| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第15-27页 |
| 1.1 脂肪酶简介 | 第15-19页 |
| 1.1.1 脂肪酶及其活性中心 | 第15-16页 |
| 1.1.2 脂肪酶的来源 | 第16页 |
| 1.1.3 脂肪酶的分类 | 第16-18页 |
| 1.1.4 脂肪酶的生产方法 | 第18-19页 |
| 1.2 Aureobasidium pullulans简介 | 第19-20页 |
| 1.3 脂肪酶的发酵优化生产 | 第20-21页 |
| 1.3.1 发酵培养基的优化 | 第20页 |
| 1.3.2 发酵条件的优化 | 第20-21页 |
| 1.4 脂肪酶的分离纯化及性质研究 | 第21-24页 |
| 1.4.1 分离纯化方法 | 第21-22页 |
| 1.4.2 脂肪酶性质研究 | 第22-24页 |
| 1.4.2.1 最适反应温度及温度稳定性 | 第22-23页 |
| 1.4.2.2 最适反应pH及pH稳定性 | 第23页 |
| 1.4.2.3 有机溶剂耐受性 | 第23页 |
| 1.4.2.4 脂肪酶激活剂和抑制剂 | 第23-24页 |
| 1.5 脂肪酶的应用 | 第24-26页 |
| 1.5.1 脂肪酶在食品工业上的应用 | 第24-25页 |
| 1.5.1.1 面类食品中的应用 | 第24页 |
| 1.5.1.2 油脂工业中的应用 | 第24-25页 |
| 1.5.1.3 乳品工业中的应用 | 第25页 |
| 1.5.2 其他应用 | 第25-26页 |
| 1.6 本论文的研究目的、意义和研究内容 | 第26-27页 |
| 第二章 高产耐高温脂肪酶菌株的筛选 | 第27-36页 |
| 2.1 前言 | 第27页 |
| 2.2 材料试剂与设备 | 第27-28页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第27页 |
| 2.2.2 培养基及试剂 | 第27-28页 |
| 2.2.3 仪器与设备 | 第28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-30页 |
| 2.3.1 高产脂肪酶菌株的筛选 | 第28页 |
| 2.3.1.1 菌种初筛 | 第28页 |
| 2.3.1.2 菌种分离纯化 | 第28页 |
| 2.3.1.3 菌种复筛 | 第28页 |
| 2.3.2 脂肪酶酶活测定 | 第28-29页 |
| 2.3.3 脂肪酶酶活标准曲线的绘制 | 第29页 |
| 2.3.4 粗酶液的最适反应温度及热稳定性测定 | 第29页 |
| 2.3.5 菌种保存 | 第29-30页 |
| 2.4 结果与分析 | 第30-35页 |
| 2.4.1 产胞外酶菌株的筛选 | 第30-31页 |
| 2.4.2 酶活标准曲线的绘制 | 第31-32页 |
| 2.4.3 粗酶液的最适反应温度 | 第32-33页 |
| 2.4.4 粗酶液的热稳定性 | 第33-35页 |
| 2.5 本章小结 | 第35-36页 |
| 第三章 高产耐高温脂肪酶菌株的鉴定 | 第36-41页 |
| 3.1 前言 | 第36页 |
| 3.2 材料试剂与设备 | 第36-37页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第36页 |
| 3.2.2 培养基及试剂 | 第36页 |
| 3.2.3 仪器与设备 | 第36-37页 |
| 3.3 实验方法 | 第37-38页 |
| 3.3.1 菌株S3显微镜观察 | 第37页 |
| 3.3.2 26S rDNA鉴定之DNA提取与PCR | 第37页 |
| 3.3.3 26S rDNA琼脂糖凝胶电泳检测与系统发育树构建 | 第37页 |
| 3.3.4 ITS序列鉴定之DNA提取与PCR | 第37-38页 |
| 3.3.5 ITS序列琼脂糖凝胶电泳检测与系统发育树构建 | 第38页 |
| 3.4 结果与分析 | 第38-40页 |
| 3.4.1 菌株S3菌落观察和显微镜观察 | 第38页 |
| 3.4.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第38-39页 |
| 3.4.3 系统发育树构建 | 第39-40页 |
| 3.5 本章小结 | 第40-41页 |
| 第四章 AUREOBASIDIUM PULLULANS产脂肪酶发酵优化 | 第41-59页 |
| 4.1 前言 | 第41页 |
| 4.2 材料试剂与设备 | 第41页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第41页 |
| 4.2.2 培养基及试剂 | 第41页 |
| 4.2.3 仪器与设备 | 第41页 |
| 4.3 实验方法 | 第41-43页 |
| 4.3.1 菌体生物量的测定 | 第41页 |
| 4.3.2 脂肪酶酶活的测定 | 第41-42页 |
| 4.3.3 种子液生长曲线的测定 | 第42页 |
| 4.3.4 种子液的制备 | 第42页 |
| 4.3.5 菌株S3产酶曲线和生长曲线的绘制 | 第42页 |
| 4.3.6 摇瓶发酵条件的优化 | 第42页 |
| 4.3.6.1 接种量对产酶的影响 | 第42页 |
| 4.3.6.2 装液量对产酶的影响 | 第42页 |
| 4.3.7 摇瓶发酵培养基的优化 | 第42-43页 |
| 4.3.7.1 氮源的优化 | 第42页 |
| 4.3.7.2 碳源的优化 | 第42-43页 |
| 4.3.7.3 诱导剂的优化 | 第43页 |
| 4.3.7.4 表面活性剂的优化 | 第43页 |
| 4.3.7.5 金属离子的优化 | 第43页 |
| 4.4 结果与分析 | 第43-58页 |
| 4.4.1 种子液生长曲线 | 第43-44页 |
| 4.4.2 菌株S3产酶曲线和生长曲线 | 第44-45页 |
| 4.4.3 接种量对产酶的影响 | 第45-46页 |
| 4.4.4 装液量对产酶的影响 | 第46-47页 |
| 4.4.5 氮源对产酶和菌体生物量的影响 | 第47-50页 |
| 4.4.5.1 筛选最佳氮源 | 第47-48页 |
| 4.4.5.2 酵母提取物的添加量 | 第48-49页 |
| 4.4.5.3 胰蛋白胨的添加量 | 第49-50页 |
| 4.4.6 碳源对产酶和菌体生物量的影响 | 第50-53页 |
| 4.4.6.1 筛选最佳碳源 | 第50-51页 |
| 4.4.6.2 葡萄糖的添加量 | 第51-52页 |
| 4.4.6.3 麦芽糖的添加量 | 第52-53页 |
| 4.4.7 诱导剂对产酶的影响 | 第53-55页 |
| 4.4.7.1 筛选最佳诱导剂 | 第53-54页 |
| 4.4.7.2 玉米油的添加量 | 第54-55页 |
| 4.4.8 表面活性剂对产酶的影响 | 第55-57页 |
| 4.4.8.1 筛选最佳表面活性剂 | 第55-56页 |
| 4.4.8.2 Tw 20的添加量 | 第56-57页 |
| 4.4.9 不同金属离子对产酶的影响 | 第57-58页 |
| 4.5 本章小结 | 第58-59页 |
| 第五章 AUREOBASIDIUM PULLULANS脂肪酶的分离纯化与性质研究 | 第59-73页 |
| 5.1 引言 | 第59页 |
| 5.2 材料试剂与设备 | 第59-61页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第59页 |
| 5.2.2 培养基及试剂 | 第59-60页 |
| 5.2.3 仪器与设备 | 第60-61页 |
| 5.3 实验方法 | 第61-65页 |
| 5.3.1 脂肪酶的分离纯化 | 第61-63页 |
| 5.3.1.1 粗酶液的制备 | 第61页 |
| 5.3.1.2 蛋白质测定 | 第61页 |
| 5.3.1.3 粗酶液过滤除菌与超滤浓缩 | 第61页 |
| 5.3.1.4 DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析 | 第61-62页 |
| 5.3.1.5 超滤浓缩及冻干 | 第62页 |
| 5.3.1.7 SDS-PAGE电泳检测 | 第62-63页 |
| 5.3.2 脂肪酶性质研究 | 第63-65页 |
| 5.3.2.1 最适反应温度及热稳定性测定 | 第63-64页 |
| 5.3.2.2 最适反应pH及pH稳定性测定 | 第64页 |
| 5.3.2.3 有机溶剂耐受性测定 | 第64页 |
| 5.3.2.4 金属离子对脂肪酶活性的影响 | 第64页 |
| 5.3.2.5 表面活性剂及抑制剂对脂肪酶活性的影响 | 第64页 |
| 5.2.3.6 脂肪酶对可食用油脂的水解 | 第64-65页 |
| 5.4 结果与分析 | 第65-72页 |
| 5.4.1 蛋白质标准曲线的绘制 | 第65页 |
| 5.4.2 DEAE-Sephorose Fast Flow阴离子交换层析柱纯化 | 第65-66页 |
| 5.4.3 脂肪酶纯化参数及不连续SDS-PAGE电泳 | 第66-67页 |
| 5.4.4 脂肪酶的最适反应温度及热稳定性 | 第67-68页 |
| 5.4.5 脂肪酶的最适pH及pH稳定性 | 第68-69页 |
| 5.4.6 脂肪酶的有机溶剂耐受性 | 第69-70页 |
| 5.4.7 金属离子对脂肪酶的影响 | 第70页 |
| 5.4.8 表面活性剂及抑制剂对脂肪酶的影响 | 第70-71页 |
| 5.4.9 脂肪酶水解可食用油脂实验 | 第71-72页 |
| 5.5 本章小结 | 第72-73页 |
| 第六章 结论与展望 | 第73-75页 |
| 6.1 主要结论 | 第73页 |
| 6.2 存在的问题及展望 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-83页 |
| 作者简介 | 第83页 |
