| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| 1.1 遗传在育种的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2 孤雌生殖 | 第12-18页 |
| 1.2.1 自然条件下的孤雌生殖 | 第12-13页 |
| 1.2.2 哺乳动物的孤雌生殖 | 第13-18页 |
| 1.3 孤雌生殖的研究进展及应用 | 第18-20页 |
| 1.4 本实验的研究意义与实验内容 | 第20-22页 |
| 第二章 小鼠胚胎成纤维细胞的分离和培养 | 第22-30页 |
| 2.1 实验动物 | 第22页 |
| 2.2 实验仪器和耗材 | 第22-23页 |
| 2.3 实验试剂 | 第23-24页 |
| 2.4 相关试剂的配制方法 | 第24-25页 |
| 2.4.1 50 ml消化液的配制 | 第24页 |
| 2.4.2 50 mlMEF培养液的配制 | 第24页 |
| 2.4.3 50 ml冻存液的配制 | 第24页 |
| 2.4.4 1 L PBS的配制 | 第24页 |
| 2.4.5 1 L 0.1%明胶的配制 | 第24页 |
| 2.4.6 100 ml 0.5%戊巴比妥钠的配制 | 第24-25页 |
| 2.5 实验方法 | 第25-28页 |
| 2.5.1 MEF的分离 | 第25-26页 |
| 2.5.2 MEF的传代 | 第26页 |
| 2.5.3 MEF的冻存与复苏 | 第26-27页 |
| 2.5.4 MEF饲养层的制备 | 第27-28页 |
| 2.6 实验结果 | 第28-29页 |
| 2.6.1 MEF的形态学观察 | 第28-29页 |
| 2.7 讨论和小结 | 第29-30页 |
| 第三章 胚胎干细胞及孤雌胚胎干细胞的体外培养及多能性检测 | 第30-49页 |
| 3.1 实验细胞和动物 | 第30-31页 |
| 3.2 实验仪器和耗材 | 第31-32页 |
| 3.3 实验试剂 | 第32-33页 |
| 3.4 相关试剂的配制方法 | 第33-34页 |
| 3.4.1 100 ml ES细胞培养液 | 第33页 |
| 3.4.2 50 ml ES细胞冻存液 | 第33-34页 |
| 3.4.3 1L 50×TAE | 第34页 |
| 3.4.4 1L 4%多聚甲醛 | 第34页 |
| 3.4.5 100 ml 0.1%Triton X-100 | 第34页 |
| 3.4.6 100 ml EB分化培养液 | 第34页 |
| 3.4.7 10 ml 5%bovine serum albumin(BSA) | 第34页 |
| 3.4.8 1LPBS的配制 | 第34页 |
| 3.4.9 1L 0.1%明胶的配制 | 第34页 |
| 3.5 实验方法 | 第34-41页 |
| 3.5.1 pESCs和ESCs的体外扩增培养 | 第34-35页 |
| 3.5.2 pESCs和ESCs多能性基因的检测 | 第35-40页 |
| 3.5.3 免疫荧光检测pESCs和ESCs体外形成拟胚体 | 第40-41页 |
| 3.6 实验结果 | 第41-46页 |
| 3.6.1 pESCs和ESCs的形态学观察 | 第41页 |
| 3.6.2 PCR检测pESCs和ESCs多能性标志基因 | 第41-42页 |
| 3.6.3 qPCR检测pESCs和ESCs多能性标志基因的表达水平 | 第42-43页 |
| 3.6.4 免疫荧光检测pESCs和ESCs多能性基因 | 第43-44页 |
| 3.6.5 pESCs和ESCs体外形成的EBs形态学观察 | 第44页 |
| 3.6.6 pESCs和ESCs体外形成EBs直径的测量 | 第44-45页 |
| 3.6.7 pESCs和ESCs体外分化表达三胚层标志蛋白的检测 | 第45-46页 |
| 3.7 讨论和小结 | 第46-49页 |
| 第四章 线粒体基因表达和功能检测 | 第49-58页 |
| 4.1 实验细胞 | 第50页 |
| 4.2 实验仪器和耗材 | 第50-51页 |
| 4.3 实验试剂 | 第51页 |
| 4.4 相关试剂的配置方法 | 第51-52页 |
| 4.4.1 1LPBS的配制 | 第51-52页 |
| 4.4.2 1L 0.1%明胶的配制 | 第52页 |
| 4.4.3 1L 50×TAE配制的 | 第52页 |
| 4.5 实验方法 | 第52-54页 |
| 4.5.1 pESCs和ESCs细胞增殖能力检测 | 第52页 |
| 4.5.2 PCR检测pESCs和ESCs线粒体基因表达 | 第52页 |
| 4.5.3 qPCR检测pESCs和ESCs线粒体基因表达水平 | 第52-54页 |
| 4.6 实验结果 | 第54-56页 |
| 4.6.1 pESCs和ESCs细胞增殖能力检测 | 第54页 |
| 4.6.2 PCR检测pESCs和ESCs线粒体基因表达 | 第54-55页 |
| 4.6.3 qPCR检测pESCs和ESCs线粒体基因表达水平 | 第55-56页 |
| 4.7 讨论和小结 | 第56-58页 |
| 全文总结 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 攻读硕士期间取得的科研成果 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
