| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 目录 | 第12-20页 |
| 符号说明 | 第20-22页 |
| 第一章 绪论 | 第22-65页 |
| 第一节 多不饱和脂肪酸概述 | 第22-28页 |
| ·多不饱和脂肪酸的命名和主要类型 | 第22-23页 |
| ·PUFAs 的来源 | 第23-25页 |
| ·PUFAs 的生理功能 | 第25-26页 |
| ·PUFAs 的合成途径 | 第26-28页 |
| ·植物中 PUFAs 的生物合成 | 第26页 |
| ·动物中 PUFAs 的生物合成 | 第26-28页 |
| ·微生物中 PUFAs 的生物合成 | 第28页 |
| 第二节 脂肪酸脱氢酶和脂肪酸延长酶的研究进展 | 第28-40页 |
| ·脂肪酸脱氢酶的研究进展 | 第28-35页 |
| ·脂肪酸脱氢酶的分类和基本特征 | 第28-29页 |
| ·植物中的 PUFAs 脱氢酶 | 第29-30页 |
| ·动物中的 PUFAs 脱氢酶 | 第30-33页 |
| ·低等真核生物中的 PUFAs 脱氢酶 | 第33-35页 |
| ·脂肪酸延长酶的研究进展 | 第35-40页 |
| ·脂肪酸延长酶系统的组成及延长过程 | 第36-37页 |
| ·哺乳动物体内的延长酶 | 第37页 |
| ·植物体内的延长酶 | 第37-38页 |
| ·微生物体内的延长酶 | 第38-40页 |
| 第三节 PUFAs 代谢工程的研究进展 | 第40-46页 |
| ·用微生物生产 PUFAs 的代谢工程 | 第40-42页 |
| ·用植物生产 PUFAs 的代谢工程 | 第42-45页 |
| ·转基因植物生产 GLA 和 SDA | 第42-43页 |
| ·转基因植物生产 VLC-PUFAs | 第43-45页 |
| ·用转基因油料作物生产 PUFAs 的前景 | 第45-46页 |
| 第四节 开发无选择标记的转基因植物的研究进展 | 第46-52页 |
| ·转基因植物概况 | 第46页 |
| ·开发无选择标记的转基因作物的意义 | 第46-48页 |
| ·开发无选择标记的转基因作物的策略 | 第48-52页 |
| ·共转化 | 第48页 |
| ·转座子介导方法 | 第48-50页 |
| ·位点特异性重组 | 第50-52页 |
| 第五节 种子特异性启动子的研究进展 | 第52-60页 |
| ·已经克隆的种子特异性启动子 | 第52-54页 |
| ·种子特异性启动子序列结构特点 | 第54-57页 |
| ·与种子特异性启动子有关的反式作用因子 | 第57-58页 |
| ·种子特异性启动子功能的研究方法 | 第58-60页 |
| ·研究方法 | 第58-59页 |
| ·种子特异性启动子功能研究的报告基因 | 第59页 |
| ·种子特异性启动子功能研究的受体植物 | 第59-60页 |
| ·种子特异性启动子的应用展望 | 第60页 |
| 第六节 选题依据和技术路线 | 第60-65页 |
| ·选题依据 | 第60-62页 |
| ·工作背景 | 第62-63页 |
| ·主要研究内容 | 第63页 |
| ·技术路线 | 第63-65页 |
| 第二章 Δ9 延长酶、Δ8 脱氢酶和Δ5 脱氢酶基因的克隆、序列分析及功能鉴定 | 第65-116页 |
| 第一节 实验材料 | 第65-68页 |
| ·菌株 | 第65页 |
| ·质粒 | 第65-66页 |
| ·引物 | 第66-67页 |
| ·主要试剂 | 第67页 |
| ·主要仪器 | 第67-68页 |
| 第二节 实验方法 | 第68-87页 |
| ·培养基配制 | 第68-69页 |
| ·试剂的配制 | 第69-70页 |
| ·藻类基因组 DNA 的提取 (CTAB 法) | 第70-71页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第71页 |
| ·DNA 和 RNA 的定量分析 | 第71页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第71-72页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第72页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第72-73页 |
| ·酿酒酵母感受态细胞的制备及转化 | 第73-75页 |
| ·Δ9 延长酶基因 IgASE2 的克隆 | 第75-80页 |
| ·球等鞭金藻 H29 的培养 | 第75页 |
| ·球等鞭金藻 H29 总 RNA 的提取及反转录反应 | 第75页 |
| ·IgASE2 基因核心区的扩增与纯化 | 第75-76页 |
| ·重组质粒 pT-ASEC 的构建 | 第76页 |
| ·大肠杆菌的转化与筛选 | 第76页 |
| ·IgASE2 基因 5’区序列的克隆 | 第76-78页 |
| ·IgASE2 基因 3’区序列的克隆 | 第78-79页 |
| ·全长 IgASE2 基因的扩增及序列分析 | 第79-80页 |
| ·IgASE2 基因的功能分析 | 第80-83页 |
| ·表达载体 pYASE 的构建 | 第80-81页 |
| ·酿酒酵母工程菌的构建与筛选 | 第81页 |
| ·酿酒酵母工程菌的诱导表达 | 第81-82页 |
| ·酿酒酵母工程菌总脂肪酸的提取与甲酯化 | 第82页 |
| ·总脂肪酸的检测与分析 | 第82-83页 |
| ·Δ8 脱氢酶基因 efd 2 克隆 | 第83-84页 |
| ·小眼虫藻培养 | 第83页 |
| ·小眼虫藻总 RNA 的提取及反转录反应 | 第83页 |
| ·efd2 基因 ORF 的扩增与纯化 | 第83-84页 |
| ·重组质粒 pT-EFD 的构建与鉴定 | 第84页 |
| ·efd2 基因 ORF 的序列分析 | 第84页 |
| ·efd2 基因的功能分析 | 第84-86页 |
| ·表达载体 pYEFD 的构建 | 第84-85页 |
| ·酿酒酵母工程菌的构建与筛选 | 第85页 |
| ·酿酒酵母工程菌的诱导表达 | 第85页 |
| ·酿酒酵母工程菌总脂肪酸的提取与甲酯化 | 第85-86页 |
| ·总脂肪酸的检测与分析 | 第86页 |
| ·Δ5 脱氢酶基因 ptd5 克隆与功能鉴定 | 第86-87页 |
| ·三角褐指藻培养 | 第86页 |
| ·ptd5 基因的克隆与表达载体 pYPTD5 的构建 | 第86-87页 |
| ·酿酒酵母工程菌的构建、筛选与诱导表达 | 第87页 |
| ·酿酒酵母工程菌总脂肪酸的提取与甲酯化 | 第87页 |
| ·总脂肪酸的检测与分析 | 第87页 |
| 第三节 结果与分析 | 第87-109页 |
| ·IgASE2 基因的克隆与序列分析 | 第87-99页 |
| ·IgASE2 基因的克隆策略 | 第87-88页 |
| ·球等鞭金藻总 RNA 的提取 | 第88页 |
| ·IgASE2 基因核心区序列的克隆 | 第88-89页 |
| ·IgASE2 基因 5’区序列的克隆 | 第89-90页 |
| ·IgASE2 基因 3’区序列的克隆 | 第90-93页 |
| ·全长 IgASE2 基因的克隆 | 第93-94页 |
| ·IgASE2 基因的序列分析 | 第94-97页 |
| ·IgASE2 基因的系统进化分析 | 第97-99页 |
| ·IgASE2 基因的功能分析 | 第99-102页 |
| ·IgASE2 基因酿酒酵母表达载体 pYASE 的构建 | 第99页 |
| ·酿酒酵母工程菌 YASE9 的构建与诱导表达 | 第99-100页 |
| ·通过 GC 和 GC-MS 鉴定 IgASE2 的功能 | 第100-102页 |
| ·efd2 基因的克隆与功能分析 | 第102-106页 |
| ·小眼虫藻 H277 总 RNA 的提取 | 第102-103页 |
| ·efd2 基因 ORF 的克隆 | 第103页 |
| ·efd2 基因的序列分析 | 第103页 |
| ·efd2 基因表达载体 pYEFD 的构建与鉴定 | 第103-105页 |
| ·efd2 基因的诱导表达与功能分析 | 第105-106页 |
| ·三角褐指藻 ptd5 基因的克隆与功能鉴定 | 第106-109页 |
| ·三角褐指藻 RNA 的提取 | 第106页 |
| ·ptd5 基因 ORF 的克隆与序列分析 | 第106-107页 |
| ·表达载体 pYPTD5 的构建与鉴定 | 第107-108页 |
| ·ptd5 基因的诱导表达与功能验证 | 第108-109页 |
| 第四节 讨论 | 第109-114页 |
| ·IgASE2 基因的克隆与序列分析 | 第109-112页 |
| ·IgASE2 基因的功能分析 | 第112页 |
| ·efd2 基因的克隆与功能分析 | 第112-113页 |
| ·ptd5 基因的克隆与功能鉴定 | 第113-114页 |
| 第五节 小结 | 第114-116页 |
| 第三章 ARA 和 EPA Δ８合成途径的构建 | 第116-151页 |
| 第一节 实验材料 | 第116-119页 |
| ·菌株和大豆种子 | 第116页 |
| ·质粒 | 第116-117页 |
| ·引物 | 第117-118页 |
| ·主要试剂 | 第118-119页 |
| ·主要仪器 | 第119页 |
| 第二节 实验方法 | 第119-128页 |
| ·培养基配制 | 第119-120页 |
| ·试剂的配制 | 第120-121页 |
| ·质粒 DNA 提取 | 第121页 |
| ·大豆基因组 DNA 提取 (异丙醇法) | 第121页 |
| ·PCR 反应体系 | 第121-122页 |
| ·酶切体系 | 第122-123页 |
| ·酶切片段去磷酸化 | 第123页 |
| ·DNA 连接体系 | 第123页 |
| ·大肠杆菌的转化和筛选 | 第123页 |
| ·酿酒酵母的转化和筛选 | 第123页 |
| ·脂肪酸的提取与分析 | 第123-124页 |
| ·Real-time PCR 方法 | 第124-126页 |
| ·根瘤农杆菌的转化 | 第126页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第126页 |
| ·农杆菌的转化与鉴定 | 第126页 |
| ·大豆的转化 | 第126-127页 |
| ·重组农杆菌的活化 | 第126-127页 |
| ·大豆子叶节的获得 | 第127页 |
| ·大豆子叶节的转化及再生培养 | 第127页 |
| ·β-雌二醇诱导方法 | 第127页 |
| ·转基因植株的 PCR 检测 | 第127-128页 |
| 第三节 结果与分析 | 第128-142页 |
| ·在酿酒酵母中构建 ARA 和 EPA 合成的Δ8 途径 | 第128-134页 |
| ·酿酒酵母共表达载体 pYAE5 的构建策略 | 第128-129页 |
| ·酿酒酵母表达载体 pYAE 的构建 | 第129页 |
| ·酿酒酵母表达载体 pYAE5 的构建 | 第129-130页 |
| ·酿酒酵母工程菌株 YAE985 的诱导表达与 PUFAs 分析 | 第130-133页 |
| ·酿酒酵母工程菌 YAE985 的遗传稳定性分析 | 第133-134页 |
| ·在大豆中中构建 ARA 和 EPA 合成的Δ8 途径 | 第134-142页 |
| ·表达载体 pXB 的构建 | 第134-135页 |
| ·无选择标记的共表达载体 pX9AE5 的构建 | 第135-138页 |
| ·转基因大豆的组织培养 | 第138-139页 |
| ·转基因大豆的筛选和鉴定 | 第139-140页 |
| ·转基因大豆选标记转基因的删除和鉴定 | 第140-141页 |
| ·无筛选标记转基因大豆的脂肪酸分析 | 第141-142页 |
| 第四节 讨论 | 第142-149页 |
| ·产 ARA 和 EPA 酿酒酵母工程菌的构建与 PUFAs 分析 | 第142-144页 |
| ·无筛选标记的共表达载体 pX9AE5 的构建 | 第144-146页 |
| ·无筛选标记转基因大豆的遗传转化与筛选 | 第146-148页 |
| ·无筛选标记转基因大豆的 PUFAs 分析 | 第148-149页 |
| 第五节 小结 | 第149-151页 |
| 第四章 大豆种子特异性启动子 BCSP952 的改造 | 第151-177页 |
| 第一节 实验材料 | 第151-154页 |
| ·菌株和拟南芥种子 | 第151页 |
| ·质粒 | 第151-152页 |
| ·引物 | 第152-153页 |
| ·主要试剂 | 第153页 |
| ·主要仪器 | 第153-154页 |
| 第二节 实验方法 | 第154-159页 |
| ·培养基配制 | 第154页 |
| ·试剂的配制 | 第154-155页 |
| ·质粒 DNA 提取 | 第155页 |
| ·拟南芥基因组 DNA 提取 | 第155-156页 |
| ·PCR 反应 | 第156页 |
| ·重叠 PCR | 第156页 |
| ·酶切反应 | 第156页 |
| ·DNA 连接反应 | 第156页 |
| ·大肠杆菌的转化和筛选 | 第156页 |
| ·根瘤农杆菌的转化 | 第156页 |
| ·拟南芥的转化：花蕾转化法 | 第156-157页 |
| ·重组农杆菌的活化 | 第156-157页 |
| ·拟南芥的培养 | 第157页 |
| ·拟南芥的转化及转化子筛选 | 第157页 |
| ·转基因拟南芥的 GUS 酶活性分析 | 第157-158页 |
| ·组织化学检测 (Histochemical analysis) | 第157-158页 |
| ·荧光光度检测 (Fluorometric analysis) | 第158页 |
| ·Southern 杂交 | 第158-159页 |
| ·Real-Time PCR | 第159页 |
| 第三节 结果与分析 | 第159-170页 |
| ·启动子 BCSP952 的缺失分析 | 第159-164页 |
| ·BCSP952 启动子 5’端缺失的植物表达载体的构建 | 第160-161页 |
| ·农杆菌的转化与鉴定 | 第161-162页 |
| ·拟南芥的转化与筛选鉴定 | 第162页 |
| ·转基因拟南芥的 GUS 活性检测 | 第162-164页 |
| ·启动子 BCSP952 的改造 | 第164-170页 |
| ·BCSP952 启动子的改造及其植物表达载体的构建 | 第164-165页 |
| ·农杆菌的转化与鉴定 | 第165-167页 |
| ·拟南芥的转化与筛选鉴定 | 第167页 |
| ·转基因拟南芥的 GUS 活性检测 | 第167-169页 |
| ·转基因拟南芥的 Southern 杂交分析 | 第169-170页 |
| ·转基因拟南芥中 GUS 的表达分析 | 第170页 |
| 第四节 讨论 | 第170-175页 |
| ·启动子 BCSP952 缺失突变分析 | 第170-172页 |
| ·启动子 BCSP952 的改造 | 第172-175页 |
| 第五节 小结 | 第175-177页 |
| ·BCSP952 缺失突变分析 | 第175页 |
| ·BCSP952 的改造 | 第175-177页 |
| 第五章 结论与展望 | 第177-180页 |
| ·结论 | 第177-178页 |
| ·主要创新点 | 第178页 |
| ·相关工作的前景展望 | 第178-180页 |
| 参考文献 | 第180-198页 |
| 致谢 | 第198-200页 |
| 个人简历 在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第200-202页 |
