| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 1 绪论 | 第11-30页 |
| ·研究背景及意义 | 第11-12页 |
| ·灿烂弧菌简介 | 第12-14页 |
| ·灿烂弧菌生物学性状及致病性 | 第12-13页 |
| ·灿烂弧菌的毒力因子 | 第13-14页 |
| ·灿烂弧菌检测方法研究现状 | 第14-16页 |
| ·Dot-ELISA | 第14页 |
| ·间接荧光抗体快速检测法(IFAT) | 第14-15页 |
| ·PCR法检测 | 第15-16页 |
| ·核酸探针检测技术 | 第16页 |
| ·环介导等温扩增(LAMP)技术概述 | 第16-29页 |
| ·LAMP的技术特点 | 第17-18页 |
| ·LAMP方法的引物设计 | 第18-19页 |
| ·LAMP的反应原理 | 第19-22页 |
| ·LAMP反应产物的检测方法 | 第22-24页 |
| ·LAMP方法的研究应用实例 | 第24-29页 |
| ·研究内容 | 第29-30页 |
| 2 材料与方法 | 第30-46页 |
| ·试验材料 | 第30-34页 |
| ·试验菌株 | 第30-31页 |
| ·设备与软件 | 第31-32页 |
| ·主要试剂 | 第32-33页 |
| ·培养基的配制 | 第33页 |
| ·主要生化试剂的配方 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-37页 |
| ·实验菌株的保藏、活化和培养 | 第34-35页 |
| ·稀释平板法菌落计数 | 第35页 |
| ·细菌基因组DNA的提取 | 第35-37页 |
| ·灿烂弧菌的鉴定 | 第37-38页 |
| ·细菌的显微镜观察 | 第37页 |
| ·细菌的生理生化指标鉴定 | 第37页 |
| ·灿烂弧菌的16S rDNA检测 | 第37-38页 |
| ·灿烂弧菌致病性分析 | 第38页 |
| ·引物设计和操作程序 | 第38-39页 |
| ·灿烂弧菌潜在毒力相关基因的筛选 | 第38页 |
| ·LAMP引物设计 | 第38-39页 |
| ·LAMP和PCR的操作程序 | 第39页 |
| ·反应引物的特异性分析 | 第39-40页 |
| ·LAMP法检测引物特异性 | 第39-40页 |
| ·PCR法检测引物特异性 | 第40页 |
| ·LAMP反应条件的优化 | 第40-43页 |
| ·dNTP浓度的优化 | 第40-41页 |
| ·Betaine浓度的优化 | 第41页 |
| ·Mg~(2+)浓度的优化 | 第41-42页 |
| ·反应时间的优化 | 第42-43页 |
| ·检测灿烂弧菌的灵敏度测定 | 第43-44页 |
| ·LAMP法检测灿烂弧菌基因组DNA的灵敏度测定 | 第43页 |
| ·常规PCR法检测灿烂弧菌基因组DNA的灵敏度测定 | 第43页 |
| ·LAMP法检测灿烂弧菌纯培养的灵敏度测定 | 第43页 |
| ·常规PCR法检测灿烂弧菌纯培养的灵敏度测定 | 第43-44页 |
| ·LAMP的扩增产物分析 | 第44-46页 |
| ·LAMP的扩增产物的可视结果分析 | 第44页 |
| ·LAMP扩增产物的琼脂糖凝胶电泳分析 | 第44页 |
| ·LAMP扩增产物的SYBR Green Ⅰ荧光分析 | 第44页 |
| ·LAMP扩增产物的新型荧光指示剂Calcein-Mn~(2+)分析 | 第44-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-67页 |
| ·灿烂弧菌的培养、鉴定及基因组DNA的提取 | 第46-53页 |
| ·灿烂弧菌培养及显微镜观察 | 第46-47页 |
| ·灿烂弧菌的生理生化指标鉴定 | 第47-50页 |
| ·灿烂弧菌的16S rDNA分析 | 第50-51页 |
| ·灿烂弧菌的致病性实验结果 | 第51-52页 |
| ·细菌基因组DNA的提取结果 | 第52-53页 |
| ·灿烂弧菌潜在毒力相关基因的筛选和引物设计 | 第53-55页 |
| ·灿烂弧菌潜在毒力相关基因的筛选 | 第53-54页 |
| ·LAMP引物设计 | 第54-55页 |
| ·引物特异性分析 | 第55-56页 |
| ·LAMP法检测引物特异性 | 第55页 |
| ·PCR法检测引物特异性 | 第55-56页 |
| ·LAMP反应条件的优化 | 第56-59页 |
| ·dNTP浓度对LAMP反应的影响 | 第56页 |
| ·Betaine浓度对LAMP反应的影响 | 第56-57页 |
| ·Mg~(2+)浓度对LAMP反应的影响 | 第57-58页 |
| ·反应时间对LAMP反应的影响 | 第58-59页 |
| ·LAMP反应的最佳反应体系 | 第59页 |
| ·检测灿烂弧菌的灵敏度研究 | 第59-63页 |
| ·LAMP法检测灿烂弧菌基因组DNA的灵敏度 | 第59-61页 |
| ·常规PCR法检测灿烂弧菌基因组DNA的灵敏度 | 第61页 |
| ·LAMP法检测灿烂弧菌纯培养的灵敏度 | 第61-63页 |
| ·常规PCR法检测灿烂弧菌纯培养的灵敏度 | 第63页 |
| ·LAMP扩增产物分析 | 第63-67页 |
| ·LAMP扩增产物的可视化分析 | 第63-64页 |
| ·LAMP扩增产物的凝胶电泳分析 | 第64-65页 |
| ·LAMP扩增产物的SYBR Green Ⅰ荧光分析 | 第65-66页 |
| ·LAMP扩增产物的新型荧光指示剂Calcein-Mn~(2+)分析 | 第66-67页 |
| 4 讨论 | 第67-74页 |
| ·环介导等温扩增(LAMP)法检测灿烂弧菌的方法学评价 | 第67-68页 |
| ·环介导等温扩增(LAMP)法的目的基因筛选及引物设计策略 | 第68-69页 |
| ·环介导等温扩增(LAMP)法的条件优化 | 第69页 |
| ·环介导等温扩增(LAMP)法的模板DNA的获取 | 第69-70页 |
| ·环介导等温扩增(LAMP)法的结果检测 | 第70页 |
| ·环介导等温扩增(LAMP)法检测灿烂弧菌的灵敏度比较 | 第70页 |
| ·环介导等温扩增(LAMP)法的注意事项 | 第70-74页 |
| 5 结论及展望 | 第74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第81-83页 |
