| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 豌豆遗传转化的研究 | 第11-14页 |
| 1.1.1 豌豆遗传转化的研究现状 | 第11-12页 |
| 1.1.2 关于载体法遗传转化法的研究 | 第12-13页 |
| 1.1.3 关于外源DNA直接转化法的研究 | 第13-14页 |
| 1.2 RNAi技术(RNA interference，RNAi) | 第14-17页 |
| 1.2.1 RNAi的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2.2 RNAi的生物学特性 | 第15-16页 |
| 1.2.3 RNAi技术在植物研究中的应用 | 第16-17页 |
| 1.3 类黄酮代谢途径 | 第17-18页 |
| 1.4 本研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-28页 |
| 2.1 植物材料 | 第19页 |
| 2.2 主要实验试剂 | 第19页 |
| 2.3 主要实验仪器 | 第19-20页 |
| 2.4 常用试剂和培养基 | 第20-21页 |
| 2.5 实验方法 | 第21-28页 |
| 2.5.1 质粒DNA提取 | 第21页 |
| 2.5.2 质粒的酶切 | 第21页 |
| 2.5.3 纯化后酶切片段去磷酸化 | 第21页 |
| 2.5.4 连接 | 第21-22页 |
| 2.5.5 本实验大肠杆菌感受态细胞的制备及转化[56] | 第22-23页 |
| 2.5.6 对构建好的重组质粒的筛选及鉴定 | 第23页 |
| 2.5.7 农杆菌LBA4404菌种感受态的制备及其转化过程[57] | 第23-24页 |
| 2.5.8 构建农杆菌介导下辅助抽真空的豌豆茎尖转化法： | 第24-25页 |
| 2.5.9 构建豌豆的花粉管通道转化法： | 第25页 |
| 2.5.10 筛选后植株的PCR检测 | 第25-26页 |
| 2.5.11 转基因阳性豌豆和非转基因豌豆异黄酮含量的测定[60，61] | 第26页 |
| 2.5.12 异黄酮化合物的标准曲线制备： | 第26-27页 |
| 2.5.13 转基因阳性豌豆植株和非转基因豌豆植株异黄酮化合物含量测定 | 第27-28页 |
| 第三章 结果与分析 | 第28-35页 |
| 3.1 pBR-F3H载体的构建 | 第28-29页 |
| 3.2 转化 | 第29-31页 |
| 3.2.1 农杆菌介导辅助抽真空的豌豆茎尖转化法 | 第29-31页 |
| 3.2.2 花粉管通道法转化豌豆： | 第31页 |
| 3.3 Kan的浓度筛选试验 | 第31-32页 |
| 3.4 筛选后植株的PCR检测 | 第32-33页 |
| 3.5 农杆菌介导辅助抽真空的豌豆茎尖转化法和花粉管通道法的转化率 | 第33页 |
| 3.6 阳性植株中异黄酮含量的测定及比较 | 第33-35页 |
| 3.6.1 异黄酮含量标准曲线的绘制 | 第33-34页 |
| 3.6.2 转基因阳性豌豆和非转基因豌豆异黄酮含量的测定 | 第34-35页 |
| 第四章 讨论与结论 | 第35-39页 |
| 4.1 关于p BR-F3H载体构建的讨论 | 第35页 |
| 4.2 关于转化方面的讨论 | 第35-36页 |
| 4.2.1 农杆菌介导辅助抽真空的豌豆茎尖转化法 | 第35页 |
| 4.2.2 花粉管通道法 | 第35-36页 |
| 4.3 关于豌豆的辅助抽真空茎尖转化体系和花粉管通道体系的比较 | 第36页 |
| 4.4 关于Kan浓度筛选和PCR检测方面的讨论 | 第36-37页 |
| 4.4.1 Kan浓度筛选 | 第36-37页 |
| 4.4.2 PCR检测筛选植株 | 第37页 |
| 4.5 关于转基因阳性豌豆和非转基因豌豆异黄酮含量比较的讨论 | 第37-39页 |
| 第五章 结论 | 第39-40页 |
| 5.1 pBR-F3H载体构建 | 第39页 |
| 5.2 遗传转化 | 第39页 |
| 5.3 异黄酮含量的测定 | 第39页 |
| 5.4 下一步将要进行的工作 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-45页 |
| 作者简介 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46页 |
