| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 前言 | 第13-51页 |
| 1.1 脂肪酶 | 第13页 |
| 1.2 褶皱假丝酵母脂肪酶(Candida rugosa lipase,CRL) | 第13-19页 |
| 1.2.1 CRL的来源、组成与结构 | 第13-16页 |
| 1.2.2 CRL的应用 | 第16-18页 |
| 1.2.3 CRL1的热稳定性 | 第18-19页 |
| 1.3 酶稳定性改造的研究现状 | 第19-29页 |
| 1.4 抗氧化酶 | 第29-34页 |
| 1.4.1 超氧化物岐化酶(SOD) | 第30-32页 |
| 1.4.2 过氧化氢酶(CAT) | 第32-33页 |
| 1.4.3 谷胱甘肽过氧化物酶(GPX) | 第33-34页 |
| 1.5 抗氧化酶人工模拟的研究进展 | 第34-37页 |
| 1.6 立题依据与实验设计 | 第37-40页 |
| 参考文献 | 第40-51页 |
| 第二章 褶皱假丝酵母脂肪酶1的重组表达、纯化及性质表征 | 第51-73页 |
| 2.1 材料与方法 | 第51-57页 |
| 2.1.1 材料 | 第51-52页 |
| 2.1.2 培养基和溶液 | 第52页 |
| 2.1.3 实验方法 | 第52-57页 |
| 2.1.3.1 C.rugosa Lip1基因的克隆及突变 | 第52-53页 |
| 2.1.3.2 重组质粒的线性化 | 第53页 |
| 2.1.3.3 毕赤酵母电转化方法 | 第53-54页 |
| 2.1.3.4 阳性克隆的基因组提取方法 | 第54页 |
| 2.1.3.5 外源蛋白的诱导表达 | 第54-55页 |
| 2.1.3.6 目的蛋白的纯化 | 第55页 |
| 2.1.3.7 脂肪酶活力测定 | 第55-56页 |
| 2.1.3.8 重组脂肪酶酶学性质表征 | 第56-57页 |
| 2.1.3.9 重组脂肪酶动力学常数测定 | 第57页 |
| 2.1.3.10 重组脂肪酶的底物选择性 | 第57页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第57-68页 |
| 2.2.1 pPICZ α A-lip1表达载体的构建 | 第57-61页 |
| 2.2.3 CRL1的诱导表达 | 第61-62页 |
| 2.2.4 CRL1的纯化 | 第62-64页 |
| 2.2.5 重组脂肪酶的酶学性质 | 第64-65页 |
| 2.2.6 重组CRL1的催化动力学 | 第65-67页 |
| 2.2.7 重组CRL1底物谱的测定 | 第67-68页 |
| 2.3 小结 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 第三章 褶皱假丝酵母脂肪酶1热稳定性改造的设计 | 第73-83页 |
| 3.1 突变位点选择标准 | 第73-75页 |
| 3.2 CRL1突变位点的预测 | 第75-80页 |
| 3.3 小结 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-83页 |
| 第四章 抗氧化酶模拟物的合成、表征与抗氧化实验 | 第83-103页 |
| 4.1 材料与方法 | 第83-88页 |
| 4.1.1 材料 | 第83页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第83-84页 |
| 4.1.3 实验方法 | 第84-88页 |
| 4.2 结果与讨论 | 第88-100页 |
| 4.2.1 动力学分析 | 第88页 |
| 4.2.2 模拟物Mn(Ⅲ)_2(L-Se-SO_3Na)的合成与表征 | 第88-92页 |
| 4.2.3 模拟物的GPX、SOD和CAT活力的测定 | 第92-93页 |
| 4.2.4 模拟物的动力学常数测定 | 第93-95页 |
| 4.2.5 线粒体膨胀损伤实验 | 第95-97页 |
| 4.2.6 线粒体脂质过氧化实验 | 第97-100页 |
| 4.3 小结 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-103页 |
| 创新点 | 第103-105页 |
| 研究展望 | 第105-107页 |
| 攻读博士期间科研成果 | 第107-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
