| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 引言 | 第9-17页 |
| ·镰刀菌与禾谷镰刀菌 | 第9-11页 |
| ·Ras超家族蛋白 | 第11-12页 |
| ·研究真核生物Rab家族蛋白的重要意义 | 第12-15页 |
| ·Rab家族概述 | 第12-14页 |
| ·Rab蛋白介导的调节网络研究 | 第14-15页 |
| ·Rab5／Rab7在胞吞过程中的功能相关性 | 第15-16页 |
| ·禾谷镰刀菌致病机制以及产毒素机理的研究需要新的突破口 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-33页 |
| ·实验材料 | 第17-18页 |
| ·供试菌株 | 第17页 |
| ·行使用的培养基 | 第17页 |
| ·生化试剂及有关溶液 | 第17-18页 |
| ·各类抗生素 | 第18页 |
| ·仪器 | 第18页 |
| ·实验方法 | 第18-33页 |
| ·FgRab7 DNA序列获得 | 第18页 |
| ·FgRab7 与酿酒酵母YPT7的同源性和三级结构予页测 | 第18-19页 |
| ·谷镰刀菌基因组DNA提取 | 第19页 |
| ·谷镰刀菌Rab7基因敲除突变体的载体构建 | 第19-20页 |
| ·禾谷镰刀菌原生质体制备与转化 | 第20-21页 |
| ·禾谷镰刀菌菌丝t’totalRNA的提取及检测 | 第21页 |
| ·RT-PCR反转录 | 第21-22页 |
| ·菌落生长速度测定 | 第22页 |
| ·产孢量统计 | 第22页 |
| ·总蛋白的提耳(TCA／N酮法)及定量检测(Bradlbrd法) | 第22-23页 |
| ·ZXRab7突变体总蛋白双向电泳 | 第23-25页 |
| ·Rab7基因PCR扩增条件 | 第25-26页 |
| ·TA克隆 | 第26页 |
| ·Escherichia coli DH5a毒受态细胞的制备和转化 | 第26-27页 |
| ·Escherichia coli BL21毒受态细胞的制备和转化 | 第27-28页 |
| ·质粒的提取 | 第28页 |
| ·pET28a-Rab7表达载体构建 | 第28-29页 |
| ·FgRab7的诱导表达 | 第29-30页 |
| ·His-Rab7纯化 | 第30-31页 |
| ·His-Rab7 Pull-down 分析 | 第31-32页 |
| ·Elisa法测定野生型与缺夫突变体禾谷镰刀菌DON毒素 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-47页 |
| ·禾谷镰刀菌FgRab7基因克隆 | 第33页 |
| ·禾谷镰刀菌FgRab7与酵母菌YPT7结构对比分析 | 第33-34页 |
| ·FgRab7的功能分忻 | 第34-40页 |
| ·敲除载体的构建 | 第34-35页 |
| ·敲除突变体验证 | 第35-36页 |
| ·敲除突变体的表型分忻 | 第36-40页 |
| ·敲除突变体生长速率明显下降而且菌丝形态也有明显变化 | 第36-37页 |
| ·Rab7敲除突变体产孢量明显下降 | 第37-38页 |
| ·敲除突变体GFP 融合互补及定位 | 第38-39页 |
| ·FgRab7敲除影ⅡDON毒素的产生 | 第39-40页 |
| ·敲除突变体的蛋白组学分忻 | 第40-44页 |
| ·蛋白质的差异表达分忻 | 第41-44页 |
| ·His-Rab7 pull-down 分析 | 第44-47页 |
| 4 小结与讨论 | 第47-51页 |
| ·禾谷镰刀菌中FgRab7影响产孢、生长、和DON毒素分泌量 | 第47页 |
| ·FgRab7与其他蛋白互作的初探 | 第47-48页 |
| ·Rab7-GFP定位 | 第48-49页 |
| ·利用双向电泳技术研究Rab7缺失突变对其他蛋白的影响 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 附录 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
