| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 本实验所需的器材及试剂 | 第8-10页 |
| 目录 | 第10-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-24页 |
| 1. 性别决定与分化 | 第13-20页 |
| 1.1 哺乳类性别决定与分化 | 第14-15页 |
| 1.2 鸟类性别决定与分化 | 第15-16页 |
| 1.3 爬行类性别决定与分化 | 第16-17页 |
| 1.4 两栖类性别决定与分化 | 第17页 |
| 1.5 鱼类性别决定与分化 | 第17-18页 |
| 1.6 昆虫性别决定与分化 | 第18-20页 |
| 2. fem-1 基因的研究现状 | 第20-22页 |
| 3. 本课题研究的内容、目的及意义 | 第22-24页 |
| 第二章 池蝶蚌 fem-1两个同源基因的 cDNA 全序列克隆及分析 | 第24-44页 |
| 摘要 | 第24-25页 |
| 2. 材料与方法 | 第25-44页 |
| 2.1 材料 | 第25页 |
| 2.2 方法 | 第25-32页 |
| 2.2.1 池蝶蚌性腺组织总 RNA 的提取 | 第25页 |
| 2.2.2 RNA 纯度与完整性检测 | 第25-26页 |
| 2.2.3 总 RNA 的 DNase 处理 | 第26页 |
| 2.2.4 SMART cDNA 的合成 | 第26-27页 |
| 2.2.5 池蝶蚌 fem-1 基因两个同源基因 cDNA 部分片段的获得 | 第27-28页 |
| 2.2.6 RACE-PCR 方法克隆池蝶蚌 fem-1 基因两个亚基 cDNA 全长 | 第28-29页 |
| 2.2.7 PCR 扩增产物的检测 | 第29-30页 |
| 2.2.8 目的片段的回收、克隆与测序 | 第30-32页 |
| 2.2.9 池蝶蚌 fem-1 两个同源基因 cDNA 全长的序列拼接、分析 | 第32页 |
| 2.3 结果 | 第32-42页 |
| 2.3.1 总 RNA 的提取 | 第33页 |
| 2.3.2 池蝶蚌 fem-1 两个同源基因的部分 cDNA 片段的获得 | 第33-34页 |
| 2.3.3 SMART RACE 技术扩增 fem-1b、fem-1c 的 cDNA 全长 | 第34-35页 |
| 2.3.4 池蝶蚌 fem-1b 和 fem-1c 基因序列分析 | 第35-42页 |
| 2.4 讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 池蝶蚌 Hsfem-1 基因在不同组织及不同年龄精巢中的表达分析 | 第44-56页 |
| 摘要 | 第44页 |
| 3.1 实验材料和方法 | 第44-48页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第44-45页 |
| 3.1.2 Hsfem-1b 和 Hsfem-1c 基因的组织表达谱分析 | 第45-47页 |
| 3.1.3 Hsfem-1b 和 Hsfem-1c 基因的不同年龄段精巢表达谱分析 | 第47-48页 |
| 3.2 实验结果 | 第48-54页 |
| 3.2.1 总 RNA 提取 | 第48-49页 |
| 3.2.2 反转录效果检测 | 第49页 |
| 3.2.3 池蝶蚌 Hsfem-1b 和 Hsfem-1c 基因的组织表达谱分析 | 第49-51页 |
| 3.2.4 Hsfem-1b 和 Hsfem-1c 基因在池蝶蚌精巢中不同年龄段的表达分析 | 第51-54页 |
| 3.3 讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 池蝶蚌 HsFem-1 蛋白原核表达及在性腺中的定位 | 第56-77页 |
| 摘要 | 第56页 |
| 4.1 材料与方法 | 第56-68页 |
| 4.1.1 质粒与菌株 | 第56页 |
| 4.1.2 引物设计 | 第56-57页 |
| 4.1.3 重组表达载体的构建 | 第57-62页 |
| 4.1.4 重组蛋白的表达及纯化 | 第62-65页 |
| 4.1.5 Bradford 法测定 HsFem-1c 重组蛋白浓度 | 第65页 |
| 4.1.6 多克隆抗体的制备 | 第65-66页 |
| 4.1.7 ELISA 间接法测定多克隆抗体效价 | 第66页 |
| 4.1.8 Western blot 检测 HsFem-1c 抗体特异性 | 第66-67页 |
| 4.1.9 HsFem-1c 蛋白在性腺中的细胞定位 | 第67-68页 |
| 4.2 实验结果 | 第68-74页 |
| 4.2.1 目的表达片段 PCR 扩增 | 第68-69页 |
| 4.2.2 阳性重组质粒的筛选 | 第69页 |
| 4.2.3 重组质粒双酶切鉴定 | 第69-70页 |
| 4.2.4 重组蛋白的诱导表达 | 第70页 |
| 4.2.5 融合蛋白溶解性分析 | 第70-71页 |
| 4.2.6 重组蛋白的纯化 | 第71页 |
| 4.2.7 纯化蛋白浓度的测定 | 第71-72页 |
| 4.2.8 ELISA 间接法测定多克隆抗血清效价 | 第72-73页 |
| 4.2.9 抗体特异性分析 | 第73页 |
| 4.2.10 HsFem-1c 蛋白在性腺组织中的定位 | 第73-74页 |
| 4.3 讨论 | 第74-77页 |
| 第五章 结论与展望 | 第77-80页 |
| 5.1 结论 | 第77-78页 |
| 5.2 进一步的工作方向 | 第78-80页 |
| 致谢 | 第80-82页 |
| 攻读硕士期间的研究成果 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-92页 |
