| 中文摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-30页 |
| ·纤维素燃料乙醇概述 | 第9-15页 |
| ·燃料乙醇发展现状 | 第9-11页 |
| ·纤维素燃料乙醇发展现状 | 第11-13页 |
| ·国内纤维素燃料乙醇发展现状 | 第13-14页 |
| ·国外纤维素燃料乙醇发展现状 | 第14-15页 |
| ·纤维素酶研究概述 | 第15-18页 |
| ·纤维素酶系 | 第15-16页 |
| ·生产纤维素酶的微生物 | 第16-17页 |
| ·纤维素酶系的协同作用 | 第17-18页 |
| ·内切葡聚糖酶的研究概况 | 第18-20页 |
| ·内切葡聚糖酶简介 | 第18页 |
| ·棘孢曲霉内切葡聚糖酶 I 基因的研究进展 | 第18-19页 |
| ·瑞氏木霉内切葡聚糖酶 II 基因的研究进展 | 第19-20页 |
| ·酿酒酵母中表达内切葡聚糖酶基因和共表达纤维素酶基因的研究概况 | 第20-28页 |
| ·酿酒酵母表达系统 | 第21-23页 |
| ·酿酒酵母中表达外源内切葡聚糖酶基因的研究进展 | 第23-25页 |
| ·酿酒酵母中共表达纤维素酶基因的研究进展 | 第25-28页 |
| ·酿酒酵母表达纤维素酶基因、利用纤维素底物产醇中存在的问题 | 第28页 |
| ·本课题的研究目的、内容和技术路线 | 第28-30页 |
| ·研究目的 | 第28页 |
| ·研究内容 | 第28-29页 |
| ·技术路线 | 第29-30页 |
| 第二章 材料与方法 | 第30-51页 |
| ·实验材料 | 第30-37页 |
| ·质粒、菌株与引物 | 第30-33页 |
| ·主要实验仪器 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| ·培养基 | 第34-35页 |
| ·主要溶液 | 第35-37页 |
| ·实验方法 | 第37-51页 |
| ·不同微生物的培养 | 第37页 |
| ·感受态细胞的制备与转化 | 第37-39页 |
| ·棘孢曲霉及瑞氏木霉基因组 DNA 的提取 | 第39页 |
| ·大肠杆菌质粒提取 | 第39-41页 |
| ·酿酒酵母染色体的快速分离 | 第41页 |
| ·PCR 扩增反应 | 第41-43页 |
| ·DNA 酶切反应 | 第43页 |
| ·DNA 连接反应 | 第43-44页 |
| ·DNA 的乙醇沉淀纯化 | 第44页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第44页 |
| ·DNA 片段琼脂糖凝胶回收 | 第44-45页 |
| ·DNA 片段脱磷酸根处理 | 第45页 |
| ·SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶的制备和电泳 | 第45-46页 |
| ·刚果红染色法定性鉴定表达 EG 的酿酒酵母转化子 | 第46页 |
| ·底物利用筛选共表达 EG 和 BGL 的酿酒酵母转化子 | 第46-47页 |
| ·内切葡聚糖酶酶活测定 | 第47-48页 |
| ·β-葡萄糖苷酶酶活测定 | 第48-49页 |
| ·粘度测定 | 第49页 |
| ·生长发酵评价 | 第49-50页 |
| ·高效液相色谱（HPLC） | 第50-51页 |
| 第三章 内切葡聚糖酶基因在酿酒酵母中的表达研究 | 第51-70页 |
| ·棘孢曲霉内切葡聚糖酶 I 基因的克隆、表达盒构建和四个可复制重组质粒构建 | 第52-58页 |
| ·棘孢曲霉内切葡聚糖酶基因 I 的克隆 | 第52-54页 |
| ·棘孢曲霉内切葡聚糖酶基因 I 的表达盒构建 | 第54-55页 |
| ·可复制重组质粒 YCplac33-Aa EGI’、 YCplac33-Aa EGI 、YEplac195-Aa EGI’和 YEplac195-Aa EGI 的构建 | 第55-58页 |
| ·瑞氏木霉内切葡聚糖酶基因 II 表达盒构建和四个可复制重组质粒构建 | 第58-61页 |
| ·瑞氏木霉内切葡聚糖酶基因 II 的表达盒构建 | 第58-59页 |
| ·可复制重组质粒 YCplac33-Tr EGII’、YCplac33-Tr EGII、YEplac195-Tr EGII’和 YEplac195-Tr EGII 的构建 | 第59-61页 |
| ·酿酒酵母工程菌株的构建 | 第61-63页 |
| ·酿酒酵母工程菌株的分析评价 | 第63-68页 |
| ·重组菌株在 CMG-URA液体培养基中的好氧生长 | 第63-64页 |
| ·重组菌株的酶活测定 | 第64-65页 |
| ·蛋白电泳 | 第65-66页 |
| ·重组酵母表达的重组内切葡聚糖酶的最适作用 pH 和最适作用温度 | 第66-67页 |
| ·重组酿酒酵母菌株降解 CMC | 第67-68页 |
| ·本章小结和讨论 | 第68-70页 |
| ·小结 | 第68页 |
| ·讨论 | 第68-70页 |
| 第四章 内切葡聚糖酶基因和β-葡萄糖苷酶基因在酿酒酵母中的共表达研究 | 第70-78页 |
| ·整合质粒载体的构建 | 第70-73页 |
| ·带筛选标记基因的整合质粒载体 pGEM-Teasy- seq-LEU 的构建 | 第70-71页 |
| ·带内切葡聚糖酶基因的整合质粒载体的构建 | 第71-73页 |
| ·共表达重组酵母菌株构建 | 第73-74页 |
| ·转化及初步筛选鉴定 | 第73-74页 |
| ·转化子的进一步鉴定 | 第74页 |
| ·共表达重组酵母菌株的分析评价 | 第74-76页 |
| ·共表达菌株的酶活测定 | 第74-75页 |
| ·共表达菌株在 YP-CMC 液体培养基中的厌氧产醇状况 | 第75-76页 |
| ·本章小结和讨论 | 第76-78页 |
| ·小结 | 第76页 |
| ·讨论 | 第76-78页 |
| 第五章 结论与展望 | 第78-80页 |
| ·结论 | 第78-79页 |
| ·展望 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-87页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第87-88页 |
| 附录 1 符号 | 第88-89页 |
| 附录 2 几个质粒图谱 | 第89-90页 |
| 附录 3 棘孢曲霉 EGI 基因克隆片段序列（JQ581513） | 第90-91页 |
| 附录 4 标准曲线 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
