| 摘要 | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第8-17页 |
| 1.1 GH10木聚糖酶基因筛选分离 | 第8页 |
| 1.2 GH10家族木聚糖酶的基本特征 | 第8-12页 |
| 1.2.1 GH10家族木聚糖酶二级结构 | 第8-11页 |
| 1.2.1.1 催化区(CD) | 第8-9页 |
| 1.2.1.2 底物结合区(CBD\XBD) | 第9-10页 |
| 1.2.1.3 连接区(Linker) | 第10-11页 |
| 1.2.2 GH10家族木聚糖酶的基本生化特性 | 第11页 |
| 1.2.3 GH10家族木聚糖酶的三级结构特征 | 第11-12页 |
| 1.3 GH10家族木聚糖酶的基因工程研究 | 第12-16页 |
| 1.3.1 热稳定性(Thermostability) | 第12-14页 |
| 1.3.1.1 天然酶的热稳定性研究 | 第12-14页 |
| 1.3.1.2 基因工程改造酶的热稳定性研究 | 第14页 |
| 1.3.2 底物特异性(Substrate Specific) | 第14-16页 |
| 1.4 信号肽预测方面的研究 | 第16-17页 |
| 2 引言 | 第17-18页 |
| 3 材料与方法 | 第18-30页 |
| 3.1 材料 | 第18-19页 |
| 3.1.1 菌株和载体 | 第18页 |
| 3.1.2 试剂与药品 | 第18页 |
| 3.1.3 培养基 | 第18-19页 |
| 3.1.4 仪器设备 | 第19页 |
| 3.2 实验技术路线 | 第19-21页 |
| 3.2.1 RNA提取和反转录 | 第19页 |
| 3.2.2 基因扩增和原核克隆 | 第19-20页 |
| 3.2.3 原核表达和酶学特性分析 | 第20-21页 |
| 3.3 实验方法 | 第21-30页 |
| 3.3.1 引物设计和分析 | 第21-24页 |
| 3.3.2 黑曲霉诱导培养 | 第24页 |
| 3.3.3 RNA提取 | 第24页 |
| 3.3.4 RT-PCR | 第24-25页 |
| 3.3.5 PCR基因扩增 | 第25-26页 |
| 3.3.6 T重组克隆载体构建和酶切鉴定 | 第26-27页 |
| 3.3.6.1 T重组克隆载体构建 | 第26页 |
| 3.3.6.2 T重组克隆载体的酶切鉴定 | 第26-27页 |
| 3.3.7 重组表达载体的构建和酶切鉴定 | 第27页 |
| 3.3.7.1 pET20b的提取和酶切 | 第27页 |
| 3.3.7.2 重组表达载体(pET20b-x1/pET20b-x2)的构建和鉴定 | 第27页 |
| 3.3.7.3 重组表达载体(pET20b-x3/pET20b-x4)的构建和鉴定 | 第27页 |
| 3.3.8 重组木聚糖酶的诱导表达 | 第27-28页 |
| 3.3.9 重组木聚糖酶粗酶的酶学性质分析 | 第28页 |
| 3.3.9.1 最适温度的测定 | 第28页 |
| 3.3.9.2 温度稳定性的测定 | 第28页 |
| 3.3.9.3 最适pH值的测定 | 第28页 |
| 3.3.9.4 pH稳定性的测定 | 第28页 |
| 3.3.10 重组木聚糖酶的纯化 | 第28-29页 |
| 3.3.10.1 蛋白诱导表达 | 第28页 |
| 3.3.10.2 重组蛋白纯化 | 第28-29页 |
| 3.3.11 重组木聚糖酶纯酶的酶学特性分析 | 第29-30页 |
| 4 结果与分析 | 第30-45页 |
| 4.1 引物设计结果 | 第30页 |
| 4.2 RNA提取 | 第30页 |
| 4.3 PCR基因扩增 | 第30-31页 |
| 4.3.1 木聚糖酶基因x1和X2 | 第30-31页 |
| 4.3.2 木聚糖酶基因x3和x4 | 第31页 |
| 4.4 T重组克隆载体的构建和鉴定 | 第31-32页 |
| 4.4.1 T克隆载体的构建 | 第31-32页 |
| 4.4.2 T重组克隆载体的酶切鉴定 | 第32页 |
| 4.5 重组木聚糖酶表达载体构建和鉴定 | 第32-34页 |
| 4.5.1 重组木聚糖酶表达载体pET20b-x1/pET20b-x2的构建和鉴定 | 第32-33页 |
| 4.5.2 重组木聚糖酶表达载体pET20b-x3/pET20b-x4构建和鉴定 | 第33-34页 |
| 4.6 重组木聚糖酶基因序列及比对 | 第34-37页 |
| 4.7 重组GH10家族木聚糖酶蛋白表达与鉴定 | 第37-39页 |
| 4.7.1 重组GH10家族木聚糖酶粗酶的鉴定 | 第37页 |
| 4.7.2 重组GH10家族木聚糖酶纯酶的鉴定 | 第37-39页 |
| 4.8 GH10家族木聚糖酶粗酶的酶学特性 | 第39-42页 |
| 4.8.1 重组木聚糖酶最适pH | 第39页 |
| 4.8.2 重组木聚糖酶最适温度 | 第39页 |
| 4.8.3 重组木聚糖酶pH稳定性 | 第39页 |
| 4.8.4 重组木聚糖酶温度稳定性 | 第39-42页 |
| 4.9 GH10家族木聚糖酶纯酶的酶学特性 | 第42-45页 |
| 4.9.1 木聚糖酶纯酶最适pH | 第42页 |
| 4.9.2 木聚糖酶纯酶pH稳定性 | 第42页 |
| 4.9.3 木聚糖酶纯酶最适温度 | 第42页 |
| 4.9.4 木聚糖酶纯酶温度稳定性 | 第42-45页 |
| 5 结论与讨论 | 第45-47页 |
| 5.1 结论 | 第45页 |
| 5.2 讨论 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| ABSTRACT | 第51页 |
| 致谢 | 第52页 |
