| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-20页 |
| 1.1 DHAV-1的流行特点及分布情况 | 第11-12页 |
| 1.2 鸭1型甲肝病毒的理化特性及生物学特性 | 第12-13页 |
| 1.3 鸭1型甲型肝炎病毒的特性和基因组结构 | 第13-15页 |
| 1.3.1 鸭1型甲肝病毒非编码区 | 第14页 |
| 1.3.2 鸭1型甲肝病毒编码区 | 第14-15页 |
| 1.4 鸭1型甲肝病毒的检测方法 | 第15-17页 |
| 1.4.1 中和试验 | 第15页 |
| 1.4.2 HA和HI试验 | 第15页 |
| 1.4.3 ELISA试验 | 第15-16页 |
| 1.4.4 荧光抗体法 | 第16页 |
| 1.4.5 胶体金法 | 第16页 |
| 1.4.6 RT-PCR技术 | 第16-17页 |
| 1.4.7 PCR-DHPLC | 第17页 |
| 1.4.8 RT-LAMP | 第17页 |
| 1.5 单克隆抗体技术 | 第17页 |
| 1.6 小结 | 第17-20页 |
| 2. 胰腺炎型DHAV-1的VP1基因的原核表达及鉴定 | 第20-32页 |
| 2.1 实验材料及试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.1 实验病毒及试剂 | 第20页 |
| 2.1.2 常用溶液的配置 | 第20-21页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-25页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第21页 |
| 2.2.2 目的基因的PCR扩增 | 第21-23页 |
| 2.2.3 PCR产物的回收与克隆 | 第23-24页 |
| 2.2.4 VP1重组蛋白的诱导表达条件的优化 | 第24-25页 |
| 2.2.5 VP1蛋白的可溶性分析 | 第25页 |
| 2.2.6 VP1蛋白的Western-blot鉴定 | 第25页 |
| 2.3 实验结果 | 第25-31页 |
| 2.3.1 VP1蛋白抗原表位的预测及序列分析 | 第25-26页 |
| 2.3.1.1 VP1蛋白的抗原预测 | 第25-26页 |
| 2.3.1.2 VP1蛋白的亲水性结构 | 第26页 |
| 2.3.1.3 VP1蛋白的表面概率结构 | 第26页 |
| 2.3.2 VP1基因的PCR扩增及双酶切鉴定 | 第26-28页 |
| 2.3.3 VP1蛋白表达条件的优化 | 第28-29页 |
| 2.3.4 VP1蛋白的可溶性分析结果 | 第29-30页 |
| 2.3.5 胰腺炎型鸭1型甲肝病毒VP1蛋白的Western-blot检测 | 第30-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-32页 |
| 3. 胰腺炎型鸭1型甲肝病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备 | 第32-49页 |
| 3.1 实验材料及试剂 | 第32-33页 |
| 3.1.1 实验细胞及动物 | 第32页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第32页 |
| 3.1.3 实验用液 | 第32-33页 |
| 3.1.4 仪器设备 | 第33页 |
| 3.2 单克隆抗体的制备 | 第33-39页 |
| 3.2.1 小鼠的免疫 | 第33页 |
| 3.2.2 胰腺炎型DHAV-1抗体的间接ELISA检测方法的建立 | 第33-35页 |
| 3.2.3 饲养层细胞的制备 | 第35页 |
| 3.2.4 骨髓瘤细胞的准备 | 第35-36页 |
| 3.2.5 脾细胞的制备 | 第36页 |
| 3.2.6 细胞融合 | 第36-37页 |
| 3.2.7 阳性杂交瘤细胞的克隆 | 第37页 |
| 3.2.8 杂交瘤细胞的冻存和复苏 | 第37-38页 |
| 3.2.9 杂交瘤细胞的鉴定 | 第38页 |
| 3.2.10 单克隆抗体腹水制备 | 第38-39页 |
| 3.2.11 单克隆抗体腹水效价测定 | 第39页 |
| 3.3 结果与分析 | 第39-47页 |
| 3.3.1 检测胰腺炎型DHAV-1抗体的间接ELISA的建立 | 第39-42页 |
| 3.3.1.1 纯化的胰腺炎型鸭1型甲肝病毒的蛋白定量 | 第39页 |
| 3.3.1.2 最佳抗原稀释度及最佳血清稀释度的确定 | 第39-40页 |
| 3.3.1.3 抗原最佳包被条件的确定 | 第40页 |
| 3.3.1.4 最佳血清工作时间的确定 | 第40-41页 |
| 3.3.1.5 酶标二抗最佳工作时间的确定 | 第41页 |
| 3.3.1.6 临界值的确定 | 第41页 |
| 3.3.1.7 免疫小鼠血清中的肝炎抗体效价水平的测定 | 第41-42页 |
| 3.3.2 杂交瘤细胞株的建立 | 第42-43页 |
| 3.3.3 稳定性鉴定结果 | 第43-44页 |
| 3.3.4 杂交瘤细胞的扩大培养 | 第44页 |
| 3.3.5 Western-blot鉴定结果 | 第44-45页 |
| 3.3.6 单克隆抗体的鉴定结果 | 第45-47页 |
| 3.4 讨论 | 第47-49页 |
| 3.4.1 抗原的选择与制备 | 第47页 |
| 3.4.2 免疫动物的选择 | 第47页 |
| 3.4.3 免疫辦的确定 | 第47页 |
| 3.4.4 饲养细胞 | 第47-48页 |
| 3.4.5 细胞融合 | 第48页 |
| 3.4.6 单克隆抗体效价比较 | 第48-49页 |
| 4 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 附录 | 第56-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
