | 第43-44页 |
| 3.2.5 诱饵质粒自激活性和毒性验证 | 第44-45页 |
| 3.2.5.1 Y2HGold酵母感受态细胞的制备 | 第44-45页 |
| 3.2.5.2 质粒的转化 | 第45页 |
| 3.3 结果 | 第45-49页 |
| 3.3.1 牛B淋巴细胞的分离与鉴定 | 第45-46页 |
| 3.3.2 酵母文库质量鉴定 | 第46-47页 |
| 3.3.3 诱饵质粒的构建 | 第47-48页 |
| 3.3.4 诱饵质粒的自激活性及毒性检测 | 第48-49页 |
| 3.4 讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 TACP与牛B淋巴细胞相互作分子的筛选 | 第51-61页 |
| 4.1 材料 | 第51-52页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第51页 |
| 4.1.2 试验试剂 | 第51页 |
| 4.1.3 试验仪器 | 第51-52页 |
| 4.2 方法 | 第52-55页 |
| 4.2.1 TaCP蛋白结构功能分析 | 第52页 |
| 4.2.2 诱饵质粒转化效率的鉴定 | 第52页 |
| 4.2.3 诱饵质粒在Y2HGold细胞中的表达鉴定 | 第52-53页 |
| 4.2.4 TaCP的酵母双杂交筛选 | 第53页 |
| 4.2.4.1 Y2HGold酵母感受态细胞的制备 | 第53页 |
| 4.2.4.2 酵母双杂交筛选 | 第53页 |
| 4.2.5 诱饵质粒与文库质粒的相互作用鉴定 | 第53-55页 |
| 4.2.5.1 酵母质粒的提取 | 第54页 |
| 4.2.5.2 文库质粒的PCR鉴定 | 第54-55页 |
| 4.2.5.3 诱饵质粒与文库质粒的共转化 | 第55页 |
| 4.2.6 相互作用分子序列分析及功能预测 | 第55页 |
| 4.3 结果 | 第55-58页 |
| 4.3.1 TaCP蛋白结构功能分析 | 第55-56页 |
| 4.3.2 诱饵质粒转化子鉴定 | 第56页 |
| 4.3.3 诱饵蛋白的表达鉴定 | 第56-57页 |
| 4.3.4 相互作用分子的鉴定 | 第57-58页 |
| 4.3.5 相互作用分子序列分析及功能预测 | 第58页 |
| 4.4 讨论 | 第58-61页 |
| 第五章 TACYP1与宿主细胞互作分子的筛选及功能鉴定 | 第61-80页 |
| 5.1 材料 | 第61-62页 |
| 5.1.1 试验材料 | 第61页 |
| 5.1.2 试验试剂 | 第61-62页 |
| 5.1.3 试验仪器 | 第62页 |
| 5.2 方法 | 第62-66页 |
| 5.2.1 Tayp1蛋白结构功能分析 | 第62页 |
| 5.2.2 诱饵质粒在Y2HGold细胞中的表达鉴定 | 第62页 |
| 5.2.3 TaCP的酵母双杂交筛选 | 第62页 |
| 5.2.4 诱饵质粒与文库质粒的相互作用鉴定 | 第62页 |
| 5.2.5 相互作用分子序列分析及功能预测 | 第62-63页 |
| 5.2.6 TaNM1细胞的培养 | 第63页 |
| 5.2.7 GST-pulldown验证 | 第63-64页 |
| 5.2.7.1 蛋白原核表达 | 第63页 |
| 5.2.7.2 GST-pulldown | 第63-64页 |
| 5.2.8 siRNA转TaNM1细胞条件的摸索 | 第64-65页 |
| 5.2.9 siRNA干扰效率的检测 | 第65页 |
| 5.2.10 BW720C药物处理及RNAi实验 | 第65页 |
| 5.2.11 RT-qPCR及Westernblot检测 | 第65-66页 |
| 5.3 结果 | 第66-77页 |
| 5.3.1 TaCyp1蛋白结构功能分析 | 第66页 |
| 5.3.2 诱饵蛋白的表达鉴定 | 第66-67页 |
| 5.3.3 相互作用分子的鉴定 | 第67-68页 |
| 5.3.4 相互作用分子序列分析及功能预测 | 第68页 |
| 5.3.5 GST-pulldown验证 | 第68-72页 |
| 5.3.5.1 重组蛋白的表达及鉴定 | 第68-71页 |
| 5.3.5.2 GST-pulldown验证 | 第71-72页 |
| 5.3.6 siRNA转染条件的摸索 | 第72页 |
| 5.3.7 siRNA干扰效率的检测 | 第72-73页 |
| 5.3.8 目的基因的RT-qPCR检测 | 第73-76页 |
| 5.3.9 NF-κB信号通路相关蛋白的表达分析 | 第76-77页 |
| 5.4 讨论 | 第77-80页 |
| 第六章 全文结论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-91页 |
| 附录 | 第91-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 简历 | 第95页 |
