人胚胎干细胞定向诱导为成纤维细胞并构建组织工程皮肤的研究
| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略语对照表 | 第8-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-23页 |
| 1.1 胚胎干细胞 | 第15-18页 |
| 1.1.1 hESCs细胞系的建立 | 第15页 |
| 1.1.2 hESCs的培养体系 | 第15-16页 |
| 1.1.3 hESCs体外分化的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.1.4 存在问题 | 第17-18页 |
| 1.2 组织工程皮肤 | 第18-21页 |
| 1.2.1 组织工程皮肤的分类 | 第18-19页 |
| 1.2.2 种子细胞 | 第19-21页 |
| 1.2.3 存在问题 | 第21页 |
| 1.3 本实验的目的、意义和研究内容 | 第21-23页 |
| 1.3.1 实验目的及意义 | 第21-22页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第22-23页 |
| 第二章 hESCs特征检测 | 第23-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第23页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第23页 |
| 2.1.2 实验细胞 | 第23页 |
| 2.2 实验试剂 | 第23-24页 |
| 2.3 实验耗材 | 第24页 |
| 2.4 实验仪器 | 第24页 |
| 2.5 主要试剂配制 | 第24-25页 |
| 2.5.1 PBS | 第24页 |
| 2.5.2 0.1%明胶 | 第24页 |
| 2.5.3 4 %多聚甲醛 | 第24-25页 |
| 2.5.4 0.1%Triton X-100 | 第25页 |
| 2.5.5 5%BSA | 第25页 |
| 2.5.6 干细胞培养液(有饲养层法) | 第25页 |
| 2.5.7 干细胞冻存液 | 第25页 |
| 2.5.8 饲养层细胞培养液 | 第25页 |
| 2.5.9 饲养层细胞冻存液 | 第25页 |
| 2.5.10 EBs培养液 | 第25页 |
| 2.5.11 麻醉剂 | 第25页 |
| 2.6 实验方法 | 第25-30页 |
| 2.6.1 饲养层细胞的获取 | 第25-26页 |
| 2.6.2 饲养层的制备 | 第26页 |
| 2.6.3 hESCs体外培养(有饲养层) | 第26-27页 |
| 2.6.4 hESCs体外培养(无饲养层) | 第27页 |
| 2.6.5 ALP染色 | 第27页 |
| 2.6.6 免疫荧光染色 | 第27-28页 |
| 2.6.7 细胞增殖实验 | 第28页 |
| 2.6.8 畸胎瘤的形成 | 第28页 |
| 2.6.9 H&E染色 | 第28-29页 |
| 2.6.10 EBs的形成及其贴壁培养 | 第29页 |
| 2.6.11 EBs形成率 | 第29-30页 |
| 2.7 实验结果 | 第30-33页 |
| 2.7.1 hESCs形态学观察 | 第30页 |
| 2.7.2 ALP染色结果 | 第30-31页 |
| 2.7.3 免疫荧光染色结果 | 第31页 |
| 2.7.4 细胞增殖实验结果 | 第31-32页 |
| 2.7.5 畸胎瘤H&E染色结果 | 第32页 |
| 2.7.6 EBs及其贴壁观察 | 第32页 |
| 2.7.7 EBs形成率 | 第32-33页 |
| 2.8 讨论和小结 | 第33-35页 |
| 第三章 hESCs自主分化 | 第35-42页 |
| 3.1 实验试剂 | 第35页 |
| 3.2 实验耗材 | 第35页 |
| 3.3 实验仪器 | 第35-36页 |
| 3.4 主要试剂配制 | 第36页 |
| 3.4.1 自主分化培养液 | 第36页 |
| 3.5 实验方法 | 第36-39页 |
| 3.5.1 自主分化细胞基因检测 | 第36-38页 |
| 3.5.2 自主分化细胞蛋白检测 | 第38-39页 |
| 3.6 实验结果 | 第39-40页 |
| 3.6.1 自主分化细胞形态观察 | 第39页 |
| 3.6.2 自主分化细胞三胚层相关基因表达 | 第39-40页 |
| 3.6.3 自主分化细胞三胚层相关蛋白表达 | 第40页 |
| 3.7 讨论和小结 | 第40-42页 |
| 第四章 hE-MSCs的获得和鉴定 | 第42-52页 |
| 4.1 实验细胞 | 第42页 |
| 4.2 实验试剂 | 第42页 |
| 4.3 实验耗材 | 第42-43页 |
| 4.4 实验仪器 | 第43页 |
| 4.5 主要试剂配制 | 第43-44页 |
| 4.5.1 自主分化培养液 | 第43页 |
| 4.5.2 间充质干细胞培养液 | 第43页 |
| 4.5.3 油红O染液 | 第43页 |
| 4.5.4 茜素红染液 | 第43页 |
| 4.5.5 番红O染液 | 第43-44页 |
| 4.6 实验方法 | 第44-47页 |
| 4.6.1 hE-MSCs的获得 | 第44页 |
| 4.6.2 流式细胞术检测 | 第44页 |
| 4.6.3 三系分化 | 第44-45页 |
| 4.6.4 三系分化染色 | 第45-46页 |
| 4.6.5 三系分化基因检测 | 第46-47页 |
| 4.6.6 结果分析 | 第47页 |
| 4.7 实验结果 | 第47-50页 |
| 4.7.1 形态观察 | 第47-48页 |
| 4.7.2 流式细胞术检测结果 | 第48页 |
| 4.7.3 成脂肪分化结果 | 第48-49页 |
| 4.7.4 成骨分化结果 | 第49页 |
| 4.7.5 成软骨分化结果 | 第49-50页 |
| 4.8 讨论和小结 | 第50-52页 |
| 第五章 hE-MSCs向h-Fbs诱导分化 | 第52-59页 |
| 5.1 实验细胞 | 第52页 |
| 5.2 实验试剂 | 第52页 |
| 5.3 实验耗材 | 第52页 |
| 5.4 实验仪器 | 第52-53页 |
| 5.5 主要试剂配制 | 第53页 |
| 5.5.1 成纤维细胞诱导液 | 第53页 |
| 5.6 实验方法 | 第53-55页 |
| 5.6.1 hE-MSCs向成纤维细胞诱导分化 | 第53页 |
| 5.6.2 qPCR检测 | 第53-54页 |
| 5.6.3 ELISA检测 | 第54页 |
| 5.6.4 免疫荧光染色 | 第54-55页 |
| 5.6.5 结果分析 | 第55页 |
| 5.7 实验结果 | 第55-57页 |
| 5.7.1 形态观察 | 第55页 |
| 5.7.2 qPCR检测结果 | 第55-56页 |
| 5.7.3 ELISA检测结果 | 第56页 |
| 5.7.4 免疫荧光染色结果 | 第56-57页 |
| 5.8 讨论和小结 | 第57-59页 |
| 第六章 动物缺损修复 | 第59-67页 |
| 6.1 实验材料 | 第59页 |
| 6.1.1 实验动物 | 第59页 |
| 6.1.2 实验细胞 | 第59页 |
| 6.2 实验试剂 | 第59页 |
| 6.3 实验耗材 | 第59-60页 |
| 6.4 实验仪器 | 第60页 |
| 6.5 主要试剂配制 | 第60页 |
| 6.5.1 10×DMEM | 第60页 |
| 6.6 实验方法 | 第60-62页 |
| 6.6.1 鼠尾胶原的提取 | 第60页 |
| 6.6.2 TES的制作 | 第60-61页 |
| 6.6.3 CFDA实验 | 第61页 |
| 6.6.4 动物实验 | 第61-62页 |
| 6.6.5 H&E染色 | 第62页 |
| 6.6.6 结果分析 | 第62页 |
| 6.7 实验结果 | 第62-65页 |
| 6.7.1 TES的观察 | 第62-63页 |
| 6.7.2 动物实验形态观察 | 第63-64页 |
| 6.7.3 缺损面积计算 | 第64页 |
| 6.7.4 新生皮肤H&E染色结果 | 第64-65页 |
| 6.8 讨论和小结 | 第65-67页 |
| 结论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 | 第78页 |
