| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第15-17页 |
| 第一章 引言 | 第17-26页 |
| 1.1 植物次生代谢物质 | 第17页 |
| 1.2 萜类化合物 | 第17-23页 |
| 1.2.1 萜类化合物的生理活性 | 第18页 |
| 1.2.2 萜类合成途径 | 第18-19页 |
| 1.2.3 萜类合成途径中的关键酶 | 第19-23页 |
| 1.2.3.1 HMGR | 第19-20页 |
| 1.2.3.2 DXS | 第20页 |
| 1.2.3.3 DXR | 第20-21页 |
| 1.2.3.4 GPPS | 第21页 |
| 1.2.3.5 FPS | 第21-22页 |
| 1.2.3.6 GGPPS | 第22页 |
| 1.2.3.7 萜类合成酶 | 第22-23页 |
| 1.3 茄尼醇简介 | 第23页 |
| 1.4 烟草中茄尼醇合成相关酶研究进展 | 第23-24页 |
| 1.5 本研究的目的、意义和技术路线 | 第24-26页 |
| 1.5.1 研究的目的与意义 | 第24-25页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第25-26页 |
| 第二章 烟草茄尼醇积累与萜类关键酶基因表达的相关性研究 | 第26-35页 |
| 2.1 试验材料与方法 | 第26-29页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第26页 |
| 2.1.2 试剂 | 第26页 |
| 2.1.3 引物合成 | 第26页 |
| 2.1.4 试验方法 | 第26-29页 |
| 2.1.4.1 烟草总RNA提取 | 第26-27页 |
| 2.1.4.2 RNA纯度及完整性检测 | 第27页 |
| 2.1.4.3 cDNA第一条连的合成 | 第27-28页 |
| 2.1.4.4 荧光定量分析 | 第28页 |
| 2.1.4.5 数据分析 | 第28-29页 |
| 2.2 结果 | 第29-33页 |
| 2.2.1 烟草不同生育期根、茎、叶中茄尼醇含量变化 | 第29页 |
| 2.2.2 烟草不同生育期萜类合成关键酶基因的表达模式 | 第29-33页 |
| 2.2.2.1 萜类合成关键酶基因在根中的表达 | 第29-30页 |
| 2.2.2.2 萜类合成关键酶基因在茎中的表达 | 第30-31页 |
| 2.2.2.3 萜类合成关键酶基因在叶中的表达 | 第31页 |
| 2.2.2.4 萜类合成关键酶基因与茄尼醇含量的相关性研究 | 第31-32页 |
| 2.2.2.5 萜类合成关键酶基因的相关性研究 | 第32-33页 |
| 2.3 讨论 | 第33-35页 |
| 2.3.1 茄尼醇在不同品种根茎叶发育过程中积累量的变化 | 第33-34页 |
| 2.3.2 调节茄尼醇合成相关酶基因的表达可能增加烟叶中茄尼醇的含量 | 第34页 |
| 2.3.3 茄尼醇合成途径中关键酶之间存在着复杂的网络调控 | 第34-35页 |
| 第三章 烟草茄尼基焦磷酸合酶（NtSPS）基因的克隆 | 第35-48页 |
| 3.1 材料与方法 | 第35-40页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第35-36页 |
| 3.1.1.1 植物材料 | 第35页 |
| 3.1.1.2 试剂 | 第35页 |
| 3.1.1.3 培养基配置 | 第35-36页 |
| 3.1.1.4 载体及菌种 | 第36页 |
| 3.1.2 试验方法 | 第36-40页 |
| 3.1.2.1 烟草总RNA的提取和纯化 | 第36页 |
| 3.1.2.2 RNA纯度及完整性检测 | 第36页 |
| 3.1.2.3 cDNA第一链的合成 | 第36页 |
| 3.1.2.4 烟草SPS基因的扩增 | 第36-37页 |
| 3.1.2.5 PCR产物的回收 | 第37-38页 |
| 1.2.3.6 PCR产物的连接与转化 | 第38页 |
| 3.1.2.7 目的片段的验证 | 第38-39页 |
| 3.1.2.8 阳性质粒DNA提取 | 第39页 |
| 3.1.2.9 测序结果分析 | 第39-40页 |
| 3.2 结果 | 第40-46页 |
| 3.2.1 NtSPS基因的克隆 | 第40页 |
| 3.2.2 目的片段的验证 | 第40-41页 |
| 3.2.3 NtSPS基因的序列分析 | 第41-46页 |
| 3.2.3.1 NtSPS基因序列特征分析 | 第41页 |
| 3.2.3.2 NtSPS基因多序列比对 | 第41页 |
| 3.2.3.3 NtSPS基因疏水性/亲水性的预测与分析 | 第41-45页 |
| 3.2.3.4 NtSPS基因跨膜结构域的预测与分析 | 第45页 |
| 3.2.3.5 NtSPS基因蛋白质高级结构域的预测与分析 | 第45-46页 |
| 3.3 讨论 | 第46-48页 |
| 第四章 NtSPS基因的遗传转化及鉴定 | 第48-56页 |
| 4.1 材料与方法 | 第48-52页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第48页 |
| 4.1.2 试剂 | 第48页 |
| 4.1.3 菌株和载体 | 第48页 |
| 4.1.4 SPS基因过表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 4.1.5 重组子的筛选与鉴定 | 第49页 |
| 4.1.6 外源基因转化农杆菌 | 第49页 |
| 4.1.7 农杆菌介导的遗传转化 | 第49-51页 |
| 4.1.8 转基因烟草植株的DNA提取 | 第51页 |
| 4.1.9 转基因植株的分子检测 | 第51页 |
| 4.1.10 转基因植株的荧光定量表达分析 | 第51-52页 |
| 4.2 结果 | 第52-55页 |
| 4.2.1 重组载体的检测 | 第52-53页 |
| 4.2.2 遗传转化 | 第53页 |
| 4.2.3 转基因植株的DNA鉴定 | 第53-54页 |
| 4.2.4 转基因植株的表达量分析 | 第54-55页 |
| 4.2.5 转基因植株叶片茄尼醇含量测定与分析 | 第55页 |
| 4.3 讨论 | 第55-56页 |
| 第五章 全文结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简历 | 第65页 |
