| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 论文中常用缩写词英汉对照表 | 第15-16页 |
| 前言 | 第16-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-29页 |
| 1. 卵泡发育的过程与调控 | 第17-19页 |
| ·卵泡的概念及分类 | 第17页 |
| ·卵泡发育的过程 | 第17-18页 |
| ·卵泡发育相关生长因子的调控作用 | 第18-19页 |
| ·胰岛素生长因子 | 第18页 |
| ·表皮生长因子 | 第18页 |
| ·转化生长因子 β | 第18-19页 |
| ·颗粒细胞对卵泡发育影响 | 第19页 |
| 2. TGFβ/SMAD信号通路对卵泡发育的影响 | 第19-25页 |
| ·TGFβ/SMAD信号通路概述 | 第19-20页 |
| ·转化生长因子 β | 第20-21页 |
| ·转化生长因子 β 受体 | 第21-22页 |
| ·SMADs蛋白家族 | 第22-23页 |
| ·THBS1基因 | 第23-24页 |
| ·DCN基因 | 第24页 |
| ·LTBP1基因 | 第24-25页 |
| ·SKP1基因 | 第25页 |
| 3. TGFβ 信号通路与猪繁殖力的关系 | 第25-26页 |
| 4. 启动子的研究进展 | 第26-28页 |
| ·启动子的概念及分类 | 第26-27页 |
| ·卵巢特异性启动子 | 第27-28页 |
| 5. 本研究的目的与意义 | 第28-29页 |
| 第二章 TGFβ/SMAD信号通路基因在梅山与杜洛克猪不同级别卵泡中的表达分析 | 第29-47页 |
| 1. 材料 | 第30页 |
| ·试验动物 | 第30页 |
| ·试验样品的采集 | 第30页 |
| ·试验仪器 | 第30页 |
| 2. 方法 | 第30-34页 |
| ·卵泡组织总RNA的提取 | 第30-31页 |
| ·卵泡组织总RNA反转录 | 第31-32页 |
| ·猪SKP1基因的克隆 | 第32页 |
| ·猪SKP1基因引物设计 | 第32页 |
| ·猪SKP1基因CDS序列的克隆 | 第32页 |
| ·TGFβ/SMAD通路基因荧光定量引物设计 | 第32-33页 |
| ·q RT-PCR检测TGFβ/SMAD信号通路基因表达 | 第33-34页 |
| ·数据分析 | 第34页 |
| 3. 结果与分析 | 第34-44页 |
| ·卵泡组织总RNA的提取 | 第34-35页 |
| ·猪SKP1基因CDS序列克隆比对结果 | 第35-36页 |
| ·TGFβ/SMAD通路基因在梅山与杜洛克卵泡中的表达 | 第36-44页 |
| ·THBS1基因在卵泡中的表达分析 | 第36-37页 |
| ·LTBP1基因在卵泡中的表达分析 | 第37页 |
| ·DCN基因在卵泡中的表达分析 | 第37-38页 |
| ·TGFβ1 基因在卵泡中的表达分析 | 第38-39页 |
| ·TGFβ2 基因在卵泡中的表达分析 | 第39-40页 |
| ·TGFβ3 基因在卵泡中的表达分析 | 第40页 |
| ·TGFβRⅠ基因在卵泡中的表达分析 | 第40-41页 |
| ·TGFβRⅡ基因在卵泡中的表达分析 | 第41-42页 |
| ·SMAD2基因在卵泡中的表达分析 | 第42页 |
| ·SMAD3基因在卵泡中的表达分析 | 第42-43页 |
| ·SMAD4基因在卵泡中的表达分析 | 第43-44页 |
| ·SKP1基因在卵泡中的表达分析 | 第44页 |
| 4. 讨论 | 第44-47页 |
| 第三章 OSP-1 启动子在猪卵巢颗粒细胞中的转录活性 | 第47-65页 |
| 1. 材料 | 第47-49页 |
| ·试验动物 | 第47页 |
| ·试验样品 | 第47-48页 |
| ·试验器材 | 第48页 |
| ·试验药品 | 第48页 |
| ·试验溶液的配制 | 第48页 |
| ·试验试剂 | 第48-49页 |
| 2. 方法 | 第49-57页 |
| ·p GEM-T-OSP1与p GEM-T-Zs Green载体的构建与鉴定 | 第49-51页 |
| ·大鼠尾巴基因组DNA的提取 | 第49页 |
| ·目的片段引物设计 | 第49页 |
| ·目的片段的扩增 | 第49-50页 |
| ·目的片段的回收 | 第50页 |
| ·目的片段与T载体的连接 | 第50页 |
| ·感受态细胞的DNA转化 | 第50-51页 |
| ·目的片段菌液PCR检测 | 第51页 |
| ·p OSP1-Zs Green真核表达载体的构建与鉴定 | 第51-54页 |
| ·pc DNA3.1（+）-Zs Green载体的构建 | 第51-52页 |
| ·pc DNA3.1-Zs Green载体的鉴定 | 第52页 |
| ·p OSP1-Zs Green载体的构建 | 第52-53页 |
| ·p OSP1-Zs Green载体的鉴定 | 第53-54页 |
| ·重组质粒p OSP1-Zs Green的大量制备 | 第54页 |
| ·细胞培养 | 第54-55页 |
| ·猪卵巢颗粒细胞的原代分离 | 第54页 |
| ·猪卵巢颗粒细胞的传代培养 | 第54-55页 |
| ·肌细胞的原代分离 | 第55页 |
| ·Hela细胞系的传代培养 | 第55页 |
| ·重组质粒细胞转染 | 第55-56页 |
| ·转染细胞的总RNA提取 | 第56页 |
| ·转染细胞的RNA反转录 | 第56页 |
| ·Realtime-PCR鉴定Zs Green基因在不同细胞中的表达水平 | 第56-57页 |
| ·数据分析 | 第57页 |
| 3. 结果与分析 | 第57-63页 |
| ·p GEM-T-OSP1与p GEM-T-Zs Green载体的构建与鉴定 | 第57-59页 |
| ·大鼠尾巴基因组DNA的提取 | 第57-58页 |
| ·目的片段的扩增 | 第58页 |
| ·目的片段菌液PCR检测 | 第58-59页 |
| ·p OSP1-Zs Green真核表达载体的构建与鉴定 | 第59-60页 |
| ·pc DNA3.1（+）-Zs Green载体的构建 | 第59页 |
| ·p OSP1-Zs Green载体的构建 | 第59页 |
| ·p OSP1-Zs Green载体的鉴定 | 第59-60页 |
| ·细胞培养 | 第60-61页 |
| ·猪卵巢颗粒细胞的原代培养 | 第60页 |
| ·肌细胞的原代培养 | 第60-61页 |
| ·Hela细胞的传代培养 | 第61页 |
| ·重组质粒细胞转染 | 第61-62页 |
| ·转染细胞的总RNA提取 | 第62页 |
| ·转染细胞的RNA反转录 | 第62-63页 |
| ·Zs Green基因在不同细胞中的表达分析 | 第63页 |
| 4. 讨论 | 第63-65页 |
| 第四章 TGFβRⅠ和TGFβ1 基因对猪卵巢颗粒细胞的影响 | 第65-81页 |
| 1. 材料 | 第65-66页 |
| 2. 方法 | 第66-72页 |
| ·p CMV-TGFβRⅠ-sh RNA干扰载体的构建 | 第66-68页 |
| ·干扰载体选择及sh RNA干扰片段的设计 | 第66-67页 |
| ·RNAi片段合链 | 第67页 |
| ·载体PLL3.7 线性化 | 第67页 |
| ·sh RNA与线性化载体的连接 | 第67-68页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第68页 |
| ·阳性克隆测序 | 第68页 |
| ·p OSP1-TGFβRⅠ-sh RNA干扰载体的构建 | 第68-69页 |
| ·质粒p CMV-TGFβRⅠ-sh RNA及p OSP1-TGFβRⅠ-sh RNA的大量制备 | 第69页 |
| ·TGFβ1 最佳作用剂量的选择 | 第69-70页 |
| ·TGFβ1 的配制 | 第69页 |
| ·预实验调整TGFβ1 作用剂量 | 第69-70页 |
| ·猪卵巢颗粒细胞的原代分离及传代培养 | 第70页 |
| ·重组质粒转染猪卵巢颗粒细胞 | 第70页 |
| ·转染细胞的总RNA提取 | 第70页 |
| ·转染细胞的RNA反转录 | 第70页 |
| ·TGFβRⅠ基因在卵巢颗粒细胞中m RNA表达水平的检测 | 第70-71页 |
| ·数据分析 | 第71页 |
| ·MTT法检测不同处理对细胞增殖的影响 | 第71-72页 |
| ·MTT溶液的配制 | 第71-72页 |
| ·MTT法检测细胞增殖 | 第72页 |
| ·流式细胞仪检测不同处理对细胞凋亡的影响 | 第72页 |
| 3. 结果与分析 | 第72-78页 |
| ·双链寡核苷酸的合链 | 第72-73页 |
| ·载体PLL3.7 线性化 | 第73页 |
| ·干扰载体的测序 | 第73-74页 |
| ·重组质粒转染猪卵巢颗粒细胞 | 第74-76页 |
| ·实时荧光定量分析干扰载体干扰效率 | 第76-77页 |
| ·不同处理对猪卵巢颗粒细胞细胞增殖的影响 | 第77页 |
| ·不同处理对猪卵巢颗粒细胞细胞凋亡的影响 | 第77-78页 |
| 4. 讨论 | 第78-81页 |
| 第五章 TGFβRⅠ和TGFβ1 基因多态性与猪产活仔数关联性分析 | 第81-92页 |
| 1. 材料 | 第81页 |
| 2. 方法 | 第81-85页 |
| ·PCR-SSCP引物设计 | 第81-82页 |
| ·猪耳组织DNA的提取 | 第82页 |
| ·目的片段的扩增 | 第82-83页 |
| ·SSCP检测 | 第83-84页 |
| ·PAGE凝胶制备与电泳装置安装 | 第83页 |
| ·样品变性与上样 | 第83-84页 |
| ·电泳 | 第84页 |
| ·银染显影 | 第84页 |
| ·PCR产物的回收纯化 | 第84页 |
| ·目的片段与T载体的连接 | 第84-85页 |
| ·感受态细胞的DNA转化 | 第85页 |
| ·目的片段菌液PCR检测 | 第85页 |
| ·数据统计分析 | 第85页 |
| 3. 结果与分析 | 第85-90页 |
| ·猪耳组织DNA的提取 | 第85-86页 |
| ·TGFβRⅠ基因多态性分析 | 第86-88页 |
| ·TGFβRⅠ基因PCR扩增 | 第86页 |
| ·TGFβRⅠ基因第7内含子PCR-SSCP多态性检测 | 第86-87页 |
| ·TGFβRⅠ基因突变个体克隆测序结果 | 第87页 |
| ·不同猪种TGFβRⅠ基因的基因频率和基因型频率分析 | 第87页 |
| ·TGFβRⅠ不同基因型对猪产活仔数的影响 | 第87-88页 |
| ·TGFβ1 基因多态性分析 | 第88-90页 |
| ·TGFβ1 基因PCR扩增 | 第88页 |
| ·TGFβ1 基因第6内含子PCR-SSCP多态性检测 | 第88-89页 |
| ·TGFβ1 基因突变个体克隆测序结果 | 第89页 |
| ·不同猪种TGFβ1 基因的基因频率和基因型频率分析 | 第89页 |
| ·TGFβ1 不同基因型对猪产活仔数的影响 | 第89-90页 |
| 4. 讨论 | 第90-92页 |
| ·猪TGFβRⅠ基因内含子7多态性与产活仔数的关系 | 第90页 |
| ·猪TGFβ1 基因内含子6多态性与产活仔数的关系 | 第90-92页 |
| 全文结论 | 第92-93页 |
| 创新点 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 作者简介 | 第104-105页 |
| 导师评阅表 | 第105页 |
