| 中文摘要 | 第5-6页 |
| 英文摘要 | 第6-7页 |
| 1 文献综述 | 第10-18页 |
| 1.1 研究背景 | 第10页 |
| 1.2 氮素对水稻生长发育的影响 | 第10-11页 |
| 1.3 水稻对氮素的吸收与利用 | 第11页 |
| 1.4 水稻NRT家族的研究 | 第11-12页 |
| 1.5 水稻NLP家族的研究 | 第12-13页 |
| 1.6 水稻遗传转化 | 第13-14页 |
| 1.7 CRISPR/Cas9系统 | 第14-16页 |
| 1.7.1 CRISPR的发现及组成 | 第14页 |
| 1.7.2 CRISPR/Cas9作用机制 | 第14-16页 |
| 1.7.3 CRISPR/Cas9技术的应用 | 第16页 |
| 1.8 本研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 1.9 技术路线 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-25页 |
| 2.1 研究材料 | 第18页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第18页 |
| 2.2 主要试剂和仪器 | 第18-19页 |
| 2.2.1 实验试剂 | 第18页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第18-19页 |
| 2.3 主要抗生素及激素母液 | 第19-20页 |
| 2.3.1 抗生素母液 | 第19页 |
| 2.3.2 激素母液 | 第19页 |
| 2.3.3 其他储备液 | 第19-20页 |
| 2.4 实验方法 | 第20-25页 |
| 2.4.1 引物的稀释 | 第20页 |
| 2.4.2 质粒提取 | 第20-21页 |
| 2.4.3 菌液的活化 | 第21页 |
| 2.4.4 PCR产物胶回收 | 第21页 |
| 2.4.5 大肠杆菌DH5α感受态的制备及热激转化 | 第21页 |
| 2.4.6 农杆菌EHA105电击用感受态的制备及电击转化 | 第21-22页 |
| 2.4.7 CRISPR/Cas9系统载体的构建 | 第22-23页 |
| 2.4.8 水稻愈伤组织的诱导及培养 | 第23页 |
| 2.4.9 植物小样DNA的提取(CTAB法) | 第23-25页 |
| 3 结果与分析 | 第25-46页 |
| 3.1 目标基因序列的选择 | 第25-26页 |
| 3.2 靶位点的设计 | 第26-29页 |
| 3.3 CRISPR/Cas9表达载体的构建 | 第29-35页 |
| 3.3.1 载体构建所需其他引物 | 第29页 |
| 3.3.2 候选基因载体的构建 | 第29-35页 |
| 3.4 水稻遗传转化 | 第35-42页 |
| 3.4.1 ZH11愈伤组织的诱导 | 第35-36页 |
| 3.4.2 ZH11愈伤组织的继代 | 第36页 |
| 3.4.3 ZH11愈伤组织的预培养 | 第36页 |
| 3.4.4 农杆菌侵染与共培养 | 第36-37页 |
| 3.4.5 愈伤的清洗和筛选 | 第37-38页 |
| 3.4.6 愈伤的二次筛选 | 第38页 |
| 3.4.7 阳性愈伤的分化 | 第38-39页 |
| 3.4.8 转基因幼苗的生根 | 第39页 |
| 3.4.9 炼苗及阳性鉴定 | 第39-42页 |
| 3.5 靶标基因0390(LOC_Os03g03900)的敲除鉴定与分析 | 第42-44页 |
| 3.6 其他候选基因研究工作进展 | 第44-46页 |
| 4 讨论与结论 | 第46-49页 |
| 4.1 讨论 | 第46-48页 |
| 4.1.1 CRISPR/Cas9系统优势与劣势 | 第46-47页 |
| 4.1.2 新一代基因编辑技术 | 第47页 |
| 4.1.3 农杆菌介导的遗传转化影响因素 | 第47-48页 |
| 4.2 结论 | 第48-49页 |
| 5 后续研究展望 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 附录 A：作者攻读硕士学位期间发表论文及科研情况 | 第55-56页 |
| 附录 B：缩略词及中英文对照 | 第56-57页 |
| 附录 C：培养基配方 | 第57-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
