猪Zfx基因干扰载体筛选及性控效果的验证
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 论文中常用缩写词英汉对照表 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 综述部分 | 第14-28页 |
| 1 动物性别控制相关基因 | 第14-17页 |
| ·、SRY基因 | 第14-15页 |
| ·、SOX9和SOX3 | 第15-16页 |
| ·、DMRT | 第16页 |
| ·、DAX-1 | 第16-17页 |
| ·、FOXL2 | 第17页 |
| 2、RNA干扰技术及应用 | 第17-25页 |
| ·RNAi的发现 | 第17-18页 |
| ·RNAi的作用机制 | 第18-19页 |
| ·RNAi的作用特点 | 第19-20页 |
| ·siRNA的制备 | 第20-22页 |
| ·siRNA的导入方式 | 第22-25页 |
| 3 RNAi的应用 | 第25-27页 |
| ·RNAi在抗病毒中的应用 | 第25页 |
| ·RNAi在抗肿瘤中的应用 | 第25页 |
| ·RNAi在功能基因研究中的应用 | 第25-26页 |
| ·RNAi 在信号转导通路的应用 | 第26页 |
| ·RNAi在药物研究中的应用 | 第26页 |
| ·RNAi在疾病模型建立中的应用 | 第26-27页 |
| ·RNAi在动物繁殖中的应用 | 第27页 |
| 4 问题与展望 | 第27-28页 |
| 试验研究 | 第28-58页 |
| 试验一 猪Zfx基因的克隆 | 第28-36页 |
| 1．材料与方法 | 第28-33页 |
| ·实验材料 | 第28页 |
| ·仪器 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-33页 |
| 2.结果与分析 | 第33-35页 |
| ·睾丸组织总RNA的提取 | 第33页 |
| ·cDNA内参检测 | 第33-34页 |
| ·基因克隆结果 | 第34页 |
| ·测序结果 | 第34-35页 |
| 3.讨论 | 第35-36页 |
| ·引物设计原则 | 第35页 |
| ·载体连接 | 第35页 |
| ·序列拼接 | 第35-36页 |
| 试验二 猪Zfx基因shRNA表达载体的构建 | 第36-44页 |
| 1. 材料与方法 | 第36-39页 |
| ·材料及仪器 | 第36-37页 |
| ·方法 | 第37-39页 |
| 2． 结果与分析 | 第39-42页 |
| ·siRNA的初步筛选 | 第39-40页 |
| ·双链寡聚核苷酸（ds oligo）的退火合链 | 第40页 |
| ·重组表达载体的克隆及测序鉴定 | 第40-42页 |
| 3．讨论 | 第42-44页 |
| ·siRNA设计原则 | 第42页 |
| ·shRNA的设计 | 第42-43页 |
| ·载体连接转化 | 第43页 |
| ·载体测序 | 第43-44页 |
| 试验三 重组表达载体进行猪体外RNAi试验 | 第44-54页 |
| 1．材料与方法 | 第44-45页 |
| ·实验材料 | 第44-45页 |
| 2．方法 | 第45-50页 |
| ·重组质粒的大量提取 | 第45页 |
| ·生精细胞和支持细胞的分离及培养 | 第45-48页 |
| ·重组表达质粒转染生精细胞 | 第48-49页 |
| ·生精细胞Zfx mRNA表达检测 | 第49-50页 |
| 3. 结果与分析 | 第50-52页 |
| ·重组表达质粒转染生精细胞 | 第50页 |
| ·细胞cDNA检测结果 | 第50-51页 |
| ·shRNA在细胞中的干扰效率分析 | 第51-52页 |
| 4.讨论 | 第52-54页 |
| ·实验材料的选择 | 第52页 |
| ·生精细胞分离 | 第52-53页 |
| ·载体的干扰效果 | 第53-54页 |
| 试验四 重组表达载体进行猪体内RNAi试验 | 第54-58页 |
| 1.材料与方法 | 第54-55页 |
| ·实验材料 | 第54页 |
| ·主要试剂 | 第54页 |
| ·主要仪器 | 第54-55页 |
| ·猪体内Zfx基因RNAi试验 | 第55页 |
| 2．结果与分析 | 第55-56页 |
| ·仔猪后代数据统计 | 第55-56页 |
| ·Zfy基因mRNA表达水平 | 第56页 |
| 3.讨论 | 第56-58页 |
| ·质粒提取 | 第56-57页 |
| ·注射次数 | 第57页 |
| ·体内干扰效果分析 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 作者简介 | 第66-67页 |
| 导师评阅表 | 第67页 |
