| 英文缩写说明 | 第4-7页 |
| 摘要 | 第7-11页 |
| Abstract | 第11-15页 |
| 第一章 引言 | 第30-44页 |
| 1.1 国内外研究现状 | 第30-40页 |
| 1.1.1 白僵菌和家蚕 | 第30页 |
| 1.1.2 白僵菌的侵染机制 | 第30-32页 |
| 1.1.3 真菌的致病机制 | 第32-33页 |
| 1.1.4 家蚕对病原的防御机制 | 第33-34页 |
| 1.1.5 免疫相关信号通路 | 第34-40页 |
| 1.2 研究内容和意义 | 第40-44页 |
| 1.2.1 胞外蛋白酶对毒力的影响 | 第40页 |
| 1.2.2 胞外几丁质酶对毒力的影响 | 第40页 |
| 1.2.3 白僵菌的致病机制 | 第40-41页 |
| 1.2.4 Toll信号通路在抗真菌侵染中的作用 | 第41页 |
| 1.2.5 IMD信号通路在抗真菌侵染中的作用 | 第41页 |
| 1.2.6 Jak/STAT信号通路在抗真菌侵染中的作用 | 第41页 |
| 1.2.7 丝氨酸蛋白酶抑制剂和黑化作用在抗真菌侵染中的作用 | 第41-42页 |
| 1.2.8 家蚕抗菌肽在抗白僵菌侵染过程中的作用 | 第42页 |
| 1.2.9 GSTs和GSH-Px解毒和抗氧化体系在抗真菌感染中的作用 | 第42页 |
| 1.2.10 研究意义 | 第42-44页 |
| 第二章 球孢白僵菌胞外蛋白酶对侵染毒力的影响 | 第44-67页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第44-47页 |
| 2.1.1 材料 | 第44页 |
| 2.1.2 试验仪器 | 第44-45页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第45-47页 |
| 2.2 实验方法 | 第47-54页 |
| 2.2.1 球孢白僵菌孢子悬液的制备 | 第47页 |
| 2.2.2 球孢白僵菌半数发病时间(MMT)和半数死亡时间(LT_(50))的测定 | 第47页 |
| 2.2.3 胞外蛋白酶活的测定 | 第47-48页 |
| 2.2.4 胞外蛋白酶抑制剂对侵染毒力的影响 | 第48页 |
| 2.2.5 白僵菌Bbcdep 1 基因的表达量与毒力的关系 | 第48页 |
| 2.2.6 白僵菌Bbcdep 1 基因的诱导表达模式 | 第48页 |
| 2.2.7 白僵菌侵染家蚕之后Bbcdep 1 的表达模式 | 第48-49页 |
| 2.2.8 白僵菌总RNA的提取以及基因组DNA的去除 | 第49页 |
| 2.2.9 cDNA的合成和实时定量PCR | 第49-50页 |
| 2.2.10 BbCDEP 1 的酵母表达和酶活的测定 | 第50-54页 |
| 2.2.11 蚕皮体外消化实验 | 第54页 |
| 2.3 结果与分析 | 第54-65页 |
| 2.3.1 11 株球孢白僵菌的MMT和L_(50)的测定 | 第54-57页 |
| 2.3.2 孢外蛋白酶活力与毒力的关系 | 第57-59页 |
| 2.3.3 蛋白酶抑制剂等对白僵菌侵染毒力的影响 | 第59-60页 |
| 2.3.4 Bbcdep 1 表达水平与侵染毒力的关系 | 第60-63页 |
| 2.3.5 Bbcdep 1 在白僵菌侵染家蚕过程中的表达模式 | 第63页 |
| 2.3.6 Bbcdep 1 在酿酒酵母中的表达和鉴定 | 第63-64页 |
| 2.3.7 蚕皮消化实验 | 第64-65页 |
| 2.4 讨论 | 第65-67页 |
| 第三章 球孢白僵菌胞外几丁质酶对白僵菌侵染毒力的影响 | 第67-78页 |
| 3.1 材料和试剂 | 第67-68页 |
| 3.1.1 材料 | 第67页 |
| 3.1.2 试验仪器 | 第67页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第67-68页 |
| 3.2 实验方法 | 第68-70页 |
| 3.2.1 球孢白僵菌孢子悬液的制备 | 第68页 |
| 3.2.2 球孢白僵菌半数发病时间(MMT)和半数死亡时间(LT50)的测定 | 第68页 |
| 3.2.3 胞外几丁质酶活力的测定 | 第68-69页 |
| 3.2.4 几丁质酶抑制剂对侵染毒力的影响 | 第69页 |
| 3.2.5 白僵菌Bmchit 1 和Bmchit 2 基因的表达量与毒力的关系 | 第69页 |
| 3.2.6 白僵菌Bmchit 1 和Bmchit 2 基因的诱导表达模式 | 第69页 |
| 3.2.7 白僵菌侵染家蚕之后Bmchit 1 和Bmchit 2 基因的表达模式 | 第69页 |
| 3.2.8 白僵菌总RNA的提取以及基因组DNA的去除 | 第69页 |
| 3.2.9 cDNA的合成和实时定量PCR | 第69-70页 |
| 3.2.10 BbChit1 和Bb Chit 2 进化树分析和蛋白结构预测 | 第70页 |
| 3.3 结果与分析 | 第70-76页 |
| 3.3.1 胞外几丁质酶活力与侵染毒力的关系 | 第70页 |
| 3.3.2 几丁质酶抑制剂对侵染毒力的影响 | 第70-72页 |
| 3.3.3 不同菌株Bbchit 1 和Bbchit 2 的诱导表达水平 | 第72-73页 |
| 3.3.4 白僵菌侵染家蚕后Bbchit 1 和Bbchit 2 的表达模式 | 第73-74页 |
| 3.3.5 BbChit 1 和BbChit 2 的进化树分析以及蛋白结构预测 | 第74-76页 |
| 3.4 讨论 | 第76-78页 |
| 第四章 白僵菌对家蚕致死机制的研究 | 第78-90页 |
| 4.1 材料和试剂 | 第78-79页 |
| 4.1.1 材料 | 第78页 |
| 4.1.2 试验仪器 | 第78页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第78-79页 |
| 4.2 试验方法 | 第79-82页 |
| 4.2.1 白僵菌毒素的提取 | 第79页 |
| 4.2.2 白僵菌毒素对存活率的影响 | 第79页 |
| 4.2.3 白僵菌毒素对家蚕BmN细胞的损伤 | 第79页 |
| 4.2.4 白僵菌侵染家蚕 | 第79页 |
| 4.2.5 家蚕总RNA的提取以及基因组DNA的去除 | 第79-80页 |
| 4.2.6 cDNA的合成和实时定量PCR | 第80页 |
| 4.2.7 糖代谢水平的变化 | 第80-81页 |
| 4.2.8 抗氧化体系变化 | 第81-82页 |
| 4.3 结果与分析 | 第82-87页 |
| 4.3.1 毒素对存活率的影响 | 第82页 |
| 4.3.2 毒素对家蚕细胞的影响 | 第82-83页 |
| 4.3.3 白僵菌侵染家蚕后糖代谢相关基因的表达模式 | 第83-84页 |
| 4.3.4 白僵菌对家蚕抗氧化水平的影响 | 第84-87页 |
| 4.4 讨论 | 第87-90页 |
| 第五章 家蚕Toll信号通路在抗白僵菌侵染过程中的作用 | 第90-102页 |
| 5.1 材料和试剂 | 第90页 |
| 5.1.1 材料 | 第90页 |
| 5.1.2 试验仪器 | 第90页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第90页 |
| 5.2 试验方法 | 第90-93页 |
| 5.2.1 球孢白僵菌孢子悬液的制备 | 第90页 |
| 5.2.2 白僵菌侵染家蚕 | 第90页 |
| 5.2.3 家蚕总RNA的提取以及基因组DNA的去除 | 第90-91页 |
| 5.2.4 cDNA的合成和实时定量PCR | 第91页 |
| 5.2.5 Toll信号通路相关基因在家蚕侵染白僵菌后的表达模式 | 第91-92页 |
| 5.2.6 BmβGRPs的RNAi实验 | 第92页 |
| 5.2.7 Toll信号通路抑制剂对白僵菌侵染家蚕过程的影响 | 第92页 |
| 5.2.8 血淋巴中抗真菌活性的检测 | 第92-93页 |
| 5.3 结果与分析 | 第93-100页 |
| 5.3.1 家蚕感染白僵菌后Toll信号通路相关因子的表达模式 | 第93-97页 |
| 5.3.2 Bmβgrps RNAi干扰后对TLRs和AMPs表达量的影响 | 第97页 |
| 5.3.3 Toll信号通路抑制剂对存活率的影响 | 第97-98页 |
| 5.3.4 家蚕血淋巴的抗真菌活性 | 第98-100页 |
| 5.4 讨论 | 第100-102页 |
| 第六章 家蚕IMD信号通路在抗白僵菌侵染过程中的作用 | 第102-108页 |
| 6.1 材料和试剂 | 第102页 |
| 6.1.1 材料 | 第102页 |
| 6.1.2 试验仪器 | 第102页 |
| 6.1.3 主要试剂 | 第102页 |
| 6.2 试验方法 | 第102-103页 |
| 6.2.1 球孢白僵菌孢子悬液的制备 | 第102页 |
| 6.2.2 白僵菌侵染家蚕 | 第102页 |
| 6.2.3 家蚕总RNA的提取以及基因组DNA的去除 | 第102页 |
| 6.2.4 cDNA的合成和实时定量PCR | 第102-103页 |
| 6.2.5 Imd信号通路相关基因在家蚕侵染白僵菌后的表达模式 | 第103页 |
| 6.2.6 Imd信号通路抑制剂对白僵菌侵染家蚕过程的影响 | 第103页 |
| 6.2.7 血淋巴中抗真菌活性的检测 | 第103页 |
| 6.3 结果与分析 | 第103-107页 |
| 6.3.1 家蚕感染白僵菌后Imd信号通路相关因子的表达模式 | 第103-104页 |
| 6.3.2 Imd信号通路抑制剂对存活率的影响 | 第104-105页 |
| 6.3.3 家蚕血淋巴的抗真菌活性 | 第105-107页 |
| 6.4 讨论 | 第107-108页 |
| 第七章 家蚕Jak/STAT信号通路在抗白僵菌侵染过程中的作用 | 第108-120页 |
| 7.1 材料和试剂 | 第108页 |
| 7.1.1 材料 | 第108页 |
| 7.1.2 试验仪器 | 第108页 |
| 7.1.3 主要试剂 | 第108页 |
| 7.2 试验方法 | 第108-110页 |
| 7.2.1 球孢白僵菌孢子悬液的制备 | 第108页 |
| 7.2.2 白僵菌侵染家蚕 | 第108-109页 |
| 7.2.3 家蚕总RNA的提取以及基因组DNA的去除 | 第109页 |
| 7.2.4 cDNA的合成和实时定量PCR | 第109页 |
| 7.2.5 Jak/STAT信号通路相关基因在家蚕侵染白僵菌后的表达模式 | 第109页 |
| 7.2.6 BmCTL5的RNAi实验 | 第109-110页 |
| 7.2.7 Jak/STAT信号通路抑制剂对白僵菌侵染家蚕过程的影响 | 第110页 |
| 7.2.8 血淋巴中抗真菌活性的检测 | 第110页 |
| 7.3 结果与分析 | 第110-118页 |
| 7.3.1 家蚕感染白僵菌后Jak/STAT信号通路核心信号因子的表达模式 | 第110-112页 |
| 7.3.2 家蚕感染白僵菌后Jak/STAT信号通路调节因子的表达模式 | 第112-113页 |
| 7.3.3 Jak/STAT信号通路对不同病原的应答反应 | 第113-115页 |
| 7.3.4 Bmctl5沉默后对Jak/STAT信号通路的影响 | 第115页 |
| 7.3.5 Jak/STAT信号通路抑制剂对存活率的影响 | 第115-116页 |
| 7.3.6 家蚕血淋巴的抗真菌活性 | 第116-118页 |
| 7.4 讨论 | 第118-120页 |
| 第八章 家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂和黑化作用在抗白僵菌侵染过程中的作用 | 第120-126页 |
| 8.1 材料和试剂 | 第120页 |
| 8.1.1 材料 | 第120页 |
| 8.1.2 试验仪器 | 第120页 |
| 8.1.3 主要试剂 | 第120页 |
| 8.2 试验方法 | 第120-122页 |
| 8.2.1 球孢白僵菌孢子悬液的制备 | 第120页 |
| 8.2.2 白僵菌侵染家蚕 | 第120页 |
| 8.2.3 家蚕总RNA的提取以及基因组DNA的去除 | 第120页 |
| 8.2.4 cDNA的合成和实时定量PCR | 第120-121页 |
| 8.2.5 家蚕感染白僵菌后serpins和黑化作用相关基因的表达模式 | 第121-122页 |
| 8.3 结果与分析 | 第122-124页 |
| 8.3.1 家蚕感染白僵菌后10个Bmserpin基因的表达模式 | 第122页 |
| 8.3.2 家蚕感染白僵菌后2个Bmserine protease和4个PO级联反应相关基因的表达模式 | 第122-124页 |
| 8.4 讨论 | 第124-126页 |
| 第九章 家蚕抗菌肽在抗白僵菌感染过程中的作用 | 第126-140页 |
| 9.1 材料与试剂 | 第126-127页 |
| 9.1.1 材料 | 第126页 |
| 9.1.2 试验仪器 | 第126页 |
| 9.1.3 主要试剂 | 第126-127页 |
| 9.2 实验方法 | 第127-132页 |
| 9.2.1 球孢白僵菌孢子悬液的制备 | 第127页 |
| 9.2.2 白僵菌侵染家蚕 | 第127页 |
| 9.2.3 家蚕总RNA的提取以及基因组DNA的去除 | 第127页 |
| 9.2.4 cDNA的合成和实时定量PCR | 第127页 |
| 9.2.5 抗菌肽基因在家蚕侵染白僵菌后的表达模式 | 第127-128页 |
| 9.2.6 抗菌肽基因原核表达载体的构建 | 第128-130页 |
| 9.2.7 重组质粒转化表达菌株和阳性转化子的筛选 | 第130-131页 |
| 9.2.8 转化子的小量诱导表达 | 第131页 |
| 9.2.9 SDS-PAGE和Western blotting分析 | 第131页 |
| 9.2.10 重组蛋白的分离、纯化以及标签的去除 | 第131-132页 |
| 9.2.11 重组蛋白对白僵菌的抑菌效果 | 第132页 |
| 9.3 结果与分析 | 第132-138页 |
| 9.3.1 抗菌肽基因表达量的变化 | 第132-134页 |
| 9.3.2 原核表达的抗菌肽的Western-blotting检测 | 第134-137页 |
| 9.3.3 原核表达的抗菌肽对白僵菌的抑菌效果 | 第137-138页 |
| 9.4 讨论 | 第138-140页 |
| 第十章 GSTs和GSH-Px在家蚕抵御球胞白僵菌感染过程中的作用 | 第140-152页 |
| 10.1 材料与方法 | 第140页 |
| 10.1.1 供试家蚕、菌株和主要试剂盒 | 第140页 |
| 10.1.2 实验仪器 | 第140页 |
| 10.1.3 实验试剂 | 第140页 |
| 10.2 实验方法 | 第140-142页 |
| 10.2.1 球孢白僵菌毒素的提取 | 第140-141页 |
| 10.2.2 球孢白僵菌感染家蚕幼虫 | 第141页 |
| 10.2.3 注射毒素和GSH | 第141页 |
| 10.2.4 GSTs, GSH-Px, GR酶活力和GSH含量的测定 | 第141页 |
| 10.2.5 总RNA提取和实时荧光定量PCR检测 | 第141-142页 |
| 10.3 结果与分析 | 第142-149页 |
| 10.3.1 家蚕幼虫感染球孢白僵菌后组织中GSTs酶活力、GSH-Px酶活力、GR酶活力和GSH含量的变化 | 第142-144页 |
| 10.3.2 家蚕幼虫感染球孢白僵菌后组织中Bmgstd1、Bmgsts1、Bmgsto1和Bmgsh-px基因的表达量变化 | 第144-146页 |
| 10.3.3 球孢白僵菌毒素对家蚕幼虫组织中GSTs酶活力、GSH-Px酶活力、GR酶活力和GSH含量的影响 | 第146-147页 |
| 10.3.4 球孢白僵菌毒素对家蚕幼虫组织中Bmgstd1、Bmgsts1、Bmgsto1和Bmgsh-px基因表达量的影响 | 第147-148页 |
| 10.3.5 注射GSH和球孢白僵菌毒素对家蚕幼虫存活率的影响 | 第148-149页 |
| 10.4 讨论 | 第149-152页 |
| 第十一章 全文讨论和结论 | 第152-156页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第156-158页 |
| 参考文献 | 第158-174页 |
| 致谢 | 第174页 |
