| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 英文缩略表 | 第10-12页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-24页 |
| ·绵羊繁殖调控研究进展 | 第13-18页 |
| ·绵羊的发情及发情周期 | 第13页 |
| ·绵羊的季节性繁殖 | 第13-14页 |
| ·绵羊季节性繁殖数量性状位点（QTL）研究进展 | 第14-15页 |
| ·绵羊季节性繁殖调控相关基因研究进展 | 第15-18页 |
| ·KISS-1 基因研究进展 | 第15页 |
| ·Otx-2 基因研究进展 | 第15-16页 |
| ·GnRH基因研究进展 | 第16页 |
| ·MT1基因研究进展 | 第16-17页 |
| ·KISS-1、Otx-2、GnRH和MT1基因相互关系 | 第17-18页 |
| ·动物下丘脑体外培养研究进展 | 第18-19页 |
| ·实时荧光定量和双荧光报告基因系统的原理及其在基因启动子功能研究中的应用 | 第19-22页 |
| ·实时荧光定量PCR技术原理 | 第19-21页 |
| ·双荧光素酶报告基因系统的原理 | 第21-22页 |
| ·实时荧光定量和双荧光素酶报告基因系统在基因启动子功能研究中的应用 | 第22页 |
| ·本项目研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 绵羊下丘脑神经细胞的原代培养 | 第24-34页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·实验动物 | 第24页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-27页 |
| ·下丘脑组织的分离 | 第25页 |
| ·下丘脑神经细胞的原代培养 | 第25页 |
| ·下丘脑神经细胞的初步鉴定 | 第25-27页 |
| ·结果与分析 | 第27-31页 |
| ·实验胎羊的选择 | 第27-28页 |
| ·下丘脑组织的分离 | 第28页 |
| ·原代培养下丘脑神经细胞的形态与发育 | 第28-30页 |
| ·下丘脑神经元细胞的鉴定 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-32页 |
| ·结论 | 第32-34页 |
| 第三章 Gn RH基因启动子区的克隆及荧光素酶报告载体的构建 | 第34-43页 |
| ·实验材料 | 第34-36页 |
| ·DNA样品 | 第34页 |
| ·菌株及载体 | 第34页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第34-36页 |
| ·实验方法 | 第36-39页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第36页 |
| ·目的片段引物设计与扩增 | 第36-37页 |
| ·琼脂糖凝胶回收 | 第37页 |
| ·PCR产物的克隆、转化与鉴定 | 第37-38页 |
| ·双酶切目的片段及pGL3-Basic Vector载体 | 第38页 |
| ·表达载体与目的片段的连接、转化与鉴定 | 第38页 |
| ·质粒的小量提取 | 第38-39页 |
| ·双酶切鉴定重组质粒 | 第39页 |
| ·结果与分析 | 第39-42页 |
| ·目的片段的扩增 | 第39-40页 |
| ·目的片段的测序鉴定 | 第40页 |
| ·载体的构建 | 第40-41页 |
| ·载体的双酶切鉴定 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42页 |
| ·结论 | 第42-43页 |
| 第四章 绵羊GnRH基因启动子功能分析 | 第43-50页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·实验样品 | 第43页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-45页 |
| ·质粒的大量提取 | 第43-44页 |
| ·细胞转染 | 第44-45页 |
| ·双荧光检测 | 第45页 |
| ·序列分析 | 第45页 |
| ·数据处理 | 第45页 |
| ·结果与分析 | 第45-48页 |
| ·GnRH基因启动子区荧光素酶活性检测结果 | 第45-46页 |
| ·GnRH基因启动子区的生物信息学分析结果 | 第46-48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| ·结论 | 第49-50页 |
| 第五章 KISS-1 基因与GnRH基因表达关系的研究 | 第50-59页 |
| ·实验材料 | 第50-51页 |
| ·cDNA样品 | 第50页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第50-51页 |
| ·实验方法 | 第51-53页 |
| ·nM的kisspeptin作用下丘脑神经细胞 | 第51页 |
| ·总RNA的提取与反转录 | 第51页 |
| ·引物的设计与目的片段扩增 | 第51-52页 |
| ·琼脂糖凝胶回收 | 第52页 |
| ·PCR产物的克隆、转化与鉴定 | 第52页 |
| ·KISS-1 及Otx-2、GnRH、MT1基因的组织表达谱分析 | 第52页 |
| ·实时荧光定量PCR分析 | 第52-53页 |
| ·数据分析 | 第53页 |
| ·结果与分析 | 第53-56页 |
| ·KISS-1 及Otx-2、GnRH、MT1基因部分CDS序列克隆 | 第53页 |
| ·KISS-1 及Otx-2、GnRH、MT1基因的组织表达谱 | 第53-54页 |
| ·繁殖期和繁殖间期KISS-1 及Otx-2、GnRH、MT1基因在日间、夜间下丘脑中的表达 | 第54-55页 |
| ·kisspeptin对Otx-2、GnRH和MT1基因表达量的影响 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| ·结论 | 第58-59页 |
| 第六章 结论与展望 | 第59-60页 |
| ·全文结论 | 第59页 |
| ·研究展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简介 | 第71-72页 |
| 附件 | 第72页 |
