| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 目录 | 第10-13页 |
| 插图和附表清单 | 第13-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-22页 |
| ·鲢的生物学特性 | 第14页 |
| ·鱼类低氧胁迫相关研究进展 | 第14-21页 |
| ·低氧胁迫对鱼类生理生化的影响 | 第14-15页 |
| ·低氧胁迫相关基因的研究 | 第15-16页 |
| ·鱼类的IGFs信号系统 | 第16-19页 |
| ·IGF-Ⅰ | 第16-17页 |
| ·IGFBP-1 | 第17-19页 |
| ·结构蛋白α-tubulin和α-actin与低氧胁迫的相关研究 | 第19-21页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 鲢低氧胁迫相关基因的克隆及表达分析 | 第22-66页 |
| ·材料和方法 | 第22-31页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·常用试剂配方 | 第23页 |
| ·RNA的提取和cDNA第一链的合成 | 第23-24页 |
| ·总RNA的提取 | 第23-24页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第24页 |
| ·引物设计 | 第24-26页 |
| ·鲢IGFBP-1、α-tubulin、α-actin cDNA中间片段的克隆 | 第26页 |
| ·鲢IGFBP-1、α-tubulin、α-actin cDNA末端片段的克隆 | 第26-28页 |
| ·获得第一链cDNA | 第27页 |
| ·PCR反应 | 第27-28页 |
| ·鲢IGF-Ⅰ全长ORF的克隆 | 第28页 |
| ·PCR产物回收 | 第28页 |
| ·测序 | 第28-29页 |
| ·PCR产物的连接反应 | 第28-29页 |
| ·转化 | 第29页 |
| ·菌液PCR的检测 | 第29页 |
| ·DNA序列测定与分析 | 第29-30页 |
| ·鲢IGFBP-1、α-tubulin、α-actin的组织表达特性分析 | 第30页 |
| ·鲢急性低氧胁迫下IGFBP-1、IGF-1、α-tubulin、α-actin转录水平的表达分析 | 第30-31页 |
| ·IGFBP-1和IGF-Ⅰ的ELISA测定 | 第31页 |
| ·数据处理方法 | 第31页 |
| ·结果与分析 | 第31-61页 |
| ·鲢IGFBP-1基因全长cDNA的克隆及表达特性分析 | 第31-41页 |
| ·鲢IGFBP-1基因的全长cDNA | 第31-33页 |
| ·鲢与其他物种IGFBP-1氨基酸序列多重比对分析 | 第33-35页 |
| ·鲢IGFBP-1编码蛋白的分子量、等电点、信号肽的分析 | 第35-36页 |
| ·鲢IGFBP-1保守结构域及三维结构分析 | 第36-37页 |
| ·鲢IGFBP-1系统进化树分析 | 第37-38页 |
| ·鲢IGFBP-1的组织分布 | 第38-39页 |
| ·鲢IGFBP-1 mRNA在低氧胁迫下的表达变化 | 第39-40页 |
| ·鲢肝脏中IGFBP-1蛋白在低氧胁迫下的表达变化 | 第40-41页 |
| ·鲢IGF-Ⅰ基因开放阅读框(ORF)的获得及表达特性分析 | 第41-48页 |
| ·鲢IGF-Ⅰ最大开放阅读框的获得 | 第41页 |
| ·鲢与其他物种IGF-Ⅰ氨基酸序列多重比对分析 | 第41-44页 |
| ·鲢IGF-Ⅰ编码蛋白的分子量、等电点、信号肽的分析 | 第44页 |
| ·鲢IGF-Ⅰ保守结构域及三维结构分析 | 第44-45页 |
| ·鲢IGF-Ⅰ系统进化树分析 | 第45-46页 |
| ·鲢IGF-ⅠmRNA在低氧胁迫下的表达变化 | 第46-47页 |
| ·鲢肝脏中IGF-Ⅰ蛋白在低氧胁迫下的表达变化 | 第47-48页 |
| ·鲢α-tubulin基因全长cDNA的克隆及表达特性分析 | 第48-54页 |
| ·鲢α-tubulin基因全长cDNA的获得 | 第48-50页 |
| ·鲢与其他物种α-tubulin氨基酸序列多重比对分析 | 第50-51页 |
| ·鲢α-tubulin编码蛋白的分子量、等电点、信号肽的分析 | 第51页 |
| ·鲢α-tubulin保守结构域及三维结构分析 | 第51-52页 |
| ·鲢α-tubulin系统进化树分析 | 第52-53页 |
| ·鲢α-tubulin的组织分布 | 第53页 |
| ·鲢α-tubulin在急性低氧胁迫下的表达变化 | 第53-54页 |
| ·鲢α-actin基因全长cDNA的克隆及表达特性分析 | 第54-61页 |
| ·鲢α-actin基因全长cDNA的获得 | 第54-55页 |
| ·鲢与其他物种α-actin氨基酸序列多重比对分析 | 第55-57页 |
| ·鲢α-actin编码蛋白的分子量、等电点、信号肽的分析 | 第57-58页 |
| ·鲢α-actin保守结构域及三维结构分析 | 第58页 |
| ·鲢α-actin系统进化树分析 | 第58-59页 |
| ·鲢α-actin的组织分布 | 第59-60页 |
| ·鲢α-actin在急性低氧胁迫下的表达变化 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61-66页 |
| ·鲢IGFBP-1的结构特征及其在低氧胁迫中可能的作用机制 | 第61-64页 |
| ·鲢α-tubulin、α-actin mRNA的结构特征及在低氧胁迫中可能的作用机制 | 第64-66页 |
| 第三章 鲢IGF-Ⅰ原核表达载体的构建及表达 | 第66-74页 |
| ·材料和方法 | 第66-69页 |
| ·材料 | 第66页 |
| ·主要试剂及菌株 | 第66页 |
| ·质粒提取 | 第66-67页 |
| ·扩增鲢IGF-Ⅰ成熟肽引物的设计及扩增 | 第67-68页 |
| ·鲢IGF-Ⅰ基因原核表达载体的构建与鉴定 | 第68页 |
| ·鲢IGF-Ⅰ基因原核表达载体的构建 | 第68页 |
| ·鲢IGF-1基因原核表达载体的鉴定 | 第68页 |
| ·鲢IGF-Ⅰ基因的体外表达 | 第68-69页 |
| ·诱导时间的优化 | 第68-69页 |
| ·IPTG浓度的优化 | 第69页 |
| ·鲢IGF-Ⅰ融合蛋白的电泳检测 | 第69页 |
| ·结果与分析 | 第69-71页 |
| ·鲢IGF-Ⅰ成熟肽的获得 | 第69页 |
| ·鲢IGF-Ⅰ重组质粒的鉴定 | 第69-70页 |
| ·鲢IGF-Ⅰ基因的体外表达 | 第70-71页 |
| ·诱导时间的优化 | 第70页 |
| ·IPTG浓度的优化 | 第70-71页 |
| ·讨论 | 第71-74页 |
| 第四章 总结与展望 | 第74-76页 |
| ·总结 | 第74-75页 |
| ·展望 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-88页 |
| 硕士期间发表论文及申报专利目录 | 第88页 |
