| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-18页 |
| 1.1 抗菌肽 | 第10-12页 |
| 1.1.1 抗菌肽的分类 | 第10页 |
| 1.1.2 抗菌肽的作用机制 | 第10-12页 |
| 1.2 抗菌肽研究现状 | 第12-13页 |
| 1.3 人源化抗菌肽LL37 | 第13-14页 |
| 1.4 毕赤酵母表达系统 | 第14-17页 |
| 1.4.1 毕赤酵母表达系统的优点 | 第15页 |
| 1.4.2 毕赤酵母表达系统组件 | 第15-17页 |
| 1.5 立题背景,意义及内容 | 第17-18页 |
| 第2章 LL37分泌表达菌株的构建 | 第18-30页 |
| 2.1 前言 | 第18页 |
| 2.2 实验材料和方法 | 第18-23页 |
| 2.2.1 实验菌株、质粒和试剂 | 第18页 |
| 2.2.2 培养基和培养方法 | 第18-19页 |
| 2.2.3 大肠杆菌感受态制备及转化 | 第19-20页 |
| 2.2.4 毕赤酵母感受态制备及电转化 | 第20-21页 |
| 2.2.5 毕赤酵母基因组快速提取方法 | 第21页 |
| 2.2.6 5-L生物反应器高密度培养工艺 | 第21-22页 |
| 2.2.7 分析检测方法 | 第22页 |
| 2.2.8 PCR反应体系及酶切反应体系 | 第22页 |
| 2.2.9 本章实验中使用的引物 | 第22-23页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第23-29页 |
| 2.3.1 pPIC9K-LL37质粒的构建 | 第23-24页 |
| 2.3.2 毕赤酵母GS115-9K-LL37菌株的获得 | 第24页 |
| 2.3.3 毕赤酵母GS115-9K-LL37菌株的发酵 | 第24-25页 |
| 2.3.4 抗菌肽活性测定以及抗菌肽对酵母的抑制 | 第25-27页 |
| 2.3.5 膜过滤与发酵耦合系统的建立 | 第27页 |
| 2.3.6 5-L生物反应器上膜过滤与发酵耦合 | 第27-29页 |
| 2.4 本章小结 | 第29-30页 |
| 第3章 LL37在毕赤酵母过氧化物酶体中表达 | 第30-40页 |
| 3.1 前言 | 第30页 |
| 3.2 实验材料和方法 | 第30-32页 |
| 3.2.1 实验菌株、质粒和试剂 | 第30页 |
| 3.2.2 培养基和缓冲液 | 第30页 |
| 3.2.3 毕赤酵母高拷贝菌株的筛选 | 第30-31页 |
| 3.2.4 毕赤酵母总蛋白提取 | 第31页 |
| 3.2.5 珠磨机破壁过程蛋白提取分析 | 第31页 |
| 3.2.6 本章实验中使用的引物 | 第31-32页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第32-39页 |
| 3.3.1 pPIC3.5K-LL37-SKL质粒的构建 | 第32-33页 |
| 3.3.2 毕赤酵母GS115-3.5K-LL37-SKL菌株的获得 | 第33页 |
| 3.3.3 毕赤酵母GS115-3.5K-LL37-SKL菌株的发酵 | 第33-34页 |
| 3.3.4 pPIC3.5K-LL37-GFP-SKL质粒的构建 | 第34-36页 |
| 3.3.5 毕赤酵母GS115-3.5K-LL37-GFP-SKL菌株的获得 | 第36-37页 |
| 3.3.6 毕赤酵母GS115-3.5K-LL37-GFP-SKL菌株的诱导表达以及荧光检测 | 第37-39页 |
| 3.4 本章小结 | 第39-40页 |
| 第4章 LL37串联体在毕赤酵母中的表达 | 第40-46页 |
| 4.1 前言 | 第40页 |
| 4.2 实验材料和方法 | 第40-41页 |
| 4.2.1 实验菌株、质粒和试剂 | 第40页 |
| 4.2.2 无缝组装方法 | 第40页 |
| 4.2.3 LL37多聚体的处理方式 | 第40-41页 |
| 4.2.4 本章实验中使用的引物 | 第41页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第41-45页 |
| 4.3.1 pPIC9K-LL37串联体的质粒构建 | 第41-43页 |
| 4.3.2 毕赤酵母GS115-9K-LL37串联体菌株的获得 | 第43页 |
| 4.3.3 毕赤酵母GS115-9K-LL37串联体菌株的摇瓶诱导 | 第43-44页 |
| 4.3.4 毕赤酵母GS115-9K-LL37串联体菌株的5-L生物反应器发酵 | 第44-45页 |
| 4.4 本章小结 | 第45-46页 |
| 第5章 GFP-LL37融合蛋白在毕赤酵母中的表达 | 第46-55页 |
| 5.1 前言 | 第46页 |
| 5.2 实验材料和方法 | 第46-48页 |
| 5.2.1 实验菌株、质粒和试剂 | 第46页 |
| 5.2.2 培养基和缓冲液 | 第46页 |
| 5.2.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第46-47页 |
| 5.2.4 Western blot(蛋白质印迹法) | 第47页 |
| 5.2.5 蛋白镍柱纯化 | 第47-48页 |
| 5.2.6 本章实验中使用的引物 | 第48页 |
| 5.3 实验结果与讨论 | 第48-54页 |
| 5.3.1 pPIC9K-GFP-EN-LL37-HIS_6质粒的构建 | 第48-49页 |
| 5.3.2 pPIC9K-LL37-DP-GFP-HIS_6质粒的构建 | 第49-50页 |
| 5.3.3 毕赤酵母融合蛋白表达菌株的获得 | 第50-51页 |
| 5.3.4 毕赤酵母融合蛋白表达菌株的发酵 | 第51-53页 |
| 5.3.5 融合蛋白的纯化 | 第53-54页 |
| 5.4 本章小结 | 第54-55页 |
| 第6章 总结与展望 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
