| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 引言 | 第16-41页 |
| 1.1 Bt概述 | 第16页 |
| 1.2 Cry毒素研究 | 第16-18页 |
| 1.2.1 Cry毒素的分类和命名 | 第16-17页 |
| 1.2.2 Cry毒素的结构和功能关系 | 第17-18页 |
| 1.2.3 Cry毒素的应用 | 第18页 |
| 1.3 Cry毒素的作用模型 | 第18-19页 |
| 1.4 Cry1A毒素受体研究 | 第19-25页 |
| 1.4.1 Cadherin | 第22-23页 |
| 1.4.2 APN | 第23-24页 |
| 1.4.3 ALP | 第24-25页 |
| 1.4.4 ABC转运体 | 第25页 |
| 1.5 Cry2Ab类毒素的研究 | 第25-28页 |
| 1.6 抗性现状 | 第28-32页 |
| 1.7 昆虫对Cry毒素的抗性机制 | 第32-36页 |
| 1.7.1 消化、解毒和免疫引起的抗性 | 第32-33页 |
| 1.7.2 受体引发的抗性 | 第33-36页 |
| 1.7.2.1 Cadherin引起的抗性 | 第33-34页 |
| 1.7.2.2 APN引起的抗性 | 第34页 |
| 1.7.2.3 ALP引起的抗性 | 第34页 |
| 1.7.2.4 ABCC2引起的抗性 | 第34-36页 |
| 1.8 抗性治理的措施 | 第36-38页 |
| 1.8.1 高剂量/庇护所 | 第36页 |
| 1.8.2 多基因策略 | 第36页 |
| 1.8.3 改造毒素 | 第36-37页 |
| 1.8.4 发展新毒素 | 第37-38页 |
| 1.9 研究思路 | 第38-40页 |
| 1.9.1 立体依据 | 第38-39页 |
| 1.9.2 研究内容 | 第39-40页 |
| 1.10 研究技术路线 | 第40-41页 |
| 第二章 Cry1Ac抗性棉铃虫中受体基因的变化 | 第41-67页 |
| 2.1 材料与方法 | 第41-46页 |
| 2.1.1 试虫筛选和饲养 | 第41页 |
| 2.1.2 生物测定 | 第41-42页 |
| 2.1.3 总RNA的提取 | 第42页 |
| 2.1.4 总RNA样品检测 | 第42页 |
| 2.1.5 文库的构建 | 第42页 |
| 2.1.6 库检和上机测序 | 第42页 |
| 2.1.7 生物信息分析流程 | 第42-43页 |
| 2.1.8 DGE分析7个棉铃虫品系基因表达 | 第43-45页 |
| 2.1.9 RT-PCR验证 | 第45-46页 |
| 2.2 结果与分析 | 第46-66页 |
| 2.2.1 被测试棉铃虫的抗性水平 | 第46-47页 |
| 2.2.2 测序及序列组装 | 第47页 |
| 2.2.3 对棉铃虫中肠Unigene的功能注释与分类 | 第47-52页 |
| 2.2.4 利用DGE对7个棉铃虫品系中肠基因进行分析 | 第52-53页 |
| 2.2.5 APN在被检测的7个棉铃虫品系中的差异 | 第53-59页 |
| 2.2.6 Cadherin在抗感棉铃虫中的差异 | 第59页 |
| 2.2.7 ALP在抗感棉铃虫中的差异 | 第59-60页 |
| 2.2.8 ABC转运体在抗感棉铃虫中的差异 | 第60页 |
| 2.2.9 V-ATPase在抗感棉铃虫中的差异 | 第60-63页 |
| 2.2.10 RT-PCR验证与抗性相关基因的表达差异 | 第63-66页 |
| 2.3 结论与讨论 | 第66-67页 |
| 第三章 Cry1Ac、Cry2Ab抗性棉铃虫中受体蛋白的变化 | 第67-86页 |
| 3.1 材料与方法 | 第67-69页 |
| 3.1.1 供试昆虫 | 第67页 |
| 3.1.2 生物测定 | 第67页 |
| 3.1.3 蛋白的提取和定量 | 第67-68页 |
| 3.1.4 BBMV蛋白质的消化 | 第68页 |
| 3.1.5 肽段的标记 | 第68页 |
| 3.1.6 HPLC（强阳离子交换色谱） | 第68页 |
| 3.1.7 质谱检测和蛋白质的定性、定量分析 | 第68-69页 |
| 3.1.8 生物信息学分析 | 第69页 |
| 3.2 结果和分析 | 第69-85页 |
| 3.2.1 被检查棉铃虫抗性水平 | 第69页 |
| 3.2.2 自建库中蛋白质定量信息 | 第69-70页 |
| 3.2.3 uniprot_insecta库中蛋白质定量信息 | 第70-71页 |
| 3.2.4 自建库和uniprot_insecta库中蛋白质定量的比较 | 第71-72页 |
| 3.2.5 APN在抗感棉铃虫中的差异 | 第72-79页 |
| 3.2.6 Cadherin在抗感棉铃虫中的差异 | 第79-80页 |
| 3.2.7 ALP在抗感棉铃虫中的差异 | 第80-81页 |
| 3.2.8 ABC转运体在抗感棉铃虫中的差异 | 第81-83页 |
| 3.2.9 V-ATPase在抗感棉铃虫中的差异 | 第83-85页 |
| 3.3 结论与讨论 | 第85-86页 |
| 第四章 建立细胞毒性实验方法及基线 | 第86-96页 |
| 4.1 材料与方法 | 第87-89页 |
| 4.1.1 细胞培养 | 第87页 |
| 4.1.2 Bt毒素 | 第87页 |
| 4.1.3 Cry1Ac和Cry2Ab抗体 | 第87-88页 |
| 4.1.4 细胞毒理生测 | 第88页 |
| 4.1.5 细胞生测条件优化 | 第88页 |
| 4.1.6 Ligand blot | 第88-89页 |
| 4.1.7 数据分析 | 第89页 |
| 4.2 结果与分析 | 第89-94页 |
| 4.2.1 Cry1Ac和Cry2Ab细胞毒理生测 | 第89-91页 |
| 4.2.2 Cry1Ac和Cry2Ab的细胞毒理基线和中毒表症 | 第91-93页 |
| 4.2.3 Cry1Ac和Cry2Ab在3种昆虫细胞里的结合图谱 | 第93-94页 |
| 4.3 结论与讨论 | 第94-96页 |
| 第五章 受体蛋白在Cry1Ac和Cry2Ab作用机制中的功能研究 | 第96-149页 |
| 5.1 材料与方法 | 第96-104页 |
| 5.1.1 试虫与细胞培养 | 第96页 |
| 5.1.2 Bt毒素和抗体 | 第96页 |
| 5.1.3 Ligand blot检测毒素在美洲棉铃虫幼虫BBMV上的结合蛋白 | 第96页 |
| 5.1.4 Western blot检测幼虫BBMV和细胞总蛋白中的APN1 | 第96-97页 |
| 5.1.5 pAC受体质粒的构建 | 第97-98页 |
| 5.1.5.1 pAC- HzAPN1质粒的构建 | 第97页 |
| 5.1.5.2 pAC- HzCadherin质粒的构建 | 第97-98页 |
| 5.1.5.3 pAC- HzALP2质粒的构建 | 第98页 |
| 5.1.5.4 pAC- HzV-ATPc质粒的构建 | 第98页 |
| 5.1.6 dsRNA的合成 | 第98-100页 |
| 5.1.6.1 HzAPN1和DsRed dsRNA的合成 | 第98-99页 |
| 5.1.6.2 HzCadherin dsRNA的合成 | 第99页 |
| 5.1.6.3 HzALP2 dsRNA的合成 | 第99页 |
| 5.1.6.4 HzABCC2 dsRNA的合成 | 第99-100页 |
| 5.1.6.5 HzV-ATPc dsRNA的合成 | 第100页 |
| 5.1.6.6 HzATPsysnthesis dsRNA的合成 | 第100页 |
| 5.1.6.7 HzV-ATPa dsRNA的合成 | 第100页 |
| 5.1.7 siRNA的合成和干扰 | 第100-101页 |
| 5.1.8 细胞转染和毒理生测 | 第101页 |
| 5.1.9 RT-PCR及qRT-PCR分析目的基因的表达 | 第101-103页 |
| 5.1.10数据分析 | 第103-104页 |
| 5.2 结果与分析 | 第104-140页 |
| 5.2.1 HzAPN1 | 第104-110页 |
| 5.2.1.1 Cry1Ac和Cry2Ab在美洲棉铃虫幼虫BBMV上的结合图谱 | 第105-106页 |
| 5.2.1.2 Cry1Ac和Cry2Ab对真核表达HzAPN1细胞的毒性 | 第106页 |
| 5.2.1.3 Cry1Ac和Cry2Ab对干扰HzAPN1细胞的毒性 | 第106-110页 |
| 5.2.2 HzCadherin | 第110-117页 |
| 5.2.2.1 Cry1Ac和Cry2Ab对真核表达HzCadherin细胞的毒性 | 第111-112页 |
| 5.2.2.2 Cry1Ac和Cry2Ab对干扰HzCadherin细胞的毒性 | 第112页 |
| 5.2.2.3 Cry1Ac对siRNA干扰HzCadherin的美洲棉铃虫幼虫的毒性 | 第112-117页 |
| 5.2.3 HzALP2 | 第117-124页 |
| 5.2.3.1 Cry1Ac和Cry2Ab对真核表达HzALP2细胞的毒性 | 第118页 |
| 5.2.3.2 Cry1Ac和Cry2Ab对干扰HzALP2细胞的毒性 | 第118-119页 |
| 5.2.3.3 Cry1Ac对siRNA干扰HzALP2美洲棉铃虫幼虫的毒性 | 第119-124页 |
| 5.2.4 HzABCC2 | 第124-131页 |
| 5.2.4.1 Cry1Ac对干扰HzABCC2细胞的毒性 | 第125-126页 |
| 5.2.4.2 Cry2Ab对干扰HzABCC2细胞的毒性 | 第126页 |
| 5.2.4.3 Cry1Ac对siRNA干扰HzABCC2美洲棉铃虫幼虫的毒性 | 第126页 |
| 5.2.4.4 Cry2Ab对siRNA干扰HzABCC2美洲棉铃虫幼虫的毒性 | 第126-131页 |
| 5.2.5 HzV-ATPc | 第131-136页 |
| 5.2.5.1 Cry1Ac和Cry2Ab对真核表达HzV-ATPc细胞的毒性 | 第132页 |
| 5.2.5.2 Cry1Ac和Cry2Ab对干扰HzV-ATPc细胞的毒性 | 第132-136页 |
| 5.2.6 HzATPsysnthesis | 第136-138页 |
| 5.2.6.1 Cry1Ac和Cry2Ab对干扰HzATPsysnthesis细胞的毒性 | 第136-138页 |
| 5.2.7 HzV-ATPa | 第138-140页 |
| 5.2.7.1 Cry1Ac和Cry2Ab对干扰HzV-ATPa细胞的毒性 | 第138-140页 |
| 5.3 结论与讨论 | 第140-149页 |
| 5.3.1 HzAPN1 | 第140-142页 |
| 5.3.2 HzCadheirn | 第142页 |
| 5.3.3 HzALP2 | 第142-143页 |
| 5.3.4 HzABCC2 | 第143-144页 |
| 5.3.5 HzV-ATPc | 第144页 |
| 5.3.6 HzV-ATPysnthesis | 第144页 |
| 5.3.7 HzV-ATPa | 第144-145页 |
| 5.3.8 研究小结 | 第145-149页 |
| 第六章 受体蛋白在Cry1Ac作用机制中的互作研究 | 第149-162页 |
| 6.1 材料与方法 | 第150-152页 |
| 6.1.1 细胞培养 | 第150页 |
| 6.1.2 Bt毒素 | 第150页 |
| 6.1.3 质粒、dsRNA和转染 | 第150页 |
| 6.1.4 细胞毒理生测 | 第150页 |
| 6.1.5 数据分析 | 第150-152页 |
| 6.2 结果与分析 | 第152-159页 |
| 6.2.1 Sf9细胞系验证APN1、ALP2与Cadherin的互用 | 第152页 |
| 6.2.2 中肠细胞系验证APN1、ALP2与cadherin的互作 | 第152-159页 |
| 6.3 结论与讨论 | 第159-162页 |
| 第七章 全文总结 | 第162-166页 |
| 7.1 全文的主要结论 | 第162-164页 |
| 7.2 有待进一步完成的工作 | 第164-165页 |
| 7.3 论文创新点 | 第165-166页 |
| 参考文献 | 第166-193页 |
| 致谢 | 第193-196页 |
| 个人简历 | 第196-199页 |
