| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一部分 文献综述 LncRNA和 miRNA的研究进展 | 第12-22页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 1 LncRNA | 第13-17页 |
| 1.1 LncRNA的分类 | 第13-14页 |
| 1.2 LncRNA的功能 | 第14-15页 |
| 1.3 胰岛β细胞中的lncRNA | 第15-16页 |
| 1.4 hESC分化中的lncRNA | 第16-17页 |
| 2 MicroRNA | 第17-21页 |
| 2.1 MicroRNA的发生和加工 | 第18-19页 |
| 2.2 MicroRNA的运输 | 第19-20页 |
| 2.3 胰岛细胞中的microRNA | 第20-21页 |
| 2.4 ESC胰向分化中的microRNA | 第21页 |
| 3 展望 | 第21-22页 |
| 第二部分 实验研究 干扰Hi-Lnc70和miR-375 对人胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化的影响 | 第22-57页 |
| 前言 | 第22-23页 |
| 1 试剂和设备 | 第23-24页 |
| 1.1 试剂和材料 | 第23-24页 |
| 1.2 仪器和设备 | 第24页 |
| 2 方法 | 第24-30页 |
| 2.1 hESCs向 IPCs分化培养方案 | 第24-25页 |
| 2.2 Hi-Lnc70 抑制质粒的构建 | 第25-26页 |
| 2.2.1 目的基因片段的获取及酶切 | 第25页 |
| 2.2.2 目的基因连入基础载体 | 第25-26页 |
| 2.2.3 干扰质粒重组子的验证 | 第26页 |
| 2.3 脂质体介导的Hi-Lnc70 抑制质粒瞬时转染 | 第26-27页 |
| 2.4 脂质体介导的miR-375 mimic和 miR-375 inhibitor瞬时转染 | 第27页 |
| 2.5 鉴定分化各阶段细胞 | 第27-30页 |
| 2.5.1 提取总RNA | 第27页 |
| 2.5.2 反转录 | 第27页 |
| 2.5.3 实时荧光定量PCR | 第27-28页 |
| 2.5.4 统计学分析 | 第28页 |
| 2.5.5 免疫荧光染色 | 第28-29页 |
| 2.5.6 Western blot检测 | 第29-30页 |
| 3 结果 | 第30-55页 |
| 3.1 在StageI添加不同浓度Wnt3a对分化的影响 | 第30-36页 |
| 3.1.1 不同浓度Wnt3a对 hESCs向胰岛β细胞分化形态的影响 | 第30-31页 |
| 3.1.2 不同浓度Wnt3a对人胚胎干细胞定向分化为胰岛β细胞的影响 | 第31-34页 |
| 3.1.3 不同浓度Wnt3a对人胚胎干细胞分化过程中miR-375 表达水平的影响 | 第34-35页 |
| 3.1.4 不同浓度Wnt3a对人胚胎干细胞分化过程中Hi-Lnc70 表达水平的影响 | 第35-36页 |
| 3.2 干扰Hi-Lnc70 对分化的影响 | 第36-45页 |
| 3.2.1 Hi-Lnc70 抑制质粒构建结果 | 第36-38页 |
| 3.2.1.1 目的质粒双酶切 | 第36页 |
| 3.2.1.2 重组质粒的鉴定 | 第36-38页 |
| 3.2.2 Hi-Lnc70 干扰后hESCs分化培养过程中细胞形态 | 第38-39页 |
| 3.2.3 Hi-Lnc70 干扰后实时荧光定量PCR | 第39-42页 |
| 3.2.4 Hi-Lnc70 干扰后免疫荧光染色 | 第42-45页 |
| 3.2.5 Hi-Lnc70 干扰后western blot检测分化细胞中PDX1 和胰岛素 | 第45页 |
| 3.3 干扰miR-375 对分化的影响 | 第45-55页 |
| 3.3.1 miR-375 干扰后hESCs分化培养过程中细胞形态 | 第45-46页 |
| 3.3.2 miR-375 干扰后实时荧光定量PCR | 第46-50页 |
| 3.3.3 miR-375 干扰后免疫荧光染色 | 第50-54页 |
| 3.3.4 miR-375 干扰后western blot检测分化细胞中PDX1 和胰岛素 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-70页 |
