| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1. 前言 | 第10-18页 |
| ·天然橡胶生产所面临的现状 | 第10页 |
| ·橡胶树胶乳化学成分研究概况 | 第10-12页 |
| ·巴西橡胶树橡胶生物合成途径 | 第10-11页 |
| ·胶乳中其他非橡胶成分的研究 | 第11-12页 |
| ·植物萜类化合物研究进展 | 第12-14页 |
| ·萜类化合物的种类及应用 | 第12-13页 |
| ·萜类的代谢途径 | 第13-14页 |
| ·巴西橡胶树中重要萜类化合物研究进展 | 第14页 |
| ·角鲨烯研究概况 | 第14页 |
| ·β-谷甾醇的研究概况 | 第14页 |
| ·会合欢醇的研究概况 | 第14页 |
| ·鲨烯合成酶的研究概况 | 第14-17页 |
| ·鲨烯合酶的分离纯化及结构性质 | 第14-15页 |
| ·鲨烯合酶的反应机理 | 第15页 |
| ·鲨烯合酶基因的克隆 | 第15-17页 |
| ·鲨烯合酶基因表达研究进展 | 第16-17页 |
| ·鲨烯合酶促进剂研究概况 | 第17页 |
| ·鲨烯合酶抑制剂研究概况 | 第17页 |
| ·研究的目的及意义 | 第17-18页 |
| ·研究的技术路线 | 第18页 |
| 2. 材料与方法 | 第18-36页 |
| ·材料与试剂 | 第18-19页 |
| ·材料 | 第19页 |
| ·质粒与菌种 | 第19页 |
| ·主要试剂及来源 | 第19页 |
| ·方法与步骤 | 第19-36页 |
| ·巴西橡胶树RNA提取及检测 | 第19-22页 |
| ·准备事项 | 第19-20页 |
| ·橡胶树RNA提取 | 第20-21页 |
| ·RNA甲醛变性凝胶电泳检测 | 第21页 |
| ·RNA浓度测定 | 第21页 |
| ·叶片RNA中DNA的消化 | 第21-22页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第22页 |
| ·巴西橡胶树SQS基因部分片段的获取 | 第22-25页 |
| ·PCR扩增产物回收 | 第23-24页 |
| ·目的片段与载体连接 | 第24页 |
| ·转化 | 第24页 |
| ·单克隆菌株的PCR检测 | 第24-25页 |
| ·3'RACE扩增和全长编码序列克隆 | 第25-26页 |
| ·3'RACE扩增 | 第25页 |
| ·cDNA全长编码序列克隆 | 第25-26页 |
| ·HbSQS基因表达分析 | 第26-27页 |
| ·乙烯利处理 | 第26页 |
| ·不同组织橡胶树材料采集 | 第26页 |
| ·荧光定量具体操作步骤 | 第26-27页 |
| ·HbSQS基因的原核表达 | 第27-30页 |
| ·开放阅读框(ORF)的获取 | 第27-28页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第28-29页 |
| ·工程菌的表达 | 第29-30页 |
| ·蛋白的纯化与鲨烯合酶活性测定 | 第30-32页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第30-31页 |
| ·鲨烯合酶活性测定 | 第31-32页 |
| ·HbSQS基因的真核表达 | 第32-36页 |
| ·真核表达片段的获取 | 第32页 |
| ·真核表达载体pCXSN的酶切 | 第32页 |
| ·真核载体与目的片段的连接 | 第32-33页 |
| ·重组子的筛选 | 第33页 |
| ·农杆菌EH105感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| ·HbSQS基因正反义重组载体电击转化农杆菌EH105菌株 | 第34页 |
| ·潮霉素浓度筛选 | 第34页 |
| ·正反义载体转化烟草 | 第34-35页 |
| ·转基因烟草的检测 | 第35-36页 |
| 3. 结果与分析 | 第36-53页 |
| ·橡胶树胶乳及叶片树皮总RNA的提取 | 第36-37页 |
| ·巴西橡胶树SQS基因的克隆 | 第37-38页 |
| ·巴西橡胶树SQS基因部分片段的获取 | 第37页 |
| ·巴西橡胶树SQS基因3’端扩增 | 第37-38页 |
| ·巴西橡胶树SQS基因全长cDNA的获取 | 第38页 |
| ·巴西橡胶树SQS基因的生物学信息分析 | 第38-45页 |
| ·HbSQS基因编码区氨基酸序列推导及理化性质分析 | 第39页 |
| ·巴西橡胶树SQS蛋白亲水性及疏水性分析 | 第39-40页 |
| ·巴西橡胶树SQS基因的跨膜区预测 | 第40-41页 |
| ·巴西橡胶树SQS亚细胞定位 | 第41页 |
| ·巴西橡胶树SQS结构分析 | 第41-42页 |
| ·巴西橡胶树SQS蛋白三级结构预测 | 第42-43页 |
| ·不同物种的SQS基因同源性分析 | 第43-45页 |
| ·SQS系统进化分析 | 第45页 |
| ·巴西橡胶树SQS基因的表达分析 | 第45-46页 |
| ·叶片发育不同时期及树皮中SQS表达量变化 | 第45-46页 |
| ·乙烯利处理对HbSQS基因表达影响 | 第46页 |
| ·His-HbSQS融合蛋白的原核表达 | 第46-49页 |
| ·跨膜区对表达情况的影响 | 第47页 |
| ·不同温度对380-HbSQS-pET-28a(+)表达的影响 | 第47-48页 |
| ·不同IPTG浓度对380-HbSQS-pET-28a(+)表达的影响 | 第48页 |
| ·诱导时间对380-HbSQS-pET-28a(+)表达的影响 | 第48-49页 |
| ·His-HbSQS融合蛋白的纯化 | 第49-50页 |
| ·鲨烯合酶活性测定 | 第50页 |
| ·真核表达 | 第50-53页 |
| ·巴西橡胶树SQS基因正、反义表达载体转农杆菌PCR验证 | 第50-51页 |
| ·巴西橡胶树SQS基因转化烟草以及转基因烟草的检测 | 第51-53页 |
| 4. 讨论 | 第53-56页 |
| 5. 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 附录 | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
