| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 主要符号表 | 第14-16页 |
| 第1章 绪论 | 第16-34页 |
| 1.1 补体概述 | 第16-20页 |
| 1.1.1 补体系统的组成 | 第16页 |
| 1.1.2 补体系统的激活途径 | 第16-20页 |
| 1.2 C5a和C5a受体 | 第20-24页 |
| 1.2.1 C5a | 第20-21页 |
| 1.2.2 C5a受体 | 第21-23页 |
| 1.2.3 C5a受体介导的信号传导通路 | 第23-24页 |
| 1.3 C5a受体在肾脏中的表达 | 第24-26页 |
| 1.4 C5a受体与肾脏相关疾病的关系 | 第26-29页 |
| 1.4.1 脓毒症引起的肾损伤 | 第26页 |
| 1.4.2 移植肾排斥反应及缺血再灌注损伤 | 第26-27页 |
| 1.4.3 免疫复合物肾炎 | 第27-28页 |
| 1.4.4 狼疮性肾炎 | 第28页 |
| 1.4.5 肾间质纤维化 | 第28-29页 |
| 1.5 C5a受体拮抗剂及其在疾病治疗中的应用 | 第29-34页 |
| 1.5.1 小分子C5a受体拮抗剂及其在疾病治疗中的应用 | 第29-34页 |
| 第2章 大鼠C5aR基因shRNA质粒的构建与鉴定 | 第34-47页 |
| 2.1 实验材料与设备 | 第37-40页 |
| 2.1.1 主要试剂和材料 | 第37-38页 |
| 2.1.2 实验仪器与设备 | 第38-39页 |
| 2.1.3 主要试剂的配制 | 第39-40页 |
| 2.2 方法 | 第40-43页 |
| 2.2.1 C5aR基因shRNA表达模板序列设计及合成 | 第40页 |
| 2.2.2 单链目的基因片段的退火 | 第40页 |
| 2.2.3 载体线性化 | 第40-42页 |
| 2.2.4 线性化载体与退火的shRNA连接 | 第42页 |
| 2.2.5 重组质粒的转化和筛选 | 第42页 |
| 2.2.6 重组质粒的抽提 | 第42-43页 |
| 2.2.7 重组质粒的测序鉴定 | 第43页 |
| 2.2.8 重组质粒DNA浓度及纯度的测定 | 第43页 |
| 2.2.9 统计学方法 | 第43页 |
| 2.3 结果 | 第43-45页 |
| 2.3.1 C5aR shRNA序列的设计及合成 | 第43-44页 |
| 2.3.2 重组质粒测序结果 | 第44页 |
| 2.3.3 质粒DNA的浓度及纯度的测定结果 | 第44-45页 |
| 2.4 讨论 | 第45-47页 |
| 第3章 C5aR介导大鼠肾脓毒血症损伤的作用机制 | 第47-74页 |
| 3.1 实验材料与设备 | 第50-54页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第50页 |
| 3.1.2 试剂 | 第50-51页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第51-52页 |
| 3.1.4 主要试剂的配制 | 第52-54页 |
| 3.2 方法 | 第54-62页 |
| 3.2.1 细胞的复苏、培养和传代 | 第54页 |
| 3.2.2 脂质体转染 | 第54-55页 |
| 3.2.3 荧光定量RT-PCR检测C5aR mRNA的表达 | 第55-57页 |
| 3.2.4 Western blot检测细胞中C5aR蛋白的表达 | 第57-59页 |
| 3.2.5 荧光定量RT-PCR检测细胞中炎症因子mRNA的表达 | 第59页 |
| 3.2.6 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第59页 |
| 3.2.7 ELISA检测细胞培养上清液中TNF-a、IL-6含量 | 第59-60页 |
| 3.2.8 细胞MPO活性的检测 | 第60-61页 |
| 3.2.9 细胞通透性改变的检测 | 第61页 |
| 3.2.10 C5aR基因沉默对LPS所致大鼠急性肾损伤的保护作用 | 第61-62页 |
| 3.2.11 统计学分析 | 第62页 |
| 3.3 结果与分析 | 第62-72页 |
| 3.3.1 荧光定量RT-PCR检测细胞中C5aR mRNA的表达 | 第62-63页 |
| 3.3.2 WB检测NRK-52E细胞中C5aR蛋白的表达 | 第63-65页 |
| 3.3.3 荧光定量RT-PCR检测C5aR基因沉默对TNF-α、IL-6 mRNA的影响 | 第65-66页 |
| 3.3.4 C5aR基因沉默对细胞上清液中炎症因子含量的影响 | 第66-68页 |
| 3.3.5 C5aR基因沉默对细胞中MPO活性的影响 | 第68-69页 |
| 3.3.6 细胞通透性的影响 | 第69页 |
| 3.3.7 流式细胞仪检测C5aR基因沉默对的RNK-52E细胞凋亡率 | 第69页 |
| 3.3.8 大鼠肾组织中C5aR mRNA的表达水平 | 第69-71页 |
| 3.3.9 C5aR基因沉默对大鼠肾功能损伤的影响 | 第71-72页 |
| 3.3.10 C5aR基因沉默对大鼠血浆中炎症因子含量的影响 | 第72页 |
| 3.4 讨论 | 第72-74页 |
| 第4章 C5aR介导肾缺血再灌注(I/R)损伤的机制 | 第74-88页 |
| 4.1 材料 | 第77-78页 |
| 4.1.1 主要材料与试剂 | 第77页 |
| 4.1.2 主要仪器设备 | 第77-78页 |
| 4.1.3 主要试剂的配制 | 第78页 |
| 4.2 方法 | 第78-80页 |
| 4.2.1 细胞培养及分组 | 第78页 |
| 4.2.2 细胞缺氧/复氧(H/R)模型的构建 | 第78页 |
| 4.2.3 免疫荧光检测NFAT核转位 | 第78-79页 |
| 4.2.4 荧光定量PCR检测TNF-α、IL-6 mRNA | 第79页 |
| 4.2.5 WB法检测TNF-α、IL-6含量 | 第79页 |
| 4.2.6 流式细胞术 | 第79页 |
| 4.2.7 ELISA检测细胞培养上清液中TNF-a、IL-6含量 | 第79-80页 |
| 4.2.8 CCK-8法测细胞毒性 | 第80页 |
| 4.2.9 数据统计分析 | 第80页 |
| 4.3 结果 | 第80-86页 |
| 4.3.1 免疫荧光法检测NFAT核转位 | 第80-81页 |
| 4.3.2 TNF-α、IL-6 mRNA的表达 | 第81-82页 |
| 4.3.3 TNF-α、IL-6蛋白质的表达 | 第82-83页 |
| 4.3.4 细胞培养上清液TNF-a、IL-6含量 | 第83-84页 |
| 4.3.5 CCK-8法检测NRK-52E细胞生长情况 | 第84-85页 |
| 4.3.6 用流式细胞术分析细胞凋亡状况 | 第85-86页 |
| 4.4 讨论 | 第86-88页 |
| 结论 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-99页 |
| 附录 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100页 |
