| 摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-34页 |
| 1 橘小实蝇概述 | 第16页 |
| 2 昆虫肠道微生物 | 第16-21页 |
| 2.1 肠道微生物对昆虫的作用 | 第17-20页 |
| 2.1.1 参与代谢，提供营养物质 | 第17-18页 |
| 2.1.2 影响昆虫的生长发育和生理 | 第18-19页 |
| 2.1.3 提高宿主昆虫定殖抗力 | 第19页 |
| 2.1.4 参与有害物质降解 | 第19-20页 |
| 2.1.5 影响宿主的社会行为 | 第20页 |
| 2.2 实蝇肠道微生物研究 | 第20-21页 |
| 3 昆虫免疫 | 第21-23页 |
| 3.1 昆虫细胞免疫 | 第21-22页 |
| 3.2 昆虫体液免疫 | 第22-23页 |
| 4 昆虫肠道防御机制 | 第23-29页 |
| 4.1 物理屏障 | 第23-24页 |
| 4.2 Imd信号通路 | 第24-26页 |
| 4.3 Duox-ROS防御系统 | 第26-29页 |
| 5 昆虫免疫系统对肠道微生物的影响 | 第29-32页 |
| 5.1 Imd信号通路对肠道微生物的影响 | 第30-31页 |
| 5.2 Duox-ROS系统对肠道微生物的影响 | 第31-32页 |
| 6.本研究的内容、目的和意义 | 第32-34页 |
| 第二章 BdDuox基因在肠道免疫及肠道细菌群落稳态调控中的作用 | 第34-69页 |
| 1 材料 | 第34-37页 |
| 1.1 供试昆虫 | 第34-35页 |
| 1.2 菌株 | 第35页 |
| 1.3 实验仪器和设备 | 第35页 |
| 1.4 培养基、缓冲液及抗生素的配制 | 第35-36页 |
| 1.5 试剂及试剂盒 | 第36-37页 |
| 2 实验方法 | 第37-49页 |
| 2.1 橘小实蝇总RNA提取 | 第37-38页 |
| 2.1.1 肠道及组织样本准备 | 第37页 |
| 2.1.2 总RNA提取 | 第37-38页 |
| 2.2 目标基因扩增与连接转化 | 第38-41页 |
| 2.2.1 引物的设计与合成 | 第38-39页 |
| 2.2.2 cDNA的合成 | 第39页 |
| 2.2.3 RT-PCR及RACE扩增目标基因 | 第39页 |
| 2.2.4 目标DNA片段回收 | 第39-40页 |
| 2.2.5 PCR产物连接转化 | 第40页 |
| 2.2.6 重组质粒的筛选与鉴定 | 第40-41页 |
| 2.3 菌液喂食感染 | 第41-42页 |
| 2.3.1 液体人工饲料配制 | 第41页 |
| 2.3.2 条件病原菌/共生菌菌液制备 | 第41-42页 |
| 2.3.3 菌液喂食感染 | 第42页 |
| 2.4 实时荧光定量PCR | 第42-43页 |
| 2.4.1 荧光定量引物设计 | 第42页 |
| 2.4.2 Real time PCR反应 | 第42-43页 |
| 2.5 橘小实蝇肠道ROS含量检测 | 第43-44页 |
| 2.5.1 橘小实蝇肠道ROS样本制备 | 第43-44页 |
| 2.5.2 橘小实蝇肠道ROS含量检测 | 第44页 |
| 2.6 BdDuox基因RNAi效应及肠道总菌群密度检测 | 第44-47页 |
| 2.6.1 dsRNA制备 | 第44-45页 |
| 2.6.2 dsRNA显微注射 | 第45-46页 |
| 2.6.3 肠道RNA和ROS提取 | 第46页 |
| 2.6.4 肠道细菌DNA提取 | 第46页 |
| 2.6.5 BdDuox基因RNAi效应 | 第46-47页 |
| 2.6.6 肠道总细菌菌群密度qPCR | 第47页 |
| 2.7 肠道DNA样本Illumina MiSeq高通量测序 | 第47-48页 |
| 2.7.1 样本PCR扩增 | 第47-48页 |
| 2.7.2 生物信息分析 | 第48页 |
| 2.8 维生素C和百草枯喂食生测 | 第48-49页 |
| 2.9 数据分析 | 第49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-66页 |
| 3.1 橘小实蝇BdDuox基因序列分析及表达模式研究 | 第49-55页 |
| 3.1.1 橘小实蝇肠道总RNA提取 | 第49-50页 |
| 3.1.2 RT-PCR及RACE扩增目标基因 | 第50-52页 |
| 3.1.3 橘小实蝇BdDuox基因核苷酸序列与氨基酸序列分析 | 第52-54页 |
| 3.1.4 橘小实蝇BdDuox基因表达模式研究 | 第54-55页 |
| 3.2 橘小实蝇BdDuox基因对细菌的免疫响应 | 第55-57页 |
| 3.2.1 BdDuox基因对条件致病菌的免疫响应 | 第55-56页 |
| 3.2.2 BdDuox基因对肠道共生菌的免疫响应 | 第56-57页 |
| 3.3 橘小实蝇BdDuox基因调控肠道细菌菌群稳态平衡 | 第57-66页 |
| 3.3.1 BdDuox基因的RNA干扰效应 | 第57-59页 |
| 3.3.2 BdDuox基因沉默对肠道细菌群落结构的影响 | 第59-63页 |
| 3.3.3 BdDuox基因沉默对细菌群落多样性的影响 | 第63-64页 |
| 3.3.4 ROS水平影响肠道细菌菌群密度 | 第64-66页 |
| 4 讨论 | 第66-69页 |
| 第三章 ROS对橘小实蝇成虫生理功能的影响 | 第69-79页 |
| 1 材料 | 第69-70页 |
| 1.1 供试昆虫 | 第69页 |
| 1.2 仪器和设备 | 第69页 |
| 1.3 试剂及试剂盒 | 第69-70页 |
| 2 实验方法 | 第70-72页 |
| 2.1 RNA提取 | 第70页 |
| 2.2 引物的设计与合成 | 第70页 |
| 2.3 dsRNA制备与显微注射 | 第70页 |
| 2.4 BdCat基因RNAi效应及对肠道菌群密度影响 | 第70-71页 |
| 2.5 BdCat基因RNAi对肠道ROS水平的影响 | 第71页 |
| 2.6 ROS对橘小实蝇生殖力的影响 | 第71页 |
| 2.6.1 产卵量 | 第71页 |
| 2.6.2 孵化率 | 第71页 |
| 2.7 ROS对橘小实蝇存活率的影响 | 第71-72页 |
| 2.8 数据分析 | 第72页 |
| 3 结果与分析 | 第72-77页 |
| 3.1 橘小实蝇BdCat基因表达模式研究 | 第72-73页 |
| 3.2 BdCat基因的RNA干扰效应 | 第73-74页 |
| 3.3 ROS对宿主寿命的影响 | 第74-75页 |
| 3.4 ROS对宿主产卵量的影响 | 第75-76页 |
| 3.5 ROS对宿主卵孵化率的影响 | 第76-77页 |
| 4 讨论 | 第77-79页 |
| 第四章 橘小实蝇IMD信号通路免疫功能研究 | 第79-94页 |
| 1 材料 | 第79-80页 |
| 1.1 供试昆虫 | 第79页 |
| 1.2 菌株 | 第79页 |
| 1.3 仪器和设备 | 第79页 |
| 1.4 试剂及试剂盒 | 第79-80页 |
| 2 实验方法 | 第80-83页 |
| 2.1 RNA提取 | 第80页 |
| 2.2 病原菌感染生测 | 第80-81页 |
| 2.2.1 条件病原菌菌液制备 | 第80页 |
| 2.2.2 菌液喂食感染 | 第80页 |
| 2.2.3 菌液注射感染 | 第80-81页 |
| 2.2.4 针刺接种感染 | 第81页 |
| 2.3 dsRNA制备与显微注射 | 第81页 |
| 2.4 实时荧光定量PCR | 第81-82页 |
| 2.5 数据分析 | 第82-83页 |
| 3 结果与分析 | 第83-92页 |
| 3.1 橘小实蝇BdRel基因和BdPGRP-SC2基因表达模式研究 | 第83-84页 |
| 3.2 橘小实蝇Imd信号通路对条件致病菌的系统免疫响应 | 第84-86页 |
| 3.3 橘小实蝇Imd信号通路对条件致病菌的肠道免疫响应 | 第86-87页 |
| 3.4 PGRPs在Imd信号通路中的负调控作用 | 第87-88页 |
| 3.5 肠道Duox-ROS/Imd信号通路对条件致病菌免疫响应的时序差异 | 第88-90页 |
| 3.6 肠道ROS诱导Imd信号通路启动 | 第90-92页 |
| 4 讨论 | 第92-94页 |
| 第五章 结论与展望 | 第94-98页 |
| 1 结论 | 第94-95页 |
| 2 创新点 | 第95-96页 |
| 3 展望 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-118页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第118-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
