| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 文献综述 | 第14-30页 |
| 1. 血栓性疾病概述 | 第14-23页 |
| 1.1 血栓性疾病 | 第14-15页 |
| 1.2 血栓的分类 | 第15页 |
| 1.3 血栓的形成过程 | 第15-16页 |
| 1.4 机体的血栓抑制机制 | 第16-18页 |
| 1.5 血栓性疾病的治疗 | 第18-19页 |
| 1.6 溶栓剂简介 | 第19-23页 |
| 2. 毕赤酵母表达系统 | 第23-28页 |
| 2.1 酵母表达系统 | 第24页 |
| 2.2 巴斯德毕赤酵母表达体系 | 第24-25页 |
| 2.3 毕赤酵母表达宿主菌的选择 | 第25页 |
| 2.4 毕赤酵母表达载体 | 第25-26页 |
| 2.5 重组载体整合到毕赤酵母基因组 | 第26页 |
| 2.6 影响外源蛋白表达水平的因素 | 第26-28页 |
| 2.7 毕赤酵母系统的应用前景 | 第28页 |
| 3. 溶栓酶的药代研究 | 第28-29页 |
| 4. 研究目的和意义 | 第29-30页 |
| 第一章 枯草杆菌纤溶酶QK毕赤酵母表达菌株的构建 | 第30-46页 |
| 1. 材料与方法 | 第30-38页 |
| 1.1 实验材料 | 第30-31页 |
| 1.2 QK真核表达载体构建 | 第31-34页 |
| 1.3 重组QK表达菌株的构建与筛选 | 第34-36页 |
| 1.4 重组蛋白的诱导表达 | 第36页 |
| 1.5 SDS-PAGE检测蛋白表达 | 第36-37页 |
| 1.6 BCA法测定表达蛋白浓度 | 第37页 |
| 1.7 纤维蛋白平板法检测表达蛋白活性 | 第37-38页 |
| 2. 实验结果 | 第38-44页 |
| 2.1 QK密码子优化 | 第38页 |
| 2.2 pPICZαA-QK表达菌株构建 | 第38-41页 |
| 2.4 重组表达菌pPICZαA-qk的表达结果 | 第41-42页 |
| 2.5 表达蛋白浓度及活性测定 | 第42-44页 |
| 3. 讨论 | 第44-45页 |
| 4. 本章小结 | 第45-46页 |
| 第二章 重组QK毕赤酵母表达菌株发酵,纯化和冻干的研究 | 第46-70页 |
| 1. 材料与方法 | 第46页 |
| 1.1 大规模发酵及蛋白纯化相关溶液 | 第46页 |
| 2. 实验方法 | 第46-51页 |
| 2.1 重组QK的发酵研究 | 第46-49页 |
| 2.2 大规模纯化方法的建立 | 第49-50页 |
| 2.3 冻干保护剂的研究 | 第50-51页 |
| 3. 结果 | 第51-65页 |
| 3.1 摇瓶发酵工艺的优化 | 第51-55页 |
| 3.2 大规模发酵生产重组QK | 第55-59页 |
| 3.3 大规模纯化方法建立 | 第59-63页 |
| 3.4 冻干保护剂的选择 | 第63-65页 |
| 4. 讨论 | 第65-68页 |
| 4.1 摇瓶发酵 | 第65-66页 |
| 4.2 大规模发酵 | 第66-67页 |
| 4.3 纯化工艺的建立 | 第67-68页 |
| 4.4 冻干保护剂 | 第68页 |
| 5. 本章小结 | 第68-70页 |
| 第三章 重组QK ELISA检测方法的建立及大鼠体内药代动力学研究 | 第70-95页 |
| 1. 实验材料 | 第70-71页 |
| 1.1 主要试剂 | 第70-71页 |
| 2. 实验方法 | 第71-80页 |
| 2.1 多克隆抗体制备 | 第71-73页 |
| 2.2 单克隆抗体制备 | 第73-77页 |
| 2.3 双抗体夹心ELISA检测方法的建立 | 第77-79页 |
| 2.4 重组QK在大鼠体内药代动力学研究 | 第79-80页 |
| 3. 结果 | 第80-91页 |
| 3.1 重组QK多克隆抗体制备 | 第80-81页 |
| 3.2 重组QK单克隆抗体制备 | 第81-84页 |
| 3.3 双抗夹心ELISA检测方法的建立 | 第84-89页 |
| 3.4 药代动力学研究 | 第89-91页 |
| 4. 讨论 | 第91-94页 |
| 4.1 多克隆抗体制备 | 第91页 |
| 4.2 单克隆抗体制备 | 第91-92页 |
| 4.3 双抗夹心ELISA方法开发 | 第92-93页 |
| 4.4 药代动力学 | 第93-94页 |
| 5. 本章小结 | 第94-95页 |
| 第四章 总结 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-104页 |
| 攻博期间发表的科研成果 | 第104-105页 |
| 致谢 | 第105页 |