摘要 | 第3-5页 |
Abstract | 第5-7页 |
缩略词及中英文对照 | 第8-14页 |
1 前言 | 第14-24页 |
1.1 香蕉枯萎病在农业生产中的重要性 | 第14-15页 |
1.1.1 香蕉的生产地位及经济价值 | 第14页 |
1.1.2 香蕉枯萎病及其病原菌 | 第14-15页 |
1.1.3 香蕉枯萎病菌的侵染过程和香蕉枯萎病的发病症状 | 第15页 |
1.2 香蕉枯萎病菌致病机理的相关研究进展 | 第15-18页 |
1.2.1 细胞壁降解酶在Foc致病过程中的作用 | 第15-16页 |
1.2.2 毒素在Foc致病过程中的作用 | 第16-17页 |
1.2.3 Foc致病相关基因的研究进展 | 第17-18页 |
1.3 分泌蛋白在Foc致病性中的作用 | 第18-19页 |
1.3.1 分泌蛋白及其主要特征 | 第18页 |
1.3.2 分泌蛋白质在植物病原真菌与寄主互作中的作用 | 第18-19页 |
1.4 植物病原真菌分泌蛋白质组研究进展 | 第19-23页 |
1.4.1 分泌蛋白质组的概念及其核心技术 | 第19-20页 |
1.4.2 基于 2-DE的分泌蛋白质组分离技术 | 第20-21页 |
1.4.2.1 双向凝胶电泳 | 第20页 |
1.4.2.2 双向差异凝胶电泳 | 第20-21页 |
1.4.3 基于质谱的蛋白质定量技术 | 第21-22页 |
1.4.3.1 蛋白质非标记定量技术 | 第21页 |
1.4.3.2 蛋白质标记定量技术 | 第21-22页 |
1.4.4 分泌蛋白质组在植物病原真菌中的研究进展 | 第22-23页 |
1.5 研究的目的和意义 | 第23-24页 |
2 材料与方法 | 第24-34页 |
2.1 实验材料 | 第24页 |
2.2 实验仪器与试剂 | 第24-26页 |
2.2.0 仪器设备 | 第24页 |
2.2.1 实验试剂 | 第24页 |
2.2.2 培养基和实验试剂 | 第24页 |
2.2.3 分泌蛋白提取所需试剂 | 第24-25页 |
2.2.4 蛋白定量所用的溶液的配制 | 第25页 |
2.2.5 SDS-PAGE凝胶配制: | 第25页 |
2.2.6 考马斯亮蓝G-250 染色所需溶液的配制 | 第25-26页 |
2.3 实验方法 | 第26-30页 |
2.3.1 病原菌的培养 | 第26页 |
2.3.2 香蕉组织诱导物的制备 | 第26页 |
2.3.3 分泌蛋白诱导培养基的制备 | 第26页 |
2.3.4 Foc生长曲线的测定 | 第26页 |
2.3.5 分泌蛋白不同提取方法的比较 | 第26-27页 |
2.3.5.1 DOC-TCA沉淀法 | 第26-27页 |
2.3.5.2 丙酮沉淀法 | 第27页 |
2.3.5.3 硫酸铵沉淀法 | 第27页 |
2.3.6 香蕉枯萎病菌分泌蛋白质的大规模提取 | 第27-28页 |
2.3.7 蛋白质含量测定 | 第28-29页 |
2.3.8 SDS-PAGE检测 | 第29页 |
2.3.9 胶体考染 | 第29页 |
2.3.10 基于Label-free的Foc分泌蛋白的质谱分析方法 | 第29-30页 |
2.3.10.1 超滤辅助样品制备法(Filter aided proteome preparation,FASP)酶解 | 第29-30页 |
2.4 | 第30-34页 |
2.4.1 高效液相色谱 | 第30页 |
2.4.2 质谱鉴定 | 第30页 |
2.4.3 数据分析 | 第30-31页 |
2.4.4 Gene Ontology(GO)功能注释 | 第31-32页 |
2.4.5 KEGG通路注释 | 第32页 |
2.4.6 GO注释与KEGG注释的富集分析 | 第32页 |
2.4.7 Foc分泌蛋白的预测分析 | 第32-34页 |
2.4.7.1 经典分泌蛋白的预测 | 第32-33页 |
2.4.7.2 非经典分泌蛋白的预测 | 第33-34页 |
3 结果与分析 | 第34-63页 |
3.1 Foc在分泌蛋白诱导培养基中的生长曲线测定 | 第34页 |
3.2 不同方法提取Foc分泌蛋白的比较 | 第34-35页 |
3.3 基于Lable-free的Foc分泌蛋白质谱分析 | 第35-63页 |
3.3.1 Foc分泌蛋白的SDS-PAGE分析 | 第35-36页 |
3.3.2 基于Lable-free的Foc分泌蛋白质谱分析 | 第36-37页 |
3.3.3 基于生物信息学的Foc差异表达分泌蛋白的验证分析 | 第37页 |
3.3.4 基于质谱的Foc1分泌蛋白质差异表达分析 | 第37-43页 |
3.3.4.1 诱导条件下Foc1的分泌蛋白质差异表达分析 | 第37-40页 |
3.3.4.2 Foc1差异表达分泌蛋白的功能分类 | 第40-41页 |
3.3.4.3 Foc1差异表达分泌蛋白的GO功能显著性富集分析 | 第41-42页 |
3.3.4.4 Foc1差异表达分泌蛋白的KEGG通路富集分析 | 第42-43页 |
3.3.5 基于质谱的Foc4分泌蛋白质差异表达分析 | 第43-47页 |
3.3.5.1 诱导条件下Foc4的分泌蛋白质差异表达分析 | 第43-46页 |
3.3.5.2 Foc4差异表达分泌蛋白的功能分类 | 第46-47页 |
3.3.6 Foc4差异表达分泌蛋白的GO功能显著性富集分析 | 第47-48页 |
3.3.7 Foc4差异表达分泌蛋白的KEGG通路富集分析 | 第48-49页 |
3.3.8 Foc不同小种间分泌蛋白质的差异表达分析 | 第49-63页 |
3.3.8.1 非诱导条件下Foc1与Foc4分泌蛋白质差异表达分析 | 第49-52页 |
3.3.8.2 非诱导条件下Foc1与Foc4差异表达分泌蛋白功能分类 | 第52-53页 |
3.3.8.3 非诱导条件下Foc1与Foc4差异表达分泌蛋白GO功能显著性富集分析 | 第53-54页 |
3.3.8.4 非诱导条件下Foc1与Foc4差异表达分泌蛋白KEGG通路富集分析 | 第54-55页 |
3.3.8.5 诱导条件下Foc不同小种间的分泌蛋白质差异表达分析 | 第55-60页 |
3.3.8.6 诱导条件下Foc1与Foc4差异表达分泌蛋白的功能分类 | 第60-61页 |
3.3.8.7 诱导条件下Foc1与Foc4差异表达分泌蛋白GO功能显著性富集分析 | 第61-62页 |
3.3.8.8 诱导条件下Foc1与Foc4差异表达分泌蛋白KEGG通路富集分析 | 第62-63页 |
4 结论与讨论 | 第63-76页 |
4.1 全文结论 | 第63-64页 |
4.2 讨论 | 第64-74页 |
4.2.1 诱导条件下Foc分泌蛋白质组研究方法的建立 | 第64-65页 |
4.2.2 结合生物信息学的Foc差异表达分泌蛋白的分析 | 第65-67页 |
4.2.3 诱导条件下Foc差异表达分泌蛋白的功能分析 | 第67-74页 |
4.2.3.1 蛋白质合成和分解代谢相关蛋白质 | 第69-70页 |
4.2.3.2 氨基酸代谢相关蛋白质 | 第70页 |
4.2.3.3 氧化胁迫相关蛋白质 | 第70-71页 |
4.2.3.4 分子伴侣 | 第71页 |
4.2.3.5 细胞壁降解酶类相关蛋白 | 第71-72页 |
4.2.3.6 水解相关酶类 | 第72-73页 |
4.2.3.7 氨基酸代谢 | 第73-74页 |
4.2.3.8 信号转导 | 第74页 |
4.2.3.9 能量合成代谢 | 第74页 |
4.3 存在的问题及展望 | 第74-76页 |
致谢 | 第76-77页 |
参考文献 | 第77-81页 |