| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 前言 | 第10-33页 |
| 一、研究背景 | 第10页 |
| 二、转CP4-EPSPS 基因植物及其产品的检测 | 第10-13页 |
| 1. 转CP4-EPSPS 基因 | 第10-11页 |
| 2. 检测方法研究进展 | 第11-13页 |
| ·基于核酸的主要检测方法 | 第11-12页 |
| ·基于蛋白质的主要检测方法 | 第12-13页 |
| 三、SELEX 技术研究进展 | 第13-22页 |
| 1. 经典SELEX 技术的基本原理与技术路线 | 第14-15页 |
| 2. SELEX 技术的筛选基础 | 第15-16页 |
| 3. 随机单链寡核苷酸文库的体外构建 | 第16-17页 |
| 4. 影响SELEX 筛选的因素 | 第17-18页 |
| 5. SELEX 技术的改进与发展 | 第18-22页 |
| ·提高筛选效率的改良技术 | 第18-20页 |
| ·无引物结合序列的适配子的筛选技术 | 第20页 |
| ·扩展筛选功能的技术改良 | 第20-22页 |
| 四、SELEX 技术的优越性及其应用 | 第22-25页 |
| 1. SELEX 技术所用文库的优越性 | 第22-23页 |
| ·靶目标范围更广 | 第22页 |
| ·稳定性好、易于修饰 | 第22-23页 |
| ·制备方便、筛选周期短 | 第23页 |
| ·高亲和力、高特异性 | 第23页 |
| ·分子量小 | 第23页 |
| 2. 适体与单克隆抗体的比较 | 第23-24页 |
| 3. SELEX 技术的应用 | 第24-25页 |
| ·生物分析方面 | 第24-25页 |
| ·药物筛选及疾病治疗方面 | 第25页 |
| 五、展望 | 第25-27页 |
| 参考文献 | 第27-33页 |
| 第一章 用SELEX 法筛选CP4-EPSPS 转基因蛋白的适体 | 第33-51页 |
| ·前言 | 第33页 |
| ·材料与方法 | 第33-40页 |
| ·材料 | 第33-36页 |
| ·随机ssDNA 文库、引物 | 第33页 |
| ·靶蛋白、对照蛋白及筛选载体 | 第33-34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·主要溶液配制 | 第34-35页 |
| ·实验用仪器 | 第35-36页 |
| ·方法 | 第36-40页 |
| ·文库与引物的稀释 | 第36页 |
| ·SELEX 筛选过程 | 第36-37页 |
| ·普通PCR 扩增 | 第37-38页 |
| ·诱变PCR | 第38-39页 |
| ·ssDNA 次级文库的制备 | 第39-40页 |
| ·奇数轮亲和力测试 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-44页 |
| ·每轮PCR 优化反应的最佳退火温度 | 第40页 |
| ·普通PCR 每轮优化反应的电泳结果 | 第40-42页 |
| ·诱变PCR 扩增条件优化结果 | 第42-43页 |
| ·SELEX 筛选结果 | 第43页 |
| ·筛选的ssDNA 与转基因CP4-EPSPS 蛋白的结合率 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-48页 |
| ·筛选对象的选择 | 第44页 |
| ·随机ssDNA 文库及引物的设计 | 第44-45页 |
| ·文库用量对筛选结果的影响 | 第45-46页 |
| ·靶目标浓度对筛选结果的影响 | 第46页 |
| ·反向筛选的利用对筛选结果的影响 | 第46页 |
| ·分离方法对筛选结果的影响 | 第46-47页 |
| ·普通PCR 扩增条件的优化对筛选结果的影响 | 第47页 |
| ·诱变PCR 对筛选结果的影响 | 第47-48页 |
| ·筛选轮数对筛选结果的影响 | 第48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-51页 |
| 第二章 适体的克隆与测序 | 第51-73页 |
| ·前言 | 第51页 |
| ·材料与方法 | 第51-56页 |
| ·材料 | 第51-52页 |
| ·培养基 | 第51页 |
| ·克隆相关试剂 | 第51-52页 |
| ·其它试剂和溶液 | 第52页 |
| ·方法 | 第52-56页 |
| ·第15 轮筛选产物的扩增 | 第53页 |
| ·PCR 扩增产物的回收纯化 | 第53-54页 |
| ·PCR 纯化产物的连接 | 第54页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第54页 |
| ·转化 | 第54页 |
| ·平板的制备及转化菌的涂布 | 第54-55页 |
| ·筛选转化子 | 第55页 |
| ·克隆子的鉴定 | 第55-56页 |
| ·测序 | 第56页 |
| ·适体序列结构分析 | 第56页 |
| ·结果与分析 | 第56-68页 |
| ·克隆菌蓝白斑筛选结果 | 第56-57页 |
| ·克隆子PCR 扩增产物电泳结果 | 第57页 |
| ·适体的测序峰图 | 第57-63页 |
| ·适体的一级结构分析 | 第63-66页 |
| ·适体的二级结构分析 | 第66-68页 |
| ·讨论 | 第68-70页 |
| ·PCR 扩增产物的回收纯化 | 第68页 |
| ·适体的克隆 | 第68-69页 |
| ·克隆子的挑选与鉴定 | 第69页 |
| ·适体的一级结构 | 第69-70页 |
| ·适体的二级结构 | 第70页 |
| ·小结 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-73页 |
| 第三章 适体与CP4-EPSPS 转基因蛋白结合率的测定 | 第73-79页 |
| ·前言 | 第73页 |
| ·材料与方法 | 第73-74页 |
| ·材料 | 第73页 |
| ·靶蛋白、对照蛋白及结合载体 | 第73页 |
| ·引物 | 第73页 |
| ·试剂与缓冲液 | 第73页 |
| ·方法 | 第73-74页 |
| ·各克隆子DNA 的提取 | 第74页 |
| ·地高辛标记的ssDNA 的制备 | 第74页 |
| ·各适体与转基因CP4-EPSPS 蛋白结合率的测定 | 第74页 |
| ·D04 号适体群特异性的测定 | 第74页 |
| ·结果与分析 | 第74-76页 |
| ·各适体与转基因CP4-EPSPS 蛋白的结合率 | 第74-75页 |
| ·D04 号适体特异性的测定 | 第75-76页 |
| ·讨论 | 第76-77页 |
| ·各适体与转基因CP4-EPSPS 蛋白的结合率的测定 | 第76页 |
| ·结合率及特异性测定的影响因素 | 第76-77页 |
| ·D04 号适体群的特异性 | 第77页 |
| ·小结 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-79页 |
| 第四章 结论 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 附录 | 第81页 |
