| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 前言 | 第10-15页 |
| 1. 内皮细胞衰老与血管疾病的关系 | 第10-12页 |
| 2. RICTOR在衰老中的作用 | 第12-15页 |
| 实验材料 | 第15-22页 |
| 1. 菌株及质粒载体 | 第15页 |
| 2. 细胞系及培养基 | 第15页 |
| 3. 仪器 | 第15-17页 |
| 4. 主要试剂 | 第17-18页 |
| 5. 实验用小鼠及饲料 | 第18-19页 |
| 6. 主要试剂配制和成分 | 第19-22页 |
| 实验方法 | 第22-42页 |
| 1. 细菌操作与质粒的构建 | 第22-27页 |
| 1.1 质粒的转化和扩增 | 第22页 |
| 1.2 质粒的提取和纯化 | 第22-23页 |
| 1.3 pcDNA3.1-RICTOR 3'UTR的构建 | 第23-27页 |
| 2. 脐静脉内皮细胞分离鉴定 | 第27-28页 |
| 2.1 标本的收集 | 第27页 |
| 2.2 脐静脉内皮细胞分离 | 第27-28页 |
| 2.3 脐静脉内皮细胞的鉴定 | 第28页 |
| 3. 细胞培养 | 第28-29页 |
| 3.1 细胞的生长条件 | 第28页 |
| 3.2 细胞的传代 | 第28页 |
| 3.3 细胞的计数 | 第28页 |
| 3.4 细胞的冻存和复苏 | 第28-29页 |
| 4. 血管内皮细胞模型的建立 | 第29页 |
| 4.1 高糖对血管内皮细胞的刺激 | 第29页 |
| 4.2 氧化低密度脂蛋白对血管内皮细胞的刺激 | 第29页 |
| 5. β-半乳糖苷酶染色(SA-β-gal staining) | 第29-30页 |
| 6. 实时荧光定量PCR(Quantitative Real-Time PCR) | 第30-33页 |
| 6.1 总RNA提取 | 第30页 |
| 6.2 逆转录PCR(RT-PCR) | 第30-33页 |
| 7. 蛋白印记(Western Blot) | 第33-36页 |
| 7.1 蛋白提取 | 第33页 |
| 7.2 蛋白定量 | 第33页 |
| 7.3 蛋白变性 | 第33-34页 |
| 7.4 SDS-PAGE电泳 | 第34页 |
| 7.5 转膜 | 第34-35页 |
| 7.6 封闭 | 第35页 |
| 7.7 孵育一抗 | 第35页 |
| 7.8 孵育二抗 | 第35页 |
| 7.9 显色 | 第35-36页 |
| 8. 重组腺病毒的制备 | 第36-39页 |
| 8.1 原始病毒的建立 | 第36页 |
| 8.2 重组腺病毒的鉴定 | 第36-38页 |
| 8.3 病毒纯化 | 第38-39页 |
| 9. 离体血管环张力实验 | 第39-40页 |
| 10. 双荧光素酶报告基因检测 | 第40-42页 |
| 实验结果 | 第42-55页 |
| 1. 人脐静脉内皮细胞分离 | 第42页 |
| 2. 人脐静脉内皮细胞复制型衰老模型的构建 | 第42页 |
| 3. 经高糖和ox-LDL刺激的内皮细胞模型的构建 | 第42页 |
| 4. RICTOR和mTOR等在衰老的血管内皮细胞中的表达情况 | 第42-44页 |
| 5. RICTOR过表达腺病毒构建 | 第44-46页 |
| 6. RICTOR抑制HUVECs的衰老 | 第46-52页 |
| 6.1 过表达RICTOR提高了衰老细胞模型中mTORC2的表达水平 | 第46-48页 |
| 6.2 RICTOR抑制HUVECs的复制型衰老 | 第48-52页 |
| 7. 内皮细胞特异性RICTOR过表达改善内皮细胞依赖的血管舒张功能 | 第52页 |
| 8. miRNA可以调节RICTOR在HUVECs中的表达 | 第52-55页 |
| 8.1 miRNA-152在衰老的内皮细胞中特异性高表达 | 第52-53页 |
| 8.2 RICTOR是miRNA-152的靶基因 | 第53-55页 |
| 讨论 | 第55-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 英文缩略语表 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 个人简历 | 第67-68页 |
