| 提要 | 第4-8页 |
| 第1章 前言 | 第8-26页 |
| 1.1 背景知识 | 第8-22页 |
| 1.1.1 HIV-1病毒简介 | 第8-10页 |
| 1.1.2 Vif蛋白简介 | 第10-13页 |
| 1.1.3 APOBEC家族蛋白质 | 第13-18页 |
| 1.1.4 Vif抑制APOBEC3抗病毒活性的机制 | 第18-21页 |
| 1.1.5 诱导蛋白质降解的泛素-蛋白酶体途径 | 第21-22页 |
| 1.2 论文设计 | 第22-26页 |
| 1.2.1 论文目的和意义 | 第22-23页 |
| 1.2.2 实验设计 | 第23-26页 |
| 第2章 材料与方法 | 第26-40页 |
| 2.1 材料、试剂和仪器 | 第26-32页 |
| 2.1.1 细胞 | 第26页 |
| 2.1.2 引物设计与质粒构建 | 第26-28页 |
| 2.1.3 菌株 | 第28-29页 |
| 2.1.4 常用酶及试剂盒 | 第29页 |
| 2.1.5 常用抗体 | 第29-30页 |
| 2.1.6 主要试剂 | 第30页 |
| 2.1.7 主要缓冲液 | 第30-31页 |
| 2.1.8 主要仪器与设备 | 第31-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-40页 |
| 2.2.1 PCR | 第32-34页 |
| 2.2.2 连接反应 | 第34页 |
| 2.2.3 细胞转化 | 第34页 |
| 2.2.4 质粒提取 | 第34-35页 |
| 2.2.5 利用Polyethylenimine(PEI)转染细胞 | 第35页 |
| 2.2.6 MAGI细胞感染测定病毒感染性 | 第35-36页 |
| 2.2.7 免疫沉淀(Immunoprecipitation) | 第36-37页 |
| 2.2.8 收集细胞分泌病毒方法 | 第37页 |
| 2.2.9 Cycloheximide(CHX)Pulse-chase | 第37页 |
| 2.2.10 同位素355标记的Pu-se-Chase | 第37-38页 |
| 2.2.11 免疫印迹分析 | 第38-40页 |
| 第3章 结果与讨论 | 第40-69页 |
| 3.1 APOBEC与HIV-1 Vif的泛素化在Vif诱导的蛋白酶体降解途径中的作用 | 第40-52页 |
| 3.1.1 SIVmac Vif、SIVtan Vif与HIV-1 Vif在人胚肾293T细胞中自身泛素化的比较 | 第40-42页 |
| 3.1.2 Cu15功能缺陷型突变体(Cu15△Nedd8)对HIV-1 Vif、SIVmac Vif及SIVtan Vif蛋白酶体途径降解的影响 | 第42-43页 |
| 3.1.3 A3G对不同种属Vif蛋白自身泛素化降解的影响 | 第43-46页 |
| 3.1.4 HIV-1 Vif在与A3G或A3G20K/R共表达的情况下其自身的稳定性情况 | 第46-47页 |
| 3.1.5 HIV-1 Vif对于A3G及A3G20K/R在诱导泛素化情况的比较 | 第47-49页 |
| 3.1.6 讨论 | 第49-50页 |
| 3.1.7 小结 | 第50-52页 |
| 3.2 APOBEC蛋白中的泛素化与其稳定性及抗病毒能力的研究 | 第52-69页 |
| 3.2.1 A3G的赖氨酸及N末端对提高A3G其稳定性的影响 | 第52-53页 |
| 3.2.2 A3G突变体的包装进病毒及抗病毒活性的影响 | 第53-55页 |
| 3.2.3 HA-A3G20K/R包装进病毒核心蛋白的研究 | 第55-58页 |
| 3.2.4 同位素追踪下A3G、A3G20K/R和HA-A3G20K/R稳定性的比较 | 第58-59页 |
| 3.2.5 HA-A3G20K/R对HXB2和HXB2△Vif病毒逆转录的影响 | 第59-61页 |
| 3.2.6 N末端HA tag对于APOEBE形成Cullin 5-Vif-APOBEC复合物的影响 | 第61-62页 |
| 3.2.7 N末端HA tag对于APOEBE泛素化的影响 | 第62-63页 |
| 3.2.8 N末端作为APOBEC泛素化靶向位点的确认 | 第63-65页 |
| 3.2.9 讨论 | 第65-67页 |
| 3.2.10 小结 | 第67-69页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 中文摘要 | 第78-81页 |
| Abstract | 第81-83页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 作者简历 | 第85页 |
