| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 主要英文缩写一览表 | 第7-11页 |
| 1 前言 | 第11-22页 |
| 1.1 导向农药概况 | 第11-12页 |
| 1.1.1 导向农药的提出 | 第11页 |
| 1.1.2 导向农药的发展 | 第11-12页 |
| 1.2 氨基酸转运蛋白概述 | 第12-13页 |
| 1.3 植物氨基酸转运蛋白 | 第13-15页 |
| 1.3.1 ATF转运蛋白 | 第13-14页 |
| 1.3.2 APC转运蛋白 | 第14页 |
| 1.3.3 氨基酸转运蛋白的调控 | 第14-15页 |
| 1.4 导向农药的发展和机遇 | 第15-16页 |
| 1.5 实时荧光定量 | 第16-18页 |
| 1.5.1 实时荧光定量技术 | 第16-17页 |
| 1.5.2 实时荧光定量原理 | 第17页 |
| 1.5.3 实时荧光的分类 | 第17-18页 |
| 1.5.4 重要参数 | 第18页 |
| 1.5.5 绝对定量和相对定量 | 第18页 |
| 1.6 研究的目的以及意义 | 第18-19页 |
| 1.7 研究内容 | 第19-21页 |
| 1.8 本研究的实验设计与技术路线 | 第21-22页 |
| 2 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.1 供试植物 | 第22页 |
| 2.2 供试药物 | 第22页 |
| 2.3 质粒与菌株 | 第22页 |
| 2.4 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.5 主要培养基 | 第23页 |
| 2.6 主要试剂的配置 | 第23-24页 |
| 2.7 生物信息学分析软件及相关网站 | 第24-25页 |
| 2.8 主要仪器 | 第25页 |
| 3 实验方法 | 第25-35页 |
| 3.1 细胞膜电位测试 | 第25-26页 |
| 3.2 GlyF蓖麻体系输导性检测 | 第26页 |
| 3.3 GlyF的理化性质预测 | 第26页 |
| 3.4 GlyF蓖麻子叶叶碟吸收实验 | 第26-27页 |
| 3.5 液相检测条件 | 第27页 |
| 3.6 蓖麻氨基酸转运蛋白（ATF和APC家族）的鉴定和分离 | 第27页 |
| 3.7 GlyF处理蓖麻糖转运蛋白表达半定量分析 | 第27-31页 |
| 3.7.1 蓖麻基因组DNA的提取 | 第27-28页 |
| 3.7.2 蓖麻幼苗的药物处理 | 第28页 |
| 3.7.3 蓖麻总RNA的提取 | 第28-29页 |
| 3.7.4 cDNA的合成 | 第29-30页 |
| 3.7.5 特异性引物的设计与验证 | 第30页 |
| 3.7.6 GlyF处理蓖麻氨基酸转运蛋白半定量分析 | 第30-31页 |
| 3.8 GlyF理下蓖麻氨基酸转运蛋白表达定量分析 | 第31-34页 |
| 3.8.1 药物处理下蓖麻氨基酸转运蛋白表达分析Ct值筛选（qPCR循环阈值） | 第31页 |
| 3.8.2 差异基因的TA克隆及标准曲线的制作 | 第31-34页 |
| 3.8.2.1 差异基因目的片段的获取 | 第31-32页 |
| 3.8.2.4 PCR产物T载体构建 | 第32-34页 |
| 3.8.3 RT-qPCR分析 | 第34页 |
| 3.8.4 数据采集分析 | 第34页 |
| 3.9 差异基因亚细胞定位 | 第34-35页 |
| 3.9.1 BY-2 细胞培养 | 第34页 |
| 3.9.2 亚细胞定位载体获取 | 第34页 |
| 3.9.3 亚细胞定位实验 | 第34-35页 |
| 4 实验结果 | 第35-53页 |
| 4.1 GlyF对蓖麻原生质体膜电位的影响 | 第35-36页 |
| 4.2 Gly在蓖麻幼苗上的韧皮部输导性 | 第36-37页 |
| 4.3 GlyF的理化性质预测 | 第37-38页 |
| 4.4 GlyF蓖麻叶碟实验 | 第38-42页 |
| 4.5 蓖麻ATF和APC氨基酸转运蛋白家族的鉴定和进化分析 | 第42-45页 |
| 4.6 GlyF处理后蓖麻氨基酸转运蛋白基因半定量表达分析 | 第45-47页 |
| 4.6.1 蓖麻幼苗子叶总RNA提取结果 | 第45页 |
| 4.6.2 蓖麻氨基酸转运蛋白基因本底表达水平的确定 | 第45-46页 |
| 4.6.3 半定量分析 | 第46-47页 |
| 4.7 RT-qPCR目标基因丰度筛选 | 第47-48页 |
| 4.8 GlyF处理下的ATF和APC家族转运蛋白RT-qPCR相对定量表达分析 | 第48-51页 |
| 4.8.1 差异基因引物特异性及扩增效率分析 | 第48-49页 |
| 4.8.2 差异基因表达分析 | 第49-51页 |
| 4.9 四个差异基因亚细胞定位 | 第51-53页 |
| 5 结论与讨论 | 第53-58页 |
| 5.1 结论 | 第53-54页 |
| 5.2 讨论 | 第54-57页 |
| 5.2.1 氨基酸转运蛋白和导向农药 | 第54-55页 |
| 5.2.2 蓖麻氨基酸转运蛋白的鉴定 | 第55-56页 |
| 5.2.3 GlyF处理下蓖麻氨基酸转运蛋白基因表达分析 | 第56页 |
| 5.2.4 四个差异基因的亚细胞定位和功能探讨 | 第56-57页 |
| 5.3 有待进一步解决的问题 | 第57页 |
| 5.4 本论文的创新之处 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 附录 A | 第64-65页 |
| 附录 B | 第65-73页 |
